高效液相色谱法测定荜茇止痛酊中胡椒碱的含量

1、高效液相色谱法测定荜茇止痛酊中胡椒碱的含量【摘要】目的建立荜茇止痛酊中胡椒碱的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,18色谱柱,四氢呋喃-甲醇-水(vvv303050)为流动相,流速为1.0l/in,柱温为室温,检测波长为343n,进样10l,以外标法计算含量。结果胡椒碱在8.341.5g/l内峰面积与对照品质量浓度呈良好线性关系,其回归方程为：a34131867467.7,r0.9998；其平均回收率为99.7%,rsd1.8%(n6)。结论该方法简便,重复性好,空白无干扰,可有效地控制荜茇止痛酊制剂的质量。【关键词】荜茇止痛酊；胡椒碱；高效液相色谱法abstrat：bjetivetesta

2、blishtheethdfntentdeterinatinfpiperineinbibazhitngtinture.ethdshplasadptedindeteriningthententfpiperineinbibazhitngtinture.18hratgraphilunasusediththelunteperaturebeingtherteperature.thebilephaseastetrahydrfuran-ethanl-ater(vvv303050)iththevelityf1.0l/in.thedetetinavelengthas343n,andthesaplingvlueas

3、10l.externalstandardethdashsenfrntentalulatin.resultstheinnerpeakareafpiperine(8.341.5g/l)shedfinelinearrelatinithassnentratinfntrlgrup.itsregressinequatinasa34131867467.7,r0.9998,iththeaveragereveryratinbeing99.7%,andrsd1.8%(n6).nlusintheethdissiple,nvenient,gdreprduibilityandnn-interferene,andanef

4、fetivelyntrlthequalityfthepreparatin.keyrds：bibazhitngtinture；piperine；hpl荜茇止痛酊由荜茇、细辛和花椒等6味中药组成,具有祛风散寒止痛的成效,临床用于治疗风寒牙痛。本制剂消费采用提取挥发油,水煮醇沉等工艺加工制成。荜茇为方中君药,其主要有效成分为胡椒碱,2022版?中华人民共和国药典?(一部)采用内标法测定荜茇中胡椒碱的含量1,文献报道胡椒碱的含量测定方法有高效液相色谱法2-4。本试验采用改良四氢呋喃-甲醇-水系统为流动相,外标法测定胡椒碱的含量,较适用于本中药复方制剂复杂成分的别离,有效控制荜茇止痛酊的质量。1仪器与试

5、药高效液相色谱仪(日本岛津)l-6a,包括：spd-6av检测器,-r4a数据处理机。胡椒碱(批号0775-9702,由中国药品生物制品检定所提供,纯度为98.79%)；荜茇止痛酊(批号041212、041216、041220,无锡山禾药业股份消费)。甲醇、乙腈为色谱醇,无水乙醇为分析醇,水为熏蒸水。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：18柱(4.6250,10),大连依科特科学仪器；流动相：四氢呋喃-甲醇-水(vvv303050)；流速：1.0l/in；检测波长：343n；柱温：室温；别离度：r1.5；理论板数按胡椒碱峰计算应大于1500。2.2检测波长的选择对胡椒碱的乙醇溶液进展紫外区扫描,

6、结果胡椒碱在343n处有最大吸收,应选用343n作为检测波长。2.3流动相的选择曾试验4种流动相：甲醇-水(7723)；乙腈-水(7030)；乙腈-0.05l/l磷酸二氢钠溶液(7030),用磷酸调节ph为3.5、3.1；四氢呋喃-甲醇-水(303050),其中使胡椒碱峰与杂质峰别离效果好,能基线别离。2.4溶液的制备对照品溶液的制备：精细称取胡椒碱对照品10g,置50l棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀。精细量取5l,置50l棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1l中含胡椒碱20g)。供试品溶液的制备：精细量取荜茇止痛酊1l,置25l棕色量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,于冰箱中冷

7、藏1.5h,取出,放置至室温,滤过,取续滤液5l,置25l棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。阴性对照液的制备：按处方中药味的比例自配不含荜茇的群药,按其工艺制成阴性制剂,再按供试品溶液制备方法制成空白溶液,即得。2.5阴性液干扰试验精细汲取供试品溶液、阴性液和对照品溶液各10l注入色谱仪中,由色谱图可知,在与对照品色谱峰保存时间相应的位置上,供试品溶液具有一样保存时间的色谱峰出现；而阴性液在此峰位无吸收,对本品中胡椒碱的含量测定无干扰,色谱图见图1。2.6线性关系的考察精细汲取胡椒碱对照品(10.38g50l)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0l,分别置25l棕色量瓶中,加乙醇稀释

8、至刻度,摇匀,分别精细汲取10l,注入高效液相色谱仪,记录峰面积。以对照品的含量对峰面积值作图,得到一个通过原点的直线,并绘制标准曲线。结果说明,胡椒碱在8.341.5g/l范围内峰面积与对照品质量浓度呈良好线性关系,其回归方程为：a34131867467.7,r0.9998。2.7精细度试验精细汲取同一供试品溶液(批号041212),重复进样5次,求得rsd0.93%。2.8稳定性试验精细汲取同一供试品溶液(批号041212),分别于配制后0、2、4、8、16、24h测定色谱峰面积,计算rsd为1.2%,结果说明,其在24h内根本稳定。2.9回收率试验精细汲取含量的同一批号(批号041212

9、)样品0.5l,分别精细参加胡椒碱对照品乙醇溶液,依法测定,结果平均回收率为99.97%,rsd1.8%(n6)。见表1。表1加样回收率试验结果略2.10样品中胡椒碱含量测定取3批荜茇止痛酊样品,照“2.4项测定,结果见表2。表2样品含量测定结果(略)3讨论本实验采用高效液相色谱法内标法和外标法2种方法进展荜茇药材中胡椒碱含量的比照试验,结果显示,2种方法测定结果根本一样。2022年版?中华人民共和国药典?采用内标法测定含量,结果准确,但鉴于中药复方制剂成分复杂,采用内标法时别离度难以满足要求,因此,本实验研究采用外标法更为实际、可行。由于荜茇止痛酊所含成分复杂,给含量测定带来一定的困难。我们在样品前处理采用无水乙醇稀释、冰箱中静置除去杂质的方法,使样品得到净化,可满足含量测定的要求,且重现性好。【参考文献】1国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)s.北京：化学工业出版社,2022.163.2陶淑娟,王桂燕,毕开顺.hpl