柴胡有效成分提取工艺的研究

1、柴胡有效成分提取工艺的研究 肖功胜，杨云，孙维英，冯云霞，朱振华【摘要】目确实定柴胡有效成分提取的最正确工艺。方法以柴胡中挥发油吸收度和柴胡皂苷a的含量为指标，采用单因素实验挑选主要因素和程度，再以正交实验挑选柴胡有效成分提取最正确工艺。结果最正确工艺参数为40温浸，搜集相当于药材2倍量蒸馏液，继用8倍量含5%氨水的95%乙醇回流1h提取柴胡皂苷，可使挥发油吸收度达0.941，柴胡皂苷a的含量达0.32%。结论该工艺为柴胡有效成分的提取提供了可靠根据，且工艺条件稳定可靠，重复性好。【关键词】提取工艺柴胡皂苷a挥发油正交实验Keyrds：Extratintehnlgy;Saiksapnina;V

2、latileils;rthgnalexperient柴胡为伞形科植物柴胡BupleuruhinenseD.或狭叶柴胡Bupleurusrznerifliuild的枯燥根1。具有疏散退热、疏肝解郁、升阳举陷之成效，为中医治疗少阳症的首选要药。其主要化学成分为柴胡皂苷和挥发油类。柴胡作为临床常用药，中成药制剂品种众多，且大多以煎煮法提取柴胡皂苷类成分，而多以水蒸气蒸馏法提取挥发油2。由于柴胡皂苷a、d化学构造均具不稳定性，遇酸或受热易分别降解生成活性较弱的次生苷b1，b2，因此随着水蒸气蒸馏法提取时间的延长，柴胡皂苷a，d的含量将逐渐降低，以致严重影响了柴胡制剂的质量和临床疗效。目前国内关于柴胡提

3、取工艺的文献报道较多，但多以挥发油或柴胡皂苷a单独为指标进展考察，很少有同时考察挥发油和柴胡皂苷a的文献报道，更是未曾有文献报道过在保证挥发油提取率的同时还兼顾柴胡皂苷a的充分提龋因此，本研究采用正交实验综合考察柴胡中挥发油吸收度和柴胡皂苷a含量，挑选最正确工艺，以期为进步柴胡制剂的质量和疗效打下坚实基矗1仪器与试药1.1仪器岛津L-20A高效液相分析仪SPD-20A紫外检测器；752紫外分光光度计上海精细仪器科技；RE52-86A旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂；ETTLERAE240电子分析天平瑞士。1.2试药柴胡药材购于河南省药材公司，经本院陈随清教授鉴定为伞形科植物柴胡Bupleuruhi

4、nenseD.的枯燥根；柴胡皂苷a对照品自制，经峰面积归一化法测定含量为：99.91%；乙腈为色谱纯；水为双重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。2方法2.1单因素实验分别以药材浸渍温度、浸渍时间、料液体积比、蒸馏液搜集量等为因素，在不同程度下进展单因素实验，挑选出影响柴胡挥发油提取的主要因素和程度，同样分别以乙醇浓度、pH值、柴胡皂苷提取时间、料液体积比等为因素，在不同程度下进展单因素实验，挑选出影响柴胡皂苷提取的主要因素和程度。从而为正交实验设计提供根据。2.2挥发油的提取和测定方法随机称取50g柴胡枯燥粗粉，置于500l圆底烧瓶中，采用水蒸气蒸馏法在不同条件下提取柴胡挥发油，搜集蒸馏液，加3%丙

5、二醇摇匀，精细量取上述蒸馏液2l两份，一份置5l容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，作为样品液，另一份置蒸发皿中，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，转移至5l容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，作为空白。用752紫外分光光度计在277n波长处测定蒸馏液中挥发油的吸收度。2.3柴胡皂苷的提取取提取挥发油后的药渣，滤干，置于500l圆底烧瓶中，在不同条件下回流提取柴胡皂苷，过滤得滤液，减压低温浓缩成每毫升含0.5g柴胡的浓缩液，备用。2.4柴胡皂苷a含量测定2.5正交实验以柴胡蒸馏液中挥发油的吸收度和柴胡皂苷a的含量为检测指标，参照单因素实验结果，分别以药材浸渍温度、挥发油搜集量、柴胡皂苷提取时间、柴胡皂苷提取

6、溶剂料液比等主要因素及不同程度进展L9(34)正交设计，挑选最正确工艺。正交实验因素和程度见表1。表1正交实验因素及程度略3结果3.1浸渍温度对挥发油提取效果的影响分别在30，40，60，80温度下浸渍6h，料液比16，提取1次，考察浸渍温度对挥发油提取效果的影响。测得吸收度依次为：0.303，0.984，0.758，0.587。由测定结果可知，在40下浸渍吸收度到达最大。且变化显著，所以浸渍温度应选在40左右。3.2浸渍时间对挥发油提取效果的影响在40下，分别浸渍0，2，4，6，8h，料液比16，提取1次，考察浸渍时间对挥发油提取效果的影响。测得吸收度依次为：0.470，0.559，0.65

7、0，0.940，0.722。由测定结果可知，浸渍6h吸收度最大，浸渍4h和8h吸收度相当。3.3料液比对挥发油提取效果的影响料液比分别为15，16，18，110，提取1次，考察料液比对挥发油提取效果的影响，测得吸收度依次为：0.316，0.443，0.337，0.258。由测定结果可见，料液比16吸收度最大。且变化显著。3.4挥发油搜集量对挥发油提取效果的影响分别搜集100，200，300l蒸馏液，考察挥发油搜集量对挥发油提取效果的影响，测得吸收度依次为：0.454，0.507，0.596。由测定结果可知。随着搜集量的增多，吸收度逐渐增大，但增加趋势不显著。3.5乙醇浓度对柴胡皂苷提取效果的影

8、响分别以95%，75%，60%，45%乙醇，料液比为：16，提取柴胡皂苷。考察不同乙醇浓度对柴胡皂苷提取效果的影响，柴胡皂苷a含量依次为：0.20%，0.15%，0.12%，0.12%。由测定结果可知，柴胡皂苷提取率随乙醇浓度的降低而降低。在95%乙醇浓度时最大。且变化较显著。因此选用95%乙醇提龋3.6pH值对柴胡皂苷提取效果的影响分别用0，5%，10%，15%的氨水95%乙醇液提取皂苷。考察pH值对柴胡皂苷提取效果的影响，柴胡皂苷a含量依次为：0.20%，0.25%，0.24%，0.24%。由测定结果可知，碱性乙醇提取效果比较好，含5%10%氨水95%乙醇条件下提取液中柴胡皂苷a变化不显著

9、，因此选用含5%氨水。3.7提取时间对柴胡皂苷提取效果的影响用95%乙醇分别在0.5，1，2，3h提取皂苷。考察提取时间对皂苷提取效果的影响。柴胡皂苷a含量依次为：0.20%，0.25%，0.20%，0.20%。由测定结果可知，提取1h时提取率最大。提取时间再长提取率就逐渐下降。3.8料液比对柴胡皂苷提取效果的影响在10，8，6，5，3倍不同料液比条件下回流提取柴胡皂苷。考察料液比对柴胡皂苷提取效果的影响。柴胡皂苷a含量依次为：0.15%，0.15%，0.20%，0.21%，0.14%。由测定结果可知，料液比为在56倍时提取率最大。由表2和表3可知，柴胡挥发油搜集量的极差最大，其次是料液比和柴

10、胡皂苷提取时间，故对于柴胡提取效果影响的大小顺序为BDA，由于A和影响不显著，故综合考虑，选择最正确提取方案为A1B11D3，即40浸渍，搜集100l挥发油，8倍量含5%氨水的95%乙醇提取1h。3.10最正确方案的验证实验取50g柴胡粗粉置500l圆底烧瓶中，在最正确提取条件下提龋重复两次。结果见表4。表4验证实验结果略由表4可见，采用优化最正确工艺提取有效成分柴胡挥发油和皂苷，其挥发油吸收度和柴胡皂苷a的含量都较高，且工艺条件稳定可靠，重复性好。4讨论柴胡挥发油和柴胡皂苷为柴胡的主要有效成分，两者的提取是较为矛盾的。据文献资料，柴胡皂苷在6h内稳定，而要完全提取挥发油那么要较长时间。这将导

11、致柴胡皂苷的分解、降解等一系列不稳定的反响，使柴胡皂苷的含量降低。因此要同时兼顾挥发油和柴胡皂苷的提取，可考虑采用水蒸气蒸馏法提取柴胡挥发油，采用碱性醇提工艺代替传统的水提工艺提取柴胡皂苷。且在提取过程中发现，柴胡皂苷a受热容易分解，随着加热时间增长，含量逐渐减少，因此在各加热环节，如提取，浓缩，枯燥过程中应尽量采用低温，以减少柴胡皂苷a的损失。中药成分复杂,应综合考虑各有效成分的性质及其在制备过程中的变化,以保证制剂的质量和疗效。据文献资料，柴胡中含柴胡皂苷a大约在0.2%0.4%，从本实验最正确工艺提取液中测得柴胡中柴胡皂苷a的含量为0.32%，因此本工艺提取效果较好。至于挥发油的含量，各种文献所得结果不尽一样，甚至