海风藤酮治疗大鼠实验性急性胰腺炎

1、海风藤酮治疗大鼠实验性急性胰腺炎【关键词】胰腺炎；血小板活化因子；海风藤酮；肿瘤坏死因子；白细胞介素Rlefkadsurenneintreatentfexperientalautepanreatitisinrats【Abstrat】AI:Texplretheeffetfkadsurenneninflaatryediatrsinratsduringautepanreatitis(AP).ETHDS:Attalf104SDaleratshihEighed250-300gererandlydividedintshagrup(n=24),APgrup(n=40)andkadsurennegrup(n=

2、40).Theanialsinthegrupserekilledin3,6,12,24hafterperatinfrexperientalbservatin.RESULTS:TheserulevelsfPAF,TNFandIL6fAPratssignifiantlyinreasedP0.01,andtheserulevelfTNFgttapeakat6handtheseruIL6at12hafterperatin(P0.01vsshagrupineahperidftie).AfterkadsurenneasusedinAPrats,theserulevelsfPAF,TNFandIL6eres

3、ignifiantlydereasedP0.05.NLUSIN:KadsurenneaninhibitinflaatryediatrsandrelievethedaagesfthepanreasrlunginAPrats.【Keyrds】panreatitis;plateletativatingfatr;kadsurenne;turnersisfatr;IL6【摘要】目的：讨论海风藤酮对急性胰腺炎炎症介质的影响及其治疗作用.方法：雄性SD大鼠104只，质量250300g，随机分为假手术对照组n=24，急性胰腺炎组(n=40)和海风藤酮治疗组(n=40)，每组又按3，6，12，24h分为4小组.

4、结果：急性胰腺炎组各时段血清PAF，TNF，IL6显著升高，其中PAF在各时相持续升高，TNF在6h时达顶峰，而IL6在12h达顶峰，与假手术组各个时相段比拟有显著性差异P0.01；用药后治疗组各个时相段可显著降低血清PAF，TNF，IL6的程度P0.05.结论：海风藤酮可抑制炎症介质，明显减轻胰腺/肺组织病理损害.【关键词】胰腺炎；血小板活化因子；海风藤酮；肿瘤坏死因子；白细胞介素60引言急性胰腺炎(autepanreatitis，AP)是严重危害人类安康的急腹症，病死率高、发病机制复杂，有多种因素及炎性因子参与救治难度大.细胞因子及炎性递质在AP的发生开展中起重要作用1-2.海风藤酮kad

5、surenne是中药海风藤的提取物，我们研究海风藤酮对急性胰腺炎合并肺损伤大鼠炎症介质PAF，TNF，IL6的影响，为讨论该药在临床上应用治疗AP的可能性提供理论和实验根据.1材料和方法1.1材料雄性SpraqueDaleySD大鼠104只，体质量250300g，购自西安交通大学实验动物中心.实验动物实验前禁食12h，自由进水.海风藤酮共150g购自北京大学药学院，牛磺胆酸钠购自Siga公司，髓过氧化物酶P测定试剂盒购自南京建成生物公司，PAF标准品购自Siga公司，大鼠IL6ELISA试剂盒购自Siga公司，大鼠TNFELISA试剂盒购自Siga公司.1.2方法采用随机数字把104只大鼠分为

6、3组，分别为假手术对照组(n=24)，急性胰腺炎AP组(n=40)，海风藤酮治疗组(n=40)，每组又按术后3，6，12，24h平均分为4个小组.第1组大鼠术前12h禁饮食，氯胺酮ip麻醉1.5L/kg，仰卧固定，剪毛后常规消毒、铺巾，腹正中开腹，细微刺激胰胆管后，关腹；第2组采用张群华等3的方法制备AP模型；第3组制模术后立即经阴茎静脉注入海风藤酮，每6h，10g/kg，12次.由于海风藤酮均以DS(25g/L)为溶剂，故假手术组及AP模型组均于术后经阴茎静脉注射等量的DS.3组大鼠分别在术后3，6，12，24h，氯胺酮ip麻醉1.5L/kg，仰卧固定，剪毛常规消毒、铺巾，开腹.经下腔静脉抽

7、血48L，不加抗凝剂，凝血后离心3000r/in，18，10in，取血清1.53L(-80)保存，留待进展生物法检测血小板活化因子、ELISA检测TNF及IL6及全自动生化仪检测血清淀粉酶.同步取胰腺组织和肺组织，部分制成组织匀浆，测定髓过氧化物酶P的活性，部分用Buin液固定，石蜡包埋、切片，HE染色，光镜下观察胰腺及肺的炎症病理变化.统计学处理：采用SPSS12.0frinds软件包进展统计分析，实验数据以xs表示；组间比拟用非参数秩和检验，P0.05为差异有统计学意义.2结果2.1血清淀粉酶活性AP组血清淀粉酶显著升高，到12h时达顶峰，与假手术组相比拟有统计学差异P0.01；治疗组与A

8、P组各时相段比拟可降低血清淀粉酶，差异有统计学意义P0.05，但仍高于假手术组各时相段P0.05，表1.表1AP大鼠血清淀粉酶浓度的变化略aP0.05,bP0.01vsAP.2.2胰肺组织P活性采用单因素方差分析：假手术组各时相段胰腺及肺组织P活性相比拟无统计学差异P0.05；注射35g/L牛磺胆酸后，AP组、治疗组胰腺及肺组织P活性显著升高，到12h时达顶峰，与假手术组相比拟有统计学差异P0.01；给药后3，6，12及24h时，海风藤酮治疗组与AP组组间比拟差异有统计学意义P0.05或0.01.说明海风藤酮可显著降低胰腺及肺组织P活性表2.表2AP大鼠胰腺及肺组织P活性的变化略aP0.05v

9、sAP.2.3血清PAF，TNF，IL6AP组各时段血清PAF，TNF，IL6升高，其中PAF持续升高，TNF在6h时达顶峰，而IL6在12h达顶峰，与假手术组各个时相段比拟有统计学差异P0.01；用药后治疗组与AP组比拟各个时相段可降低血清PAF，TNF，IL6的程度P0.05，表3.表3血清中PAF,TNF,IL6的变化略aP0.05vsAP.2.4胰肺病理组织学假手术组大鼠胰腺/肺组织未见明显病理改变.AP组3h后胰腺水肿加重，于12h达顶峰，腺泡呈孤岛样分布，片状出血坏死，大量PN浸润；6，12h肺以PN增多为主，肺泡间隔增厚，可见少量红色蛋白渗出物，并可见肺泡壁破裂，肺间质充血、水肿

10、、明显增宽，肺泡和肺间质中有大量的中性粒细胞浸润.用药后，可显著减轻胰腺/肺组织的病理损害，炎性细胞浸润减少，水肿、出血、坏死减轻，表现为点状坏死.3讨论AP发病机制非常复杂，早期胰腺细胞损伤导致部分的炎症反响，随着疾病进展，就会引起全身炎症反响综合征STRS严重时可出现多脏器功能不全DS甚至多脏器功能衰竭F，病死率常高达40%4-5.胰腺腺泡损伤后，释放多种受激活的胰酶及炎症细胞因子，有多种细胞的过度激活和互相作用，产生氧自由基和炎症介质引起胰腺的血管通透性增加，最后导致了胰腺炎的发生.目前研究说明，重症急性胰腺炎相关肺损伤也与胰酶异常激活和释放、炎性细胞过度激活、炎症介质的释放致个身STR

11、S等有关6.我们证实注射牛磺胆酸后，AP组各时段血清PAF显著持续升高，到24h时达顶峰，与假手术组对应时相段比拟有统计学差异P0.01，假手术组各个时相段血清PAF相比拟无统计学差异P0.05.提示PAF和其他的炎性细胞因子如TNF,IL6一起在AP中起着重要作用.治疗组与AP组相应时相段比拟有统计学差异P0.01，说明海风藤酮可以抑制血清PAF,TNF及IL6的程度.相关性也说明血清PAF变化与胰腺组织P活性、胰腺组织形态学改变呈正相关；血清PAF变化与肺组织P活性、肺组织形态学改变呈正相关.PAF拮抗剂海风藤酮治疗AP的主要作用机制可能有7-8：与PAF竞争靶位，抑制PAF活性的发挥；抑

12、制AP血中PAF含量的升高；抑制巨噬细胞、淋巴细胞及内皮细胞产生TNF,IL6,IL8等炎性细胞因子和炎性递质；抑制中性粒细胞活性，降低髓过氧化酶；减低血管通透性，进步微循环的血流速度；降低胰酶活性，减轻胰腺组织自我消化等作用机制.PAF是通过多种效应、多个环节参与AP的发生开展，已日益受到关注，而且阻断PAF治疗AP的研究也获得了可喜的成绩，本实验应用特异性PAF抑制剂海风藤酮来治疗AP，是第一次系统的在炎症介质程度上理解海风藤酮对AP的影响.目前尚未见临床报道，为说明AP的发病机制和治疗AP提供了理论和实验根据.【参考文献】1KatsuK,ShisegaaT,Uhi,etal.Erythr

13、pietiprtprphyriaithsevereliverdysfuntinandautepanreatitisJ.JGastrenterl,2000,35:391-395.2AbuZidanF,BnhaJ,indsrJA.Severityfautepanreatitis:aultivariateanalysisfxidativestressarkersanddifiedGlasgriteriaJ.BrJSurg,2000,87:1019-1023.3张群华,蔡瑞,吴树强,等.急性坏死性胰腺炎大鼠的炎性介质变化和生长抑素的作用J.中华医学杂志,1997,77:355-358.4Bhatia.

14、NveltherapeutitargetsfrautepanratitisandassiatedultiplergandysfuntinsyndreJ.urrDrugTardtsInflanAllergy,2002,1(4):343.5RaratyG,nnrS,GriddleDN,etal.Autepanratitisandrganfailure:pathphysilgy,naturalhistryandanageentstrategiesJ.urrGastrenterlRep,2022,6(2):99-103.6atherineP,ihaelA,JeanLF.PanreatitisassiatedautelunginjuryneinsightsJ.hest，2022,124:2341-2351.7LuksEB,QayuiAK,GdinDV,etal.Therapeutiptentialfplatele