传染病病例标本采集和运输课件

1、病原微生物标本的采集、保存及运输方法病原微生物标本的采集标本采集种类血液标本（抗凝血与非抗凝血）呼吸道标本上呼吸道标本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、痰液等）下呼吸道标本（呼吸道抽取物、支气管灌洗液、胸腔积液、肺组织活检标本等）。消化道标本 （粪便和肛拭子）尿液标本其他人体标本 （脑脊液、疱疹液、淋巴结穿刺液等）尸体解剖标本采集媒介和动物标本采集环境标本采集病原微生物标本的采集标本采集中的注意事项采样时生物安全的考虑采样时间及部位采样容器采样标本的标识各种标本的采样方法病原微生物标本的采集采样时间及部位时间:一般在怀疑细菌感染时应尽量在急性发病期和使用抗生素之前采集标本，进行细菌的分离培

2、养，否则这种标本在分离培养时要加药物拮抗剂。作病毒分离和病毒抗原检测的标本，应在发病初期和急性期采样，因为此时病毒在体内大量繁殖，检出率高，病毒分类标本最好在发病12天内采取。部位：根据致病菌在患者不同病期的体内分布和排出部位，采集不同的标本。例如伤寒病人应在发病早期未使用抗生素之前采血培养，在23周时停用抗生素2天后采粪便培养。全病程可做骨髓培养。病原微生物标本的采集采样容器采集标本应使用无菌容器，一个标本一个容器。对容器基本要求是选耐用材料制成，容器包装好后可防渗漏。能承受空中地面运送过程中可能发生的温度和压力变化。病原微生物标本的采集采样标本的标识包括种类、原始采样容器、标本性质、数量、

3、运送人和接受人及其包装日期、运输日期、统一的识别编号及病人联系方式、姓名、检验目的、临床诊断等信息。其他信息如病人信息（年龄、性别、完整地址），临床资料（发病日期、临床症状、治疗史、可疑的发病原因、采样前是否用抗生素），急性或恢复期标本，症状类似病人的其他标本。接收标本的实验室也应记录接收日期和时间、接受标本者的姓名、标本性质和状态等。这些信息都是解释检验结果所必需的。病原微生物标本的采集各种标本的采样方法(1)血液采集全血：作血液病原培养时，严格用无菌穿刺法采静脉血，移入无菌的有螺口的抗凝的容器或培养瓶中送检。采集量为3-5毫升。做核酸检测时，抗凝剂一般使用EDTA-K3或枸橼酸钠，不可用肝

4、素。血清：用于检测IgM的血清一般采于发病1个月内；用于检测IgG的血液应收集两次，第一次于发病初期（13天），越早越好，第二次血样一般在恢复期（第一次采血后34周）。双份血清同时检测，如抗体滴度有4倍以上升高才有意义。 （2）粪便采集：应在急性腹泻期及用药前采集自然排出的粪便。采集时应用灭菌棉拭子多点蘸取患者新鲜排出粪便的脓血、粘液、水样便或稀便部分，采样量一般3-5克。（3）咽拭子：令患者仰头张口，用压舌板压舌，将无菌棉拭子伸入口腔，适度用力拭涂抹咽后壁和两侧扁桃体部位，放入盛有3-5mlHanks液的采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封。病原微生物标本的采集各种标本的采样方法

5、（5）脑脊液：在无菌条件下由腰椎穿刺，用无菌试管收集35ml，（作厌氧培养时标本应注入厌氧瓶内），操作最好在医院内由有经验的医生按腰椎穿刺术进行。（6）疱疹液：可同时采集多个疱疹作为一份标本。先用75%酒精对疱疹周围的皮肤进行消毒，然后用消毒针将疱疹挑破用棉签蘸取疱疹液，迅速将棉签放入盛有3-5mlHanks液中、在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封。病原微生物标本的采集禽流感环境标本采集1、水标本禽类饮用水：在每个笼具旁的饮水槽采集一份饮用水标本,将水槽中的水样用无菌的、一次性的玻璃棒或棉签充分混匀后采集5-10ml置于15ml外螺旋盖的管内。水沟或水池:清洗禽类的污水:病原微生物标本的采

6、集3、粪便标本 从禽舍或环境中采集新鲜禽类粪便样品5g左右，放入含5ml采样液的采样管中，充分混匀。同一地点多份粪便标本可置于同一采样管中。 4、其它标本笼具周围标本（笼具下地面，笼具垫草等）内脏拭子皮毛拭子等。病原微生物标本的保存总原则：根据标本种类及检测内容确定标本的保存方式。用于细菌检测的标本：常需无菌、无抗生素保存，从而能确保目标细菌的存活并抑制其他微生物的过度生长。一般在4 C或室温保存。用于病毒检测的标本：一般应放在保温容器（0C4C）里，不可放置超过2天，如不能立即分离病毒时，应将标本冻存保存。若长期储存，最好在70C冻存。病原微生物标本的保存如怀疑是寄生虫，所取粪便中加入10%

7、福尔马林和PVA防腐剂（充分混合）。用于检测抗原或抗体的标本可在4C8C保存2428h，在20C保存时间更长。检测抗体的血清可在4C保存约一个星期，最长10天；超过一周必须在-20C下冷冻。病原微生物标本的保存实验室必须对所有标本建立追踪系统，此系统中必须严格注明标本基本信息，如标号，标本唯一识别码，采样日期，地点，采样人等；患者的基本信息、临床诊断检测结果，以及实验室检测信息，如检测项目、时间和结果。从而可随时了解标本涞源信息，追踪原始出处。病原微生物标本的包装任何感染性材料的包装和运输都必须遵循WHO对传染性物质和诊断性标本的安全运送指南（WHO，1997）。标准的包装方法和材料应能确保即

8、使在运送中包装意外受损时也能保护人员的安全及标本的完整。因此运送标本时要进行三层包装。病原微生物标本的包装国际民航组织危险品航空安全运输技术细则中将感染性物质分为A和B两类。A类指人感染后发病的可能性大，传染性强，对人群危害性大的烈性感染性物质感染性物质。高度怀疑具有严重危害性的感染性物质感染性物质也属于A类。A类感染性物质感染性物质联合国编号UN2814和UN2900（只导致动物致病）采用P620包装要求。 A类之外，仅具有一般危险性，引起感染的机会较少的感染性物质感染性物质为B类（联合国编号UN3373），采用P650包装要求。A类包装和B类包装区别1A类包装B类包装定义对人或动物致死或永

9、久性致残不符合列入A类标准的感染性物质运输专用名称感染性物质，可感染人的诊断标本或临床标本或生命物质B类英文运输专用名Infectious substance affecing humansBiological substane,category BUN编号UN2814UN3373运输对象名录中规定的第一类、第二类病原微生物及其样本；第三类中包装分类为A类的病原微生物名录中规定的第三类、第四类病原微生物及其样本UN专用标记需要不需要A类感染性物质的包装材料B类感染性物质的包装材料A类感染物质的标识病原微生物标本的实验室间传递应制定对危险材料运输的政策和程序，包括危险材料在实验室内、实验室所在机

10、构内及机构外部的运输，应符合国家和国际规定的要求。应以防止污染人员或环境的方式运输危险材料，并有可靠的安保措施。危险材料应置于被批准的本质安全的防漏容器中运输。病原微生物标本的运输地面运送标本时注意将装有标本的箱子紧紧固定在交通工具上，车上还应备有吸水材料、消毒剂、手套、口罩、护目镜、密封防水的废弃物容器等防护用品。为避免路途颠簸引起标本溶血，可在运送前分离血清。 在国际、国家、商业的有关规定允许下，诊断标本也可空运，应注意规范包装。 病原微生物标本的运输分离培养细菌、病毒的标本大多数要求冷藏运送。脑膜炎球菌等应在35C37C保温运送。血液标本用于细菌、病毒或寄生虫分离时，需低温保存，不能冷冻

11、。用冰块而不是干冰运送。做立克次体类微生物的全血标本要求干冰保存和冷冻运送。检测核酸样品的运送要求低温快速。从标本采集到检测的间隔时间要尽可能短，并尽可能将标本处于冷藏状态。检测前保存时间较长时则需冷冻标本防止核酸降解。可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定可感染人类的高致病性病原微生物（毒）种或样本运输管理规定已于2005年11月24日经卫生部部务会议讨论通过，现予以发布，自2006年2月1日起施行。可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定目的：为加强可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输的管理，保障人体健康和公共卫生，依据中华人民共和国传染

12、病防治法、病原微生物实验室生物安全管理条例等法律、行政法规的规定，制定本规定。定义：本规定所称可感染人类的高致病性病原微生物（毒）种或样本是指在人间传染的病原微生物名录中规定的第一类、第二类病原微生物菌（毒）种或样本。 适用范围：本规定适用于可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的运输管理工作。人间传染的病原微生物名录中第三类病原微生物运输包装分类为A类的病原微生物菌（毒）种或样本，以及疑似高致病性病原微生物菌（毒）种或样本，按照本规定进行运输管理。 可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定运输以上范围内规定的菌（毒）种或样本（以下通称高致病性病原微生物菌（毒）种或样

13、本），应当经省级以上卫生行政部门批准。未经批准，不得运输。申请单位：从事疾病预防控制、医疗、教学、科研、菌（毒）种保藏以及生物制品生产的单位，因工作需要，可以申请运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本。运输申请：申请运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的单位（以下简称申请单位），在运输前应当向省级卫生行政部门提出申请，并提交以下申请材料（原件一份，复印件三份）：1.可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输申请表 （接收单位）具备从事高致病性病原微生物实验活动资格的实验室； （接收单位）取得有关政府主管部门核发的从事高致病性病原微生物实验活动、菌（毒）种或样本保藏、生物制品生产等的批

14、准文件。 接收单位应当符合以下条件： 1.具有法人资格； 2.具备从事高致病性病原微生物实验活动资格的实验室； 3.取得有关政府主管部门核发的从事高致病性病原微生物实验活动、菌（毒）种或样本保藏、生物制品生产等的批准文件。 在固定的申请单位和接收单位之间多次运输相同品种高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的，可以申请多次运输。多次运输的有效期为6个月；期满后需要继续运输的，应当重新提出申请。省内运输审批： 申请在省、自治区、直辖市行政区域内运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的，由省、自治区、直辖市卫生行政部门审批。 省级卫生行政部门应当对申请单位提交的申请材料及时审查，对申请材料不齐全或者不

15、符合法定形式的，应当即时出具申请材料补正通知书；对申请材料齐全或者符合法定形式的，应当即时受理，并在5个工作日内做出是否批准的决定；符合法定条件的，颁发可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本准运证书；不符合法定条件的，应当出具不予批准的决定并说明理由。跨省运输审批： 申请跨省、自治区、直辖市运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的，应当将申请材料提交运输出发地省级卫生行政部门进行初审；对符合要求的，省级卫生行政部门应当在3个工作日内出具初审意见，并将初审意见和申报材料上报卫生部审批。 卫生部应当自收到申报材料后3个工作日内做出是否批准的决定。符合法定条件的，颁发可感染人类的高致病性病原

16、微生物菌（毒）种或样本准运证书；不符合法定条件的，应当出具不予批准的决定并说明理由。突发疫情 对于为控制传染病暴发、流行或者突发公共卫生事件应急处理的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的运输申请，省级卫生行政部门与卫生部之间可以通过传真的方式进行上报和审批；需要提交有关材料原件的，应当于事后尽快补齐。 根据疾病控制工作的需要，应当向中国疾病预防控制中心运送高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的，向中国疾病预防控制中心直接提出申请，由中国疾病预防控制中心审批；符合法定条件的，颁发可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本准运证书；不符合法定条件的，应当出具不予批准的决定并说明理由。中国疾病预防

17、控制中心应当将审批情况于3日内报卫生部备案。 运输申请单位卫生部科教司中国CDC(实验室管理处)出发地省级卫生行政部门初审（3个工作日）核发准运证或出具不予批准的决定及理由核准申请的单位，在运输任务结束后，书面报告运输情况3日内报卫生部备案审批陆路运输水路运输民用航空运输实验室检测技术镜检形态学观察细菌的分离培养细菌的鉴定病毒的分离培养直接涂片镜检形态学观察直接涂片染色后镜检适用于形态和染色上具有特征性的病原菌。例如痰中查见抗酸性细长杆菌，脓液中发现革兰氏阳性葡萄串状球菌，咽喉假膜中有异染颗粒的棒状杆菌及霍乱弧菌、艰难梭菌等。优点是方便快捷，缺点是适用范围小。电镜技术：可快速诊断病毒，适用于形

18、态特殊且并病毒量较多的标本。缺点是设备昂贵，对技术人员要求高，并需要一定的病毒量。细菌的分离培养无菌部位采集的脑脊液、血液等标本，可直接接种至营养丰富的液体或固体培养基。有正常菌群存在部位所取标本（如粪便），应接种至选择或鉴别性培养基。缺点：耗时较长（需4872h），过程繁琐，优点：能获得病原菌，特异性为100%，是许多细菌性传染病实验室确诊的最重要证据，因此，在暴发疫情中要求尽可能进行病原菌分离来获得实验室确诊证据。 抗生素敏感性检测对分离的病原菌进行抗生素敏感性试验能够知道临床用药和制定暴发疫情中高危人群的预防服药控制措施；还能观察病原菌的耐药谱变迁，了解局部地区细菌耐药的危害程度，对细菌

19、性传染病的有效控制和减少抗生素滥用具有重要意义。细菌的鉴定生化鉴定生化代谢特征是鉴定病原菌的重要方法之一。如糖发酵试验等。现有多种微量、快速、半自动或全自动细菌生化反应试剂盒和检测仪器，极大地方便了菌株鉴定工作。血清鉴定与分型利用已知的特异抗体的诊断血清可以确定细菌的种和型。常用方法是玻片凝集实验，在数分钟内能可得出结果。4.、免疫学检测凝集反应包括直接凝集反应、间接凝集反应、间接凝集抑制反应和协同凝集反应。沉淀反应主要有单免疫扩散、双免疫扩散和对流免疫电泳。免疫标记技术包括免疫荧光技术、放射免疫测定和免疫酶技术，其中免疫酶技术还包括酶联免疫吸附实验（ELISA）、夹心法，以及生物素加亲和素的

20、ELISA方法。现场应用最多的是ELISA方法。6、核酸检测核酸诊断主要用于检测难以培养的微生物、或目前培养方法不敏感、花费高或耗时太久的情况。优点：省时，灵敏性高。在严格控制实验过程的条件下，对于病因诊断有很好的作用。缺点：实验过程控制不严格时可能产生假阳性结果。实验条件、经验和试剂成本要求高。因此在应用时要考虑对疫情控制的需要，考虑必要性和可行性。核酸检测方法主要有如下几种：聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）分子杂交技术（molecular hybridization）基因芯片技术序列分析具有特异、敏感、快速、简便和容易自动化等特点。为增加灵敏度和特

21、异度，普通PCR又演化有多种方法，如RT- PCR、PCR-RFLP、套式PCR、多重PCR、实时PCR技术。近来实时PCR技术用于临床检测得到迅速发展和普及，可实时检测到信号的变化，并且整个反应过程为密闭，不需电泳检测结果，避免了产物的扩散和交叉污染，具有较好应用前景。聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）通常在支持膜上进行，又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交和RNA印迹杂交。DNA探针杂交在检测没有成熟可靠的培养方法的临床标本时具有突出的优点，如HPV、乙肝病毒（HBV）、和EB病毒的检测。与传统鉴定方法相比，针对荚膜组织胞浆菌、皮炎芽生菌、粗球孢子菌和新生隐球菌的检测探针具有独特的优点。分子杂交技术（molecular hybridization）基因芯片技术核酸检测芯片是一块方形的玻璃，上面铺了一层肉眼看不见的DNA探针。待测的样品基因被切成长短不一的片断，用荧光化学物质标记，然后作为一种溶液注射到嵌有芯片的胶片上。用装有激光设备的仪器来检测，通过激光光束激发后会发出荧光。荧光的强弱与DNA探针杂交程度有关，根据荧光强弱的图案就可以检测目的基因。用于现场诊断有一定应用前景。序列分析测定核酸一级结构的方法，是目前鉴定细菌或病毒特征