农药残留分析法

1、农药残留分析方法高效薄层色谱法21薄层色谱法一、定义将固定相(如硅胶)薄薄地均匀涂敷在底板(或棒)上，试样点在薄层一端，在展开罐内展开，由于各组分在薄层上的移动距离不同，形成互相分离的斑点，测定各斑点的位置及其密度就可以完成对试样的定性、定量分析的色谱法。 2薄层色谱法薄层色谱法（TLC），系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，根据比移值（Rf）与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值（Rf）作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。3薄层色谱法二、基本原理薄层色

2、谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在移动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。 4薄层色谱法薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂）、薄层分配层析（纤维素）、薄层离子交换层析（离子交换剂）、薄层凝胶层析（分子筛凝胶）等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。 5薄层色谱法吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可以形成表面，吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上

3、，都可能发生吸附现象。 物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为固体表面的分子（离子或原子）和固体内部分子所受的吸引力不相等。6薄层色谱法三、仪器和材料 载板 变色硅胶用以涂布薄层用的载板有玻璃板、铝箔及塑料板，对薄层板的要求是：需要有一定的机械强度及化学惰性，且厚度均匀、表面平整，因此玻璃板是最常用的。载板可以有不同规格，但最大不得超过2020，玻璃板在使用前必须洗净、干燥备用。玻板除另有规定外，用5cm20cm，10cm20cm或20cm20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 7薄层色谱法 固定相（吸附剂）或载体 薄层层析硅胶 薄层层析硅胶最常用的有硅胶G、硅胶GF254、

4、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求直径为1040m。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用1015%煅石膏（CaSO4.2H2O在140烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.50.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或缓冲液的薄层。 8薄层色谱法 涂布器 薄层层析硅胶应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 点样器 定性：内径为0.5mm管口平整的普通毛细管。 定量

5、：微量注射剂。 点样直径不超过5mm，点样距离一般为11.5cm即可。 展开室 应使用适合载板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。9薄层色谱法四、操作1、薄层板制备除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.20.3mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。 10薄层色谱法手工制板一般分不含粘合剂的软板和含粘合剂的硬板俩种。薄层板的活化：硅胶板于1

6、05-11烘30分钟，氧化铝板于150-160烘4小时，可得活性的薄层板。11薄层色谱法2、点样除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 点样直径不超过5mm，点样距离一般为11.5cm即可。 样品在溶剂中的溶解度很大，原点将呈空心环环形色谱效应。因此配制样品溶液时应选择对组分溶解度相对较小的溶剂。 点样方式有点状点样和带状点样。12薄层色谱法样品在溶剂中的溶解度很大，原点将呈空心环环形色谱效应。因此配制样品溶液时应选择对组分溶解度相对较小的溶剂。 点样方式

7、有点状点样和带状点样。13薄层色谱法3、展开展开剂也称溶剂系统，流动性或洗脱剂，是在平面色谱中用作流动相的液体。展开剂的主要任务是溶解被分离的物质，在吸附剂薄层上转移被分离物质，使个组分的Rf值在0.20.8之间并对被分离物质要有适当的选择性。作为展开剂的溶剂应满足以下要求：适当的纯度、适当的稳定性、低黏度 、线性分配等温线、很低或很高的蒸气压一级尽可能低的毒性。 14薄层色谱法展开方式总的来讲平面色谱的展开有线性、环形及向心3种几何形式。影响展开的因素有 A 相对湿度的影响 B 溶剂蒸汽的影响（a 展开室的饱和b预吸附） C 温度的影响 D 展距的影响与分离度仅正比与展距的平方根。15薄层色谱法4、显色A 光学检出法 a 自然光（400800nm） b 紫外光（254nm或365nm） c 荧光 一些化合物吸收了较短波长的光，在瞬间发射出比照射光波长更长的光，而在纸或薄层上显出不同颜色的荧光斑点（灵敏度高、专属性高） B 蒸汽显色法 显色C 物理显色法 D