基因关键工程试题

1、名词解释问题：Gene manipulation答案：基因操作。将在细胞外产生的核酸（物质）分子插入到病毒，质粒或其他载体系统中，再整合到特定的宿主中，从而形成一种新的可持续繁 殖的有机体。名词解释问题：Interrupted genes参照答案：间断基因。序列中间插入有与氨基酸编码无关的DNA间隔区，使一种基因分隔成不持续的若干区段。我们称这种编码序列不持续的基由于间断 基因。名词解释问题：Promotor参照答案：启动子。DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。名词解释问题：Subcloning参照答案：亚克隆。当时始克隆中的外源DNA片段较长，具有许多目的基因

2、以外的DNA片段时，在诸如体现、序列分析和突变等操作中不便进行，将目 的基因所相应的一小段DNA找出来，这个过程叫“亚克隆”。填空题问题：基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克隆（gene cloning）， gene cloning的基本要点有（），（）和（）。参照答案：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择填空题问题：（）是遗传物质的基本单位，也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。它可以是持续的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA ；可以 存在于染色体上，也可以（）参照答案：基因；持续；DNA；存在于染色体之外（如质粒，噬菌体等）填空题问题：基因操作并不是

3、一种法律概念，除了涉及基因克隆外，还涉及基因的（）、（）、（）和（）等与基因研究有关的内容。参照答案：体现；调控；检测；改造填空题问题：启动子（Promotor）是指（）。一般一种Gene与否体现，（）是核心的一步，是起决定作用的。在转录过程中,Promoter还是（）的结合 位点。参照答案：基因转录过程中控制起始的部位；转录起始；RNA聚合酶填空题问题：原核生物的RNA polymerase重要由两部分构成：（）和（），其中。-因子并不参与RNA的合成，它的作用重要是（）。参照答案：核心酶；。因子；辨认要转录的起始位点填空题问题：从（）到（）的这一段距离称为一种转录单位，或者一种转录产物，其

4、中可涉及一种或者多种Gene 。参照答案：启动区；终结区填空题问题：转录终结子重要有两种，一种是（），另一种是（）。参照答案：依赖P因子；不依赖P因子填空题问题：Gene的书写方式，一般是写出的DNA序列总是与（）相似的那条链，方向是从（）到（）。对于碱基的位置，一般自转录起始点向两个方 向编号，其中转录起始点定为（），（）定为-1 。参照答案：mRNA； 5 ； 3 ； +1；在起始点上游第一种碱基填空题问题：重叠基因（Overlapping gene）是指（），间隔基因（Interrupted gene）是指（）参照答案：一种基因的序列中，单个DNA序列可编码一种以上的蛋白质；在编码序列中

5、间插入的一段无编码作用的碱基序列简答题问题：简述基因克隆的两个基本特性？参照答案：基因克隆的两个基本特性是一是强调外源核酸分子（一般状况下都是DNA）在不同宿主中的繁殖，打破自然种的界线将来自于不有关物种的基因 放入一种宿主中是基因操作的一种重要特性，基因操作的另一种重要特性是繁殖。简答题问题：谈谈你对gene的结识，并简要说说gene概念的发展状况？参照答案：可以体现和产生基因产物（Proteinor RNA）的DNA序列（可自由发挥，发展状况请查找有关资料）基因概念的发展：基因作为遗传学中的专 用术语，其概念每发展一步都意味着遗传学乃至整个生物学的一次革命和突破，其内容的每次丰富和充实都凝

6、聚着生物学家们的滴滴心血。“基因”概念的提出： 遗传学的奠基人孟德尔在1866年刊登的论文植物杂交实验指出生物每一种性状都是通过遗传因子来传递的，遗传因子是某些独立的遗传单位。这样把可 观测的遗传性状和控制它的内在的遗传因子辨别开来了，遗传因子作为基因的雏形名词诞生了。 1909年丹麦遗传学家约翰逊在精密遗传学原理一书中提 出“基因”概念，以此来替代孟德尔假定的“遗传因子”。从此，可以体现和产生基因产物protein or RNA）的DNA序列（可自由发挥）“基因”一词 始终随着着遗传学发展至今。基因构造和功能的摸索：摩尔根和她的学生们运用果蝇作了大量的潜心研究，1926年她的巨著基因论出版，

7、从而建立了出 名的基因学说，初次完毕了当时最新的基因概念的描述，即基因以直线形式排列，它决定着一种特定的性状，并且能发生突变并随着染色体同源节段的互换而互 换，它不仅是决定性状的功能单位，并且是一种突变单位和互换单位。1941年比德尔和塔特姆提出一种基因一种酶说；1949年鲍林与合伙者在研究镰刀 型细胞贫血症时推论基因决定着多肽链的氨基酸顺序；1944年艾弗里、麦卡蒂初次用实验明确证明：DNA是遗传信息的载体；1952年赫尔希和蔡斯进 一步证明遗传物质是DNA而不是蛋白质；1953年美国分子生物学家沃森和英国分子生物学家克里克通力协作，根据X射线衍射分析，提出了出名 的DNA双螺旋构造模型，进

8、一步阐明基因成分就是DNA ，它控制着蛋白质的合成；1957年法国遗传学家本滋尔以T4噬菌体作为研究材料分析了基 因内部的精细构造，提出了顺反子学说。这个学说打破了过去有关基因是突变、重组、决定遗传性状的“三位一体”概念及基因是最小的不可分割的遗传单位的 观点，从而觉得基由于DNA分子上一段核昔酸序列，负责着遗传信息的传递，一种基因内部仍可划分为若干个起作用的小单位，即可辨别成顺反子、突变子和 重组子。一种作用子一般决定一种多肽链合成，一种基因涉及一种或几种作用子。突变子指基因内突变的最小单位，而重组子为最小的重组合单位，只涉及一对 核昔酸。所有这些均是基因概念的伟大突破。有关基因的本质拟定后

9、，人们又把研究视线转移到基因传递遗传信息的过程上。1961年开始，尼伦伯格和科拉 纳等人逐渐弄清了基因以核昔酸三联为一组编码氨基酸，并在1967年破译了所有64个遗传密码，这样把核酸密码和蛋白质合成联系起来。然后，沃森和 克里克等人提出的“中心法则”更加明确地揭示了生命活动的基本过程。1970年特明以在劳斯肉瘤病毒内发现逆转录酶这一成就进步发展和完善了 “中心法 则”，至此，遗传信息传递的过程已较清晰地展示在人们的眼前。过去人们对基因的功能理解是单一的即作为蛋白质合成的模板。1961年法国雅各布和莫诺 的研究成果，又大大扩大了人们有关基因功能的视野。她们在研究大肠杆菌乳糖代谢的调节机制中发现了

10、有些基因不起合成蛋白质模板作用，只起调节或操纵作 用，提出了操纵子学说。从此根据基因功能把基因分为构造基因、调节基因和操纵基因。基因概念的进一步发展：70年代后，基因的概念随着多学科渗入和 实验手段日新月异又有突飞猛进的发展，重要有如下几种方面。基因具重叠性、内含子和外显子、管家基因与奢侈基因和基因的游动性。所有这些成果无疑给基 因概念中注入鲜活科学的内容，协助人们揭开层层面纱去更加全面理解基因的真面目。时代在发展，科学在进步，基因概念的进一步发展，必将对人类的文明进 步产生强大的推动作用。简答题问题：如何理解gene及其产物的共线性和非共线性？参照答案：基因决定蛋白质的序列构成，是由密码子相

11、应特定氨基酸所决定的。当一种基因的核昔酸序列与其产物的氨基酸序列是一一相应时，则表白它们是 共线性的。在原核生物中，基因及其产物是共线性的。70年代以来，在真核生物中，发现了间断基因，后来发现这种间断基因在真核生物中普遍存在，也就 是后来所说的基因间存在着内含子。内含子指真核生物基因中不能被翻译成蛋白质的DNA片断，但可被转录，当两侧序列的转录RNA被剪接在一起时，就 将内含子转录的RNA从整个转录物中除去。外显子是指可以翻译成蛋白质的任一间断的基因片段，一种基因可有多种外显子。内含子并不是一成不变的，具有 相对性，对一种DNA片断来说，在某个基因中是内含子，但在另一种基因中却可以作为外显子。

12、您的答案：简答题问题：什么是gene cloning ?什么是亚克隆(subcloning)?参照答案：基因克隆：一定限度上等同于基因的分离，即从复杂的生物体基因组中，通过酶切，消化等环节，分离带有目的基因的DNA片段。基因亚克隆： 初步克隆中的外源片段往往较长，具有许多目的基因片段以外的DNA片段，在诸如体现、序列分析和突变等操作中不便进行，因此必须将目的基因所相应的一 小段DNA找出来，这个过程叫“亚克隆”。您的答案：简答题问题：如果从一种原核生物中cloning某基因(1-2kb)，请谈谈它的基本环节？参照答案：对原核生物染色体DNA进行不完全酶切，纯化所得到的DNA片断，并与载体连接，

13、转化大肠杆菌；得到转化子后，根据目的基因两侧的 已知序列设计探针，杂交，筛选转化子；所得到的转化子中具有目的基因，进一步作亚克隆，一步步地向目的基因逼近，最后可得到目的基因简答题问题：什么叫基因工程(Gene Engineering)，试从理论和技术两个方面谈谈Gene Engineering诞生的基本？参照答案：基因工程(Gene Engineering )又称基因操作(Gene Manipulation)、重组DNA 。基因工程是以分子遗传学理论为基本，以分子生物学和 微生物学的现代措施为手段，将不同来源的基因(DNA分子)，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以变

14、化生物原先的遗传特 性，获得新品种，生产新产品，或是研究基因的构造和功能。思考题问题：简述基因操作、基因重组和基因工程的关系。思考题问题：为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物？思考题问题：简述基因的构造构成对基因操作的影响。第二章名词解释问题：Restriction and modification参照答案：限制和修饰。宿主特异性地降解外源遗传物质(DNA)的现象称为限制。外源遗传物质通过甲基化等作用避免宿主的限制作用称为修饰。名词解释问题：Matched ends参照答案：匹配末端。辨认位点为回文对称构造的序列，经限制酶切割后，产生的相似的，互补的末端称为匹配粘端，亦即粘性末端co

15、hesive end)。名词解释问题：Blunt ends参照答案：平末端。在回文对称轴上同步切割DNA的两条链，产生的没有碱基突出的末端称为平末端。名词解释问题：Isoschizomer参照答案：同裂酶。辨认相似序列的限制酶称同裂酶，但它们的切割位点也许不同。名词解释问题：Isocaudiners参照答案：同尾酶。来源不同、辨认序列不同，但产生相似粘性末端的酶。名词解释问题：Site preferences参照答案：位点偏爱。某些限制酶对同一介质中的不同位置的同一种辨认序列体现出不同的切割效率的现象称为位点偏爱。名词解释问题：Star activity参照答案：星星活性。在极端非原则条件下，

16、限制酶能切割与辨认序列相似的序列，这个变化的特殊性称星星活性。名词解释问题：Nicking enzyme参照答案：切口酶。有些限制酶只切割双链DNA中的一条链，产生单链缺口，这种酶称为切口酶。名词解释问题：Klenow fragment参照答案：Klenow片段Klenow DNA聚合酶是E.coli DNA polymerase经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去53外切活性的多 肽大片段，而聚合活性和3-5外切活性不受影响。名词解释问题：Sequenase参照答案：测序酶。是改造的T7噬菌体DNA聚合酶，切除了 99%以上的3-5外切活性。Sequenase Version2切除了

17、所有的3-5外 切活性，用于双脱氧链终结法对长片段进行测序。名词解释问题：Reverse transcriptase参照答案：反转录酶。即依赖于RNA的DNA聚合酶，它有5-3合成DNA活性，但是无35外切活性。它来自AMV（禽成髓细胞瘤病毒）或Mo-MLV （Moloney 鼠白血病病毒，又称M-MuLV）。名词解释问题：Terminal transferase参照答案：末端转移酶。来源于小牛胸腺，是存在于前淋巴细胞及分化初期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的DNA聚合酶，在二价阳离子存在下，末端转 移酶催化dNTP加于DNA分子的3羟基端。若dNTP为T或C ，此二价阳离子首选钻离子；若dNT

18、P为A或G，此二价阳离子首选镁离 子。名词解释问题：Ligase参照答案：连接酶。催化DNA 5磷酸基与3羟基之间形成磷酸二酯键，将两段核酸连接起来的酶。名词解释问题：T4 polynucleotide kinase参照答案：T4多核昔酸激酶。催化ATP的 Y-磷酸基转移至DNA或RNA的5末端。名词解释问题：Alkaline phosphatase参照答案：碱性磷酸酶。重要来源于牛小肠（Calf intestinal alkaline phosphatase），简称CIP或CIAP，也有来自细菌（BAP）。催化除去DNA或RNA 5 磷酸。名词解释问题：S1 nuclease参照答案：Sl核

19、酸酶。来源于米曲霉（Aspergillus oryzae），可降解单链DNA或RNA ，产生带5磷酸的单核昔酸或寡核昔酸双链；对dsDNA ， dsRNA ， DNA:RNA杂交体不敏感。名词解释问题：Exonulease田参照答案：外切核酸酶田。来源于大肠杆菌，催化从dsDNA 3-OH逐个清除单核昔酸的反映，底物为dsDNA或线状和带切口或缺口的环状DNA ， 反映成果是在dsDNA上产生长的单链区。名词解释问题：Single strand binding protein参照答案：单链结合蛋白。此蛋白能协同地与ssDNA结合而不与dsDNA结合，可以削弱链内二级构造的稳定性，从而加速互补多

20、核昔酸的重新退火，并 通过消除阻碍DNA聚合酶迈进的链内二级构造，而提高这些聚合酶的持续作用能力。名词解释问题：Proteinase K参照答案：蛋白酶K是具有高活性的丝氨酸蛋白酶，属枯草杆菌蛋白酶，可以水解范畴广泛的肽键，特别适合水解羧基末端至芳香族氨基酸和中性氨基酸 之间的肽键。K指该蛋白酶通过水解角蛋白（keratin）可觉得该霉菌提供所有所需的碳源和氮源。名词解释问题：Lysozymes参照答案：溶菌酶。一类水解细菌细胞壁中肽聚糖的酶，常用的是卵清溶菌酶，用于破碎细胞。填空题问题：Ecok的一般分子构成为R2M2S ，在这些亚基中，R亚基具有（）的作用，M亚基具有（）的作用，S亚基具有

21、（）的作用，当该 该酶发生作用时，需用到的辅因子有：（）、（）、（）。参照答案：限制酶；甲基化；辨认DNA序列；ATP； SAM； Mg2+填空题问题：限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的命名是按属名和种名相结合的原则的，一般第一种大写字母取自（），第二、三个字母取 自（），第四个字母则用（）表达。参照答案：属名的第一种字母；种名的前两个字母；菌株名填空题问题：II型限制酶辨认回文对称序列，在回文序列（）或（）切割DNA ，产生带3 -OH和5 -P基团的DNA的产物，需（）的存在才干发 挥活性，相应的修饰酶只需SAM 。参照答案：内部；附近；Mg2 +填空题

22、问题：从因特网上可以找到限制酶的数据库（），该网站由New England Biolabs公司维护（）。参照答案： REBASE填空题问题：辨认相似序列的限制酶称（）参照答案：同裂酶填空题问题：I-CeuI酶是衣滴虫叶绿体大rRNA基因的内含子编码的产物，辨认位点为（）bp，辨认的核心部位为（）至（）位置的19bp ，反映温 度为37C 。参照答案：26； -12； +7填空题问题：位点偏爱是指：（）参照答案：限制酶对不同位置的同一种辨认序列体现出不同的切割效率填空题问题：1单位NaeI 或NarI 的定义：（）参照答案：切割lug腺病毒2 DNA在50ul体系中1小时所需的酶量填空题问题：有

23、些限制酶只切割双链DNA中的一条链，产生单链缺口，即（）参照答案：切口酶填空题问题：个体间DNA限制性片段长度的差别叫（）参照答案：限制性片段长度多态性（RFLP）填空题问题：DNA载体经Hindlll切割后产生粘性末端，能发生载体自连，影响载体与外源DNA的连接效率，常用的避免载体自连的措施有（）、（）。参照答案：去磷酸化；部分补平填空题问题：完全的回文序列应具有两个特点即（）和（）。参照答案：可以在中间划一种对称轴，两侧的序列两两对称互补配对；两条互补链的5-3的序列构成相似，即将一条链旋转180，则两条链重叠填空题问题：Dcm Methylase （Dcm甲基化酶）的辨认序列为（）和（）

24、，该酶的作用位点为（）。参照答案：CCTGG； CCAGG；第二个胞嘧啶C的C5位置填空题问题：大肠杆菌中至少有三种依赖于甲基化的限制系统（）、（）、（）。它们辨认的序列各不相似，但只辨认通过甲基化的序列，都限制CpG甲 基化酶作用的DNA 。参照答案：mcrA； mcrBC； mrr您的答案：填空题问题：分别写出如下限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的辨认序列EcoRl（）、Sau3AI（）、HindIII（）。参照答案：GAATTC； GATC； AAGCTT填空题问题：Weiss单位的定义为（）参照答案：在37C下20分钟内催化1nmol32P从焦磷酸根

25、置换到y,B32PATP所需的酶量填空题问题：限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease） 一般保存在（）浓度的甘油溶液中。参照答案：50%填空题问题：载体和外源DNA经酶切，在进行下一步操作前，需消除限制性内切核酸酶Restriction endonuclease）的影响。常用的措施有（）、（）、 （）、（）。参照答案：EDTA法；加热法；苯酚抽提法；试剂盒除酶法填空题问题：对DNA进行双酶切时，酶切缓冲液的选择原则有（1）（）、（2）（）、（3）（）参照答案：可选用都合适的缓冲液或通用缓冲液；若缓冲液不可替代则先用低浓度的，再加适量NaCl和第二种酶；先用低盐缓冲液

26、再用高盐缓冲液填空题问题：Dnasel为内切核酸酶，在不同的辅因子条件下，产生不同的酶切效果，当Mg2+存在时（）；当Mn2+存在时（）。参照答案：独立作用于每条DNA链，且切割位点随机；可在两条链的大体同一位置切割dsDNA ，产生平端或1到2个核甘酸突出的DNA片断填空题问题：Klenow DNA聚合酶是E.coli DNA polymerase经蛋白酶裂解而从全酶中除去（）活性的多肽大片断，而其她活性保持不变。参照答案：5-3的外切活性填空题问题：T4 phage DNA polymerase分子量为（）kDa，该酶的35的外切活性比Klenow酶强（）倍，由于它不从单链DNA模板上替代

27、 引物，故可用于（）。参照答案：114； 200；提高诱变反映填空题问题：反转录酶来自AMV或MoMLV ，即依赖于RNA的DNA聚合酶，它有（）活性，但无（）活性。参照答案：5-3合成DNA的；3-5的外切填空题问题：末端转移酶来源于（），是存在于前淋巴细胞及分化初期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的DNA聚合酶，在（）存在下，末端转移酶催化dNTP加 于DNA分子的3羟基端。参照答案：小牛胸腺；Mg2 +填空题问题：T4 DNA连接酶的分子量为68kDa ，它可以催化DNA 5磷酸基与3羟基之间形成磷酸二酯键。反映底物为粘端、切口、平端 的RNA或DNA 。低浓度（）和（）可以提高平端连接效率

28、。参照答案：聚乙二醇PEG ；单价阳离子填空题问题：E.coli DNA连接酶与T4 DNA连接酶相似，但需（）的参与，且其平端连接效率低常用于置换合成法。参照答案：烟酰胺一腺嘌吟二核昔酸（NAD+）填空题问题：T4多核昔酸激酶在高浓度的ATP时发挥最佳活性，（）是其强烈克制剂。参照答案：NH4 +填空题问题：BAL31核酸酶重要活性为3外切核酸酶活性，可从线性DNA两条链的3端清除掉单核昔酸；还可从内部切割核酸，作用于单链。BAL31发生作用依赖（），（）可克制其活性。参照答案：Ca2 + ； EGTA填空题问题：绿豆核酸酶来源于绿豆芽，与S1酶相似，但比S1酶更温和，在（）上才切割，可使D

29、NA突出端变成平端。参照答案：大切口填空题问题：核糖核酸酶A来源于牛胰，为内切核酸酶，可特异袭击（）。可除去DNA:RNA中未杂交的RNA区，可用来拟定DNA或RNA中单碱 基突变的位置。参照答案：RNA上嘧啶残基的3端填空题问题：用于构建嵌套缺失体常用到的核酸酶有（）、（）、（）。参照答案：Dnasel；外切核酸酶III；BAL31填空题问题：琼脂糖酶作用于低熔点琼脂糖，它的活性是可切割琼脂糖酶亚单位。由于此酶可分解琼脂糖，因此应用于（）。参照答案：分离大片段DNA选择题问题：限制性内切酶一般保存在（）浓度的甘油溶液中。参照答案：C 50%点评：合适浓度的甘油和二甲基亚砜可以作为冰冻保护剂，

30、保护生物大分子的活性。选择题问题：限制性图谱与限制性片段长度多态性（RFLP）图谱的最明显区别在于（）参照答案：A前者是物理图谱后者是连锁图点评：具体理解两者的概念选择题问题：迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（）参照答案：C只能作用于双链DNA点评：限制性内切核酸酶的辨认和切割序列有很强的特异性，特别是第II型的限制性内切酶。选择题问题：已知某一内切酶在一种环状DNA上有4个切点，当用此酶切割该环状DNA ，可以得到（）个片段参照答案：B 4点评：注意DNA分子的形状，其他条件相似的时候，线状比环状产生的片段要多一种。选择题问题：甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生变化，是导致某

31、些酶星星活性的重要因素之一，避免的措施是在酶切反映体系中，将甘油的浓度控 制在（）如下参照答案：A 5%点评：低温下保存生物大分子时，甘油可以作为冰冻保护剂，但反映体系中甘油浓度过高会导致星星活性。选择题问题：在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制哪一项最佳（）参照答案：D 酶量点评：多种酶均有适合自己的反映温度；同步根据酶反映动力学，酶切反映一定期间后酶的活性就会削弱或丧失，因此控制酶量是最合适的选择题问题：下列试剂中，哪一种可以螯合Ca2+离子（）参照答案：D EGTA点评：EDTA螯合Mg2+等金属离子，EGTA螯合Ca2+离子。选择题问题：DNA被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散

32、，下列因素中，哪一项不太也许（）参照答案：C 酶失活点评：理解限制性内切酶酶切本质和DNA电泳实验原理。选择题问题：nick与gap的区别在于（）参照答案：A前者是断开了一种磷酸二酯键，后者是指DNA的单链中有较小的缺失点评：注意理解专业词汇。选择题问题：可以在切口部位起作用的酶是（）参照答案：B S1核酸酶 点评：BAL31核酸酶重要活性为3外切核酸酶活性，可以从线性DNA两条链的3端去掉单核昔酸；S1核酸酶可降解单链DNA或RNA ，产 生带5磷酸的单核昔酸或寡核昔酸，中档浓度可在切口或小缺口处切割双链；核糖核酸酶A可以特异袭击RNA上的嘧啶残基的3端，可除 去DNA:RNA中未杂交的RN

33、A区；入外切核酸酶可以作用于dsDNA ，持续逐个释放5单核昔酸。选择题问题：Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了（）活性参照答案：A53外切酶点评：Klenow DNA聚合酶是E.coli DNA polymerase经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去53外切活性的多肽大片段，而聚合活性 和3-5外切活性不受影响。选择题问题：限制酶的命名遵循一定的原则，波及来源（宿主），菌株或生物型。命名时（）参照答案：A属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后再加上序号（罗马字）点评：限制酶的命名遵循一定的原则，波及来源（宿主），菌株或生物型。命名时，依次取属名第一字母，种名头两个字母

34、，菌株号，然后再加上序号（罗马字） 选择题问题：如下对同裂酶的描述中，哪一项是对的的（） 参照答案：A辨认相似序列的限制酶称同裂酶点评：辨认相似序列的限制酶称同裂酶，但它们的切割位点也许不同。具体可分为：同裂同切酶、同序异切酶、“同功多位”等选择题问题：下列DNA聚合酶中，哪一种酶只切割双链DNA中的一条链，产生单链切口，即切口酶（） 参照答案：A Dnasel点评：在Mg2+存在下，独立作用于每条DNA链，且切割位点随机。在Mn2+存在下，它可在两条链的大体同一位置切割dsDNA ，产生平端或12个 核昔酸突出的DNA片段；Klenow DNA聚合酶是E.coli DNA polymeras

35、e经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去53外切活性的多 肽大片段，而聚合活性和3-5外切活性不受影响；T4噬菌体DNA聚合酶与Klenow DNA聚合酶相似，但35外切活性强200倍，且不 从单链DNA模板上替代引物；T7噬菌体DNA聚合酶的活性功能与T4噬菌体DNA聚合酶和Klenow DNA聚合酶类似，但3-5外切活性 为 Klenow 的 1000 倍。选择题问题：BAP与CIAP的区别在于（）参照答案：B CIAP 68C时失活，而BAP 68C稳定点评：CIAP来源于牛小肠碱性磷酸酶，而BAP来自细菌的碱性磷酸酶。BAP抗性强、抗高温和清除污剂。CIAP可用蛋白酶K消化灭活，

36、或 在5mM EDTA下。65C或75C解决10分钟，然后用酚、氯仿抽提，纯化去磷酸化的DNA ，从而除去CIAP的活性。选择题问题：下列哪一种酶作用时需要引物（）参照答案：B 反转录酶点评：其他三种酶均只需要DNA链即可选择题问题：CIAP催化脱磷酸时有两种最适温度，37C和56C ，二种温度分别合用于（）端脱磷酸参照答案：A 5突出端；平末端和突出的3端点评：3端突出时，磷酸基团是内陷的，需要剧烈一点的反映条件。选择题问题：有关宿主控制的限制修饰现象的本质，下述描述中只有（）不恰当参照答案：D这一系统的核酸酶都是II类限制性内切核酸酶点评：根据酶的亚单位构成、辨认序列的种类和与否需要辅助因

37、子，限制与修饰系统至少可分为四类：11型、IIs型、1型、III型 选择题问题：限制性内切核酸酶可以特异性地辨认（） 参照答案：C 双链DNA的特定碱基序列点评：理解限制性内切酶的辨认序列。选择题问题：如下为同尾酶的是（）参照答案：B BamHl,Sau3AI,StyI点评：所谓同尾酶即她们可以产生相似的粘性突出末端。其中B选项中BamHl辨认位点为GlGATCC ， Sau3AI辨认位点为IGATC ， StyI辨 认位点为 CCIWWGG （W=AorT）选择题问题：在长模板链的指引下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用（）参照答案：B T7 DNA聚合酶您的答案：点评：T7 DNA聚合酶

38、是所有DNA聚合酶中持续合成能力最强的一种选择题问题：在大肠杆菌中，大多数均有三个位点特异性的DNA甲基化酶，如下选项中哪一种酶不涉及在内（）参照答案：D SssI点评：Sss I甲基化酶来自原核生物Spiroplasma选择题问题：在大肠杆菌中，至少有3种依赖于甲基化的限制系统，如下选项中不属于这3种的为（）参照答案： C mcrD点评：无 mcrD选择题问题：如下几种核酸酶中，不能用于嵌套缺失的为()参照答案：B S1核酸酶点评：S1核酸酶可降解单链DNA或RNA ，酶浓度大时可完全消化双链，中档浓度可在切口或小缺口处切割双链。选择题问题：下面有关限制酶的论述哪个是错误的()参照答案：A

39、限制酶是外切酶而不是内切酶点评：理解限制性内切酶的特性。选择题问题：在下列酶中，催化反映不需要ATP的是()参照答案：D BamHl点评：1型和III型限制性内切酶在发生限制作用时需要ATP ， II型则不需要，而BamHl为II型限制性内切酶，在催化反映时不需要ATP 选择题问题：DNA连接酶在体内的重要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，下列对DNA连接酶的描述中，那项是对的的() 参照答案：A 将双链DNA分子中的5磷酸基团同3OH末端重新形成磷酸二酯键点评：理解DNA连接酶的特性。选择题问题：下列酶中，除()外都具有磷酸酶的活性参照答案：A BamHl点评：磷酸酶活性涉及磷酸化活性和去

40、磷酸化活性。您做对了0个简答题问题：简述限制性内切核酸酶(Restriction endonuclease)的概念及其生物学功能？参照答案：定义：指辨认DNA的特异序列，并在辨认位点或其周边切割双链DNA的一类内切酶。生物学功能：保护宿主不受外来DNA分子的感染， 可降解外来的DNA分子，从而制止其复制和整合到细胞中。简答题问题：PCR引物设计引入酶切位点时，为什么需在酶切位点后加上某些碱基？参照答案：限制酶切割DNA时对辨认序列两端的非辨认序列有长度规定，也就是说在辨认序列两端必须要有一定数量的核昔酸，否则限制酶将难以发挥切 割活性。因此，一般需在设计引物时在限制酶切位点外另加34个碱基。简

41、答题问题：试回答影响限制性内切核酸酶(Restriction endonuclease)切割效率的因素？参照答案：外因：反映条件、底物纯度、反映温度和限制性内切酶自身的活性；内因：位点偏爱性；甲基化；底物的构象。简答题问题：在酶切缓冲液中，一般需加入BSA，请问加入BSA的作用是什么？并简述其原理？参照答案：作用是提供一定的蛋白质浓度，起保护限制性内切酶的作用。限制性内切酶在稀释液中会迅速变性，BSA是一种较好的可加入酶反映液中的中 性蛋白质。简答题问题：何谓Star activity ？简述Star activity的影响因素及克服措施？参照答案：在极端非原则条件下，限制酶能切割与辨认序列相

42、似的序列，这个变化的特性称为星星活性。引起星星活性的的因素：高甘油浓度5%): 酶过量(100U/ml)；低离子强度(8.0)；有机溶剂如PMSD (二甲基亚砜)、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺(dimethylacetamide)、 二甲基甲酰胺(dimethylformamide)和sulphalane等；用其他二价阳离子Mn2+、Cu2+、Co2+或Zn2+替代Mg2+ 。星星活性的克制措施：减少 酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；保证反映体系中无有机溶剂或乙醇；提高离子强度到100150mM (在不克制酶活性的前提下)；减少反 映pH至7.0 ；使用Mg2+作为二价阳离子。简答题问题：

43、某DNA序列中存在DpnI酶切位点，以此DNA为模板，在体外合成DNA序列，当用该酶进行酶切时，发现切割不动，试分析也许因 素？参照答案：生物体内的DNA序列也许是通过甲基化修饰的，而在体外合成时，缺少这种修饰作用。当用依赖于甲基化的限制酶DpnI来切割非甲基化的 序列时，就会浮现不能切割的状况。简答题问题：天然的质粒载体(plasmid vectors) 一般需经改造后才干应用，涉及清除不必要的片段，引入多克隆位点等。试问在此过程中如何增减酶切位 点？参照答案：在酶切水平上，通过酶切和连接产生新的酶切位点。将产生的5突出端补平后，再连接以产生新的酶切位点；同尾末端的连接，不同的同 尾酶切割D

44、NA产生的末端，再互相连接时，可产生新的酶切位点，同步本来的酶切位点却消失；平末端的连接简答题问题：双脱氧终结法测定DNA序列的片段一般不能太长，如何运用本章所学知识测定较长片段的DNA序列？参照答案：将所需要测序的DNA片断采用2种不同的限制性内切酶切割，产生不同的酶切片段，将此酶切片段连接到载体上，测序后，拼接，即可得 到全长的DNA序列；用一种限制性内切酶进行部分酶切，酶切产物与载体连接后，测序，拼接，即可得到全长DNA片断。采用以上任一措施均可，需要 注意的是，在进行部分酶切时，应当控制好条件，要保证所得到的酶切片断能覆盖所需测序的DNA片断。您的答案：简答题问题：大肠杆菌DNA聚合酶

45、I，具有3-5 外切活性和5-3的聚合酶活性以及53的外切活性，试根据此推测该聚合酶也许具有哪些用途？参照答案：运用E.coli DNA聚合酶的53外切核酸酶活性，可用切口平移法标记DNA ，所有DNA聚合酶中只有此酶有此反映；用 于cDNA克隆中的第二链，即单纯的DNA聚合活性；对3突出端的DNA作末端标记（互换或置换反映）。简答题问题：用T4 phage DNA polymerase可进行末端标记，试简述其原理？参照答案：T4 phage DNA聚合酶具有35外切活性和53的聚合酶活性，35的外切活性可以被53的聚合活性所封闭，一方 面在反映体系中加入一种dNTP ，产生3凹端，然后加入通

46、过标记的dNTP ，运用T4 phage DNA聚合酶的聚合活性补平3凹端，即可得到标 记了末端的DNA片断。简答题问题：BAP和CIAP有何作用？为什么一般采用CIAP而不采用BAP ?参照答案：作用：催化除去DNA或RNA 5磷酸BAP抗性强，抗高温和去污剂。CIAP可用蛋白酶K消化灭活，或在5mM EDTA下，65C解 决或75C解决10分钟，然后用酚氯仿抽提，纯化去磷酸化的DNA ，从而清除CIAP的活性。相比之下，CIAP比BAP更易清除，因此，一般 采用 CIAP 。简答题问题：依赖于DNA的RNA聚合酶涉及SP6噬菌体RNA聚合酶和T4或T7噬菌体RNA聚合酶，此类聚合酶可用于体

47、现外源基因， 论述常用的构建方略？参照答案：将T7 RNA聚合酶基因置于E.coli lacUV5启动子之下，插入到入噬菌体中，感染E.coli ，建立稳定的溶源菌。E.coli BL21 （DE3）菌株即为将lacUV5启动子和T7聚合酶基因置于入噬菌体DE3区，该入噬菌体DNA整合于染色体的BL21处。若将T7噬菌体 启动子控制的目的基因经质粒载体导入该宿主菌中，在IPTG诱导下，可启动外源基因的体现；先导入带T7噬菌体启动子控制的目的基因的质粒，再 用入噬菌体（带T7 RNA聚合酶基因）感染E.coli ，激活目的基因的体现。简答题问题：简述T4多核昔酸激酶的活性和用途？参照答案：T4多

48、核昔酸激酶的活性催化ATP的 Y一磷酸基转移到DNA或RNA的5末端。可体现为两种反映，正反映指ATP的 y一磷酸 基被转移到去磷酸化的DNA 5端，用于对缺少5-磷酸的DNA进行磷酸化。在互换反映中，过量的ATP可使该激酶将磷酸化的5端磷酸转移 给ADP ，然后DNA从【Y-32P】ATP中获得放射性标记的？一磷酸而重新磷酸化，因此可用于DNA的末端标记。用途：该酶重要用于对缺少5 磷酸的DNA或合成接头进行磷酸化，同步可对末端进行标记。通过互换反映，用于标记5末端，以供Maxam-Gilbert法测序、S1核酸酶分析以 及其他须使用末端标记DNA的环节。您的答案：思考题问题：限制性内切酶可

49、划分为哪几种类型，各自有何特点？思考题问题：哪些酶可用于DNA片段的末端标记？思考题问题：DNA聚合酶有哪些类型，各有什么活性？思考题问题：在分子克隆中所用的酶重要作用于哪些底物？第三章名词解释问题：Vehicle参照答案：载体。将外源DNA或基因携带入宿主细胞（host cell）的工具称为载体。具有如下三个必须元件：复制原点、多克隆位点和筛选标记。名词解释问题：Gene clone参照答案：基因克隆。克隆作动词时，指从单一祖先产生同一的DNA分子群体或细胞群体的过程；作名词时指从一种共同祖先无性繁殖下来的一群遗传上 同一的DNA分子、细胞或个体所构成的特殊的生命群体。运用重组DNA技术分离

50、目的基因，称之为基因克隆。名词解释问题：Gene library参照答案：基因文库。由大量的具有基因组DNA （即某毕生物的所有DNA顺序）的不同DNA片段的克隆所构成的群体，称之为基因文库。名词解释问题：Plasmid incompatibility参照答案：质粒不相容性。运用同一复制系统的两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第二个质粒导入后，在不波及DNA限 制系统时浮现的现象。名词解释问题：a -complementation参照答案：a-互补。指lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的a-半乳糖昔酶阴性的突变体之间实现的互补。这两个

51、无酶学活性的产物混合在一起时，可恢复a-半乳糖昔酶的活性。名词解释问题：X-gal/IPTG参照答案：两者都是乳糖的衍生物，X-gal：乳糖操纵子底物，可以作为生色剂，被a-半乳糖昔酶分解后可产生兰色产物，可使菌落呈现兰色；IPTG:乳糖 操纵子诱导物。名词解释问题：lytic growth参照答案：裂解生长状态。噬菌体侵染宿主细胞后，大量复制并组装成子代噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂解的现象称裂解生长状态。名词解释问题：lysogenic state参照答案：溶源状态。噬菌体侵染宿主细胞后，将 入 噬菌体基因组DNA通过位点专一性重组整合到宿主的染色体DNA中，并随宿主的繁殖传给子代 细胞的现象

52、称溶源状态。名词解释问题：Multiplicity of infection参照答案：感染复数。指单个宿主细胞感染的噬菌体颗粒数，等于实验所用的噬菌体与细胞的数量之比。名词解释问题：Insertion vectors参照答案：插入型载体。通过特定的酶切位点容许外源DNA片段插入的载体称为插入型载体。名词解释问题：Replacement vectors参照答案：置换型载体。而容许外源DNA片段替代载体的非必须DNA片段的载体，称为置换型载体。名词解释问题：Cosmid参照答案：粘粒。带有将DNA包装到噬菌体颗粒中所需的cos序列的质粒。涉及质粒复制起点，可以象质粒同样转化并增殖；涉及cos位点，

53、可以 象噬菌体颗粒同样包装、侵染。名词解释问题：Replicative form DNA参照答案：复制型DNA 。在宿主细胞内，感染性的单链噬菌体DNA （正链）在宿主酶的作用下转变成环状双链DNA ，用于DNA的复制，这种双 链DNA称为复制型DNA 。名词解释问题：Phagemid参照答案：噬菌粒。具有ColEl复制起点及单拷贝的丝状体噬菌体重要基因间隔区的质粒载体。此基因间隔区含病毒DNA合成的起始与终结及噬菌体颗 粒形态发生所必须的所有顺式作用序列。含phagemid的细菌被噬菌体感染后，基因II蛋白作用于间隔区，启动滚环复制产生ssDNA并进行包装。您的答案：名词解释问题：M13K0

54、7 help phage参照答案：M13KO7辅助噬菌体。M13单链丝状噬菌体的衍生株，基因II带有一种G-T的突变。M13KO7基因组双链DNA可体现产生子代单 链DNA所必需的所有蛋白。M13K07中突变的基因II产物与自身携带的噬菌体复制起点的作用尚不如它与克隆于噬菌粒pUCll8和pUCll9中的病 毒复制起点的作用有效，可以保证在细胞所产生的病毒颗粒中来自噬菌粒的单链DNA可以占据优势。名词解释问题：Yeast artificial chromosomes参照答案：酵母人工染色体载体。运用酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）染色体的复制元件来驱动外源DNA片段

55、复制的载体称为酵母人工染色体载 体。由自主复制序列、着丝粒、复制子及选择标记等元件构成。名词解释问题： Bacterial artificial chromosomes参照答案：细菌人工染色体。是基于大肠杆菌的F质粒构建的高通量低拷贝质粒载体。涉及严谨型控制的复制区oriS 、启动DNA复制的由ATP驱 动的解旋酶（RepE），以及三个保证低拷贝并使质粒精确分派至子代细胞的基因座（parA,parB和parC）等元件）。名词解释问题：P1 artificial chromosomes参照答案：P1人工染色体载体。结合了 P1载体和BAC载体的特性，是P1噬菌体载体的改善载体。重组分子不能通过体

56、外包装来感染宿主细胞， 而只能通过电转化来将重组分子导入宿主细胞。名词解释问题：Shuttle vector参照答案：穿梭载体。可以在两类不同的宿主中复制、增殖和选择的载体称为穿梭载体。填空题问题：载体（Vehicle）的类型有（），（），（），（）等。参照答案：质粒载体；噬菌体载体；粘粒载体；噬菌粒载体填空题问题：Gene cloning是指（），基因文库（Gene library）是指（）。参照答案：运用重组DNA技术分离目的基因；由大量的具有基因D NA （即某毕生物的所有DNA顺序）的不同DNA片段的克隆所构成的群体填空题问题：Plasmid的定义是（），Plasmid能进行自我复制，

57、大多数为（）链（）状DNA分子，大小一般为（）kb。参照答案：染色体外的遗传因子；双；闭环；1200您的答案：填空题问题：（）即为质粒的拷贝数，按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为（）和（），（）质粒多数是某些具有转移能力的大质粒；（）质粒多数是某些不具有转移能力的小质粒。参照答案：单个细胞中所具有的质粒DNA分子数目；严谨型；松弛型；严谨型；松弛型填空题问题：松弛型质粒和严谨型质粒融合后来，杂合质粒一般优先使用（）的复制子。参照答案：松弛型参照答案：两个质粒在同一宿主中不能共存的现象；相似填空题问题：质粒具有转移性，它是指（），它需要（），（）和（）参照答案：在自然条件下，诸多质粒可以通过称为细菌接合的作用转移到新宿主内；移动基因mob ；转移基因tra ；转移起始位点填空题问题：根据质粒的转移性可以将质粒分为（）和（），一般大质粒都是（），（）一般都是小质粒，其上没有（）参照答案：接合型质粒；非接合型质粒；