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文档简介
1、实验八 放线菌形态的观察实验目的:掌握观察放线菌形态的基本方法,并观察放线菌的形态特征。实验原理:放线菌是指能形成分枝丝状体或者菌丝体的一类革兰氏阳性菌,常见的放线菌大多能形成菌丝体,紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝(简称基丝),基丝长到一定程度还能向空气中生长出气生菌丝(简称气丝),并进一步分化产生孢子丝以及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气丝。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据观察放线菌的形态特征常用扦片法、玻璃纸法、印片法。实验器材:1.菌种 细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)或青色链霉菌(Streptomyce
2、s glaucus),弗氏链霉菌(S. glaucus)。2.培养基 菌的高氏号琼脂3.仪器或其他用具 灭菌的平皿,玻璃管,盖玻片,玻璃棒,以及载玻片,接种环,接种铲,镊子,显微镜等。实验内容:1. 放线菌自然生长状态的观察 (1) 将灭菌后的高氏1号培养基倒入培养皿,每皿倒15ml左右,凝固后备用。 (2) 用经火焰灭过菌的小镊子将灭菌过的优质玻璃纸平铺在平皿培养基上,如果琼脂培养基和玻璃纸之间有气泡,可以用灭过菌的玻璃棒将气泡除去。 (3) 将35ml无菌水倒入链霉菌的斜面培养物里,制成菌悬液,再适当稀释。 (4) 用无菌吸管取0.1ml的孢子悬液稀释液,接种在玻璃纸上,并用无菌玻璃棒涂匀
3、后,置28培养,直到菌长好,备用。 (5) 在洁净的载玻片上滴一小滴水,稍涂布。取出培养皿,打开皿盖,用镊子将玻璃纸与培养基分开,再用剪刀剪取小片长有菌的玻璃纸,菌面朝上放在载玻片的水面上,使纸平贴在载玻片上。 (6) 将载玻片置显微镜下观察。附:玻璃纸灭菌方法 在玻璃纸灭菌时,若直接将干燥的玻璃纸灭菌,它会缩小,发皱,不便使用。故需作如下处理:将玻璃纸和滤纸剪成培养皿大小的圆形纸片,用水浸泡后把湿滤纸和玻璃纸交互重叠地放在培养皿中,借滤纸将玻璃纸隔开。然后进行湿热灭菌,备用。2. 营养菌丝的观察 (1) 用接种铲连同培养基挑取细黄链霉菌菌苔置载玻片中央。 (2) 用另一载玻片将其压碎,弃去培
4、养基,制成涂片,干燥,固定。 (3) 用吕氏碱性美蓝染液或石炭酸复红染液染0.5-1分钟,水洗。 (4) 干燥后,用油镜观察营养菌丝的形态。3. 气生菌丝与营养菌丝的比较观察。 (1) 将高氏号培养基倒入无菌培养皿,制成4mm左右的培养基平板,经培养后无菌,备用。 (2) 用火焰灭菌的镊子将无菌盖玻片以45度倾斜角插入平皿培养基琼脂内,然后将细黄链霉菌的孢子悬液(浓度以稀释10-210-3为好),接种在盖玻片与平皿培养基的界面上。 (3) 倒置于28培养45天后,小心的将盖玻片取出,把有菌的一面朝上,放在载玻片上,置显微镜下进行观察。一般情况是气生菌丝颜色较深,并比营养菌丝粗二倍左右。4. 孢
5、子丝及孢子的观察 (1) 将培养34天的细黄链霉菌的培养皿打开,放在显微镜低倍镜下寻找菌落的边缘,直接观察气生菌丝和孢子丝的形态,注意分枝情况、卷曲情况等。 (2) 取清洁的盖玻片一块,在菌落上面轻轻的按压一下,然后将印有痕迹的一面朝下放在有一滴吕氏碱性美蓝染液的载玻片上,将孢子等印浸在染液中,制成印片。用油镜观察孢子的形态,孢子丝等。 (3) 用小刀切取细黄链霉菌培养物一块(带培养基切下)。菌面朝上放在一载玻片上,另取一洁净载玻片置火焰上微热后,盖在菌苔上,轻轻按压,使培养物(气丝、孢子丝或孢子)印在后一块载玻片的中央,注意不要使培养物在玻片上滑动,否则印痕模糊不清。将制好的印片通过火焰2-3次固定,用石炭酸复红染色1min,水洗,晾干。用油镜观察孢子丝的形态及孢子排列情况。实验报告:
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