非何杰金淋巴瘤微血管密度及其血清bFGF水平

1、非何杰金淋巴瘤微血管密度及其血清bFGF程度【关键词】碱性成纤维细胞生长因子TissueirvesseldensityandlevelsfserubasifibrblastgrthfatrinpatientsithnnHdgkinslypha7.61.2)ngL-1and4.11.0ngL-1,respetively,hiherehigherthanthat1.71.4pgL-1inhealthyntrls(P0.05).TheserubFGFlevelinTelltypeNHLassignifiantlyhigherthanthatinBelltype(10.71.4)ngL-1vs2.71

2、.0ngL-1,P0.05.TheeanVDfthe20NHLases(3918)asbviuslyhigherthanthatinbenignlyphadenpathygrup(135,P0.05)andtheeanVDinTelltypeNHLassignifiantlyhigherthanthatinBelltype4715vs2717,P0.05.NLUSIN:TheNHLpatients,espeiallythseithTelltypeNHL,havesignifiantlyhigherserubFGFlevelsandtissueVDthanntrls.Thedatapresent

3、edherestrnglysuggestthatthebFGFediatedangigenesisaylselyberrelatediththepathgenesisandpathlgiharateristisinNHL.【Keyrds】basifibrblastgrthfatr;nnHdgkinslypha;ELISA;irvesseldensity;iunhistheistry【摘要】目的:分析不同临床特征和病理分型的非何杰金淋巴瘤(NHL)患者的血清碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)程度及瘤性组织微血管密度VD的差异.方法:搜集32初发未经化疗13，化疗后缓解19例NHL患者及10例安康

4、对照者血清，采用夹心ELISA法测定其bFGF程度；采用vF抗体组化染色法检测其中20T细胞型8，B细胞12例NHL组织的VD，以10例良性淋巴结病组织作为对照.统计学分析，采用t检验法.结果:13例初发患者7.61.2ngL-1、19例化疗后缓解患者(4.11.0)ngL-1的bFGF程度均显著高于安康对照(1.71.4)pgL-1，P0.05；初治患者与缓解患者间bFGF程度无统计学意义，但T细胞型10.71.4ngL-1显著高于B细胞型2.71.0ngL-1,P0.05.20例NHL及10例良性淋巴结病组织平均VD分别为(3918)和(135)，相差显著P0.05；T细胞型患者平均VD明

5、显高于B细胞型4715vs2717,P0.05.结论:NHL，尤其是T细胞型患者，其血清bFGF程度及组织VD均值显著增高.提示bFGF介导的血管新生可能与NHL的发生及病理特征亲密相关.【关键词】碱性成纤维细胞生长因子；非霍奇金淋巴瘤；酶联免疫吸附试验；微血管密度；免疫组化0引言在肿瘤形成过程中，异常的血管生成发挥着关键作用1.碱性成纤维细胞生长因子(basifibrblastgrthfatr,bFGF)是一种非常重要的正性调控因子.已发现，在多种癌症患者的体液中，bFGF程度明显高于正常人2.最近，Salven等3研究指出，初发非何杰金淋巴瘤(NHL)患者血清中高浓度的bFGF可用于预后判

6、断，提示bFGF可能是该病一种新的病情指标，值得进一步讨论.据此，我们测定了32例NHL患者血清bFGF程度；并检测了部分NHL组织的微血管密度irvesseldensity，VD，以进一步证实血清bFGF程度和VD与NHL恶性生物学特征间的关系.1对象和方法1.1对象西京医院血液内科200101/200212间NHL患者32男17，女15例，年龄3082平均54岁，均经组织病理确诊.按病理形态学及免疫组化结果分为T细胞型9例和B细胞型(19例),另4例不能分类；按原发灶不同部位分为结性淋巴结、脾脏及扁桃腺，20例及结外鼻窦鼻腔、胃体、回盲部、肾上腺，12例两大类.采用AnnArbr法进展临床

7、分期，其中I期5例，II期13例，III期2例，IV期12例.化疗前采血者13例，化疗后缓解期采血者19例，化疗方案分别为HPBle环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、强的松、博莱霉素和BAD米托蒽醌、博莱霉素、阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、地塞米松.至2022/02所有患者均存活，并在继续观察中.bFGF对照血清取自10例安康志愿者；VD检测对照为10例良性淋巴结病组织.20T细胞型8，B细胞型12例NHL石蜡包埋组织来自第四军医大学病理学教研室.1.2方法别离血清，-80冻存备检.bFGF检测采用ELISA法夹心ELISA检测试剂盒系美国RDSyste公司产品.将样本和标准品各100L参加已包被bF

8、GFAb的96孔板，室温孵育2h，洗板后参加辣根过氧化物酶标记的bFGF多抗，室温孵育2h，再次洗板后参加底物，避光显色30in后参加兔抗人因子相关抗原FRAGDAK公司，4过夜，次日复温至37；PBS振洗35in后，加DaKEnVisinT+/HRP显色系统DAK公司，37孵育60in；PBS振洗35in后，DAB显色，水洗终止；苏木素复染细胞核1in；脱水透明，中性树胶封片.结果断定：FRAG兔抗人因子相关抗原，DAK公司以血管内皮细胞胞质内出现棕黄色颗粒为阳性断定标准；VD计数参照eidner等4报道的方法，在低倍视野下选取肿瘤微血管数量FRAG阳性最丰富区域，在200视野范围计算5个视

9、野的微血管数目，取平均值作为VD.统计学处理:组间比拟应用t检验和非参数秩和检验.2结果2.1NHL患者血清bFGF程度32例NHL患者血清bFGF平均浓度为7.71.27ngL-1，较正常对照组1.71.4pgL-1明显升高P0.05，虽然缓解期患者血清bFGF较初发未治者有所下降，但无统计学意义.在不同临床分期与不同发病部位间血清bFGF程度无明显差异，但T细胞型NHL的bFGF明显高于B细胞型.男女性别及小于和大于60岁的患者血清bFGF无明显差异Tab1.表1非何杰金淋巴瘤血清bFGF程度(略)2.2NHL组织VD20例NHL组织VD值(3918)明显高于对照组135Fig1，2，其中

10、T细胞型VD均值4715明显高于B细胞型(2717)(P0.05)，说明T细胞型NHL组织有更为丰富的微血管形成.图1NHL患者组织VD图2良性淋巴结病组织VD(略)3讨论恶性血液病如同实体瘤也存在异常血管生成现象.国外研究发现白血病患者的骨髓较安康对照骨髓有明显增高的微血管密度，推测白血病细胞诱导了异常的骨髓血管生成，这种异常血管生成又是白血病发生开展的依赖条件之一，二者互为促进5.Vaa等6发如今NHL组织中，高度恶性组较低度恶性组微血管密度高，提示血管生成与NHL发生及恶性程度可能有一定关系.本研究中，多数NHL患者，包括初发及化疗后持续缓解者，血清bFGF程度均较正常人有显著增高,且瘤

11、组织中VD显著高于对照,这一结果根本支持Vaa的观点.提示NHL的发生可能与bFGF诱发的血管生成有一定相关性，但血清bFGF程度与NHL原发部位、年龄及临床分期并无直接关系.尽管如此，我们发现NHL患者血清bFGF程度在T细胞型与B细胞型之间却存在明显差异，T细胞型VD均值也明显高于B细胞型.鉴于临床上T细胞谱系淋巴瘤往往具有耐药、易复发等高恶性特征，故这一异常的bFGF和VD是否直接或间接影响了T细胞型NHL的恶性生物学过程，值得进一步研究.至于NHL血清中高程度的bFGF终究是源自瘤细胞的自分泌还是机体对瘤细胞反响，目前尚无定论.因为体内分泌bFGF的细胞较多如外周血白细胞7，血管内皮细

12、胞等8.为试图说明瘤体血清中bFGF升高的机制，Kandel等9建立了一种鼠纤维肉瘤模型，结果发现bFGF的表达在肿瘤初期处于正常状态，至后期鼠血清bFGF那么显著升高，这种变化与瘤体内相应的血管新生同步.这一多阶段肿瘤血管生成形式虽提示血清bFGF与肿瘤组织血管新生亲密相关，但仍不能说明bFGF确实切细胞来源.本结果在一定程度上也根本支持Kandel的观点.bFGF作为一种强有力的促血管生成剂，在许多肿瘤血管生成中是不可缺少的因素，但并非唯一的因素.目前发现，bFGF与VEGF作用亲密相关10，实验说明静息期的内皮细胞不表达VEGF，但内皮细胞培养时参加bFGF或上调其内源性bFGF均能引起

13、靶细胞的VEGF表达增加.动物模型显示，bFGF诱导的VEGF合成及小鼠角膜血管形成，能被VEGF抗体阻断，因此内皮细胞产生的VEGF可能是bFGF诱导血管生成的一种重要的“中介自分泌因子.根据以上文献报道并结合本研究，我们推测，NHL患者血清中高程度的bFGF也可能是通过VEGF的中介作用，间接刺激血管新生，致使NHL组织VD增高，从而影响NHL细胞的恶性生物学特性.因此，这一结果有可能为以bFGF/VEGF及其受体为作用靶点的新的抗NHL策略提供初步根据.【参考文献】1FlkanJ.Angigenesisinaner,vasular,rheuatidandtherdiseaseJ.Nate

14、d,1995;1(1):27-31.2KlekiK,StepienH,NarebskiJ.VasularendthelialgrthfatrandbasifibrblastgrthfatrevaluatininbldserufpatientsithhrnallyativeandinativeadrenalglandtuursJ.ytbis,2000;101(396):55-64.3SalvenP,TeerenhviL,JensuuH.Ahighpretreatentserubasifibrblastgrthfatrnentratinisanindependentpreditrfprprgnsi

15、sinnnHdgkinslyphaJ.Bld,1999;94(10):3334-3339.4EidnerN,SepleJP,elhR,FlkanJ.TurangigenesisrrelatesithetastasisininvasivebreastarinaJ.NEnglJed,1991;324(1):1-8.5PerezAtaydeAR,SallanSE,TedrU,nnrsS,AllredE,FlkanJ.SpetrufturangigenesisinthebnearrfhildrenithautelyphblastileukeiaJ.AJPathl,1997;150(3):815-821

16、.6VaaA,RibattiD,RuL,GiahettaF,NiB,QundaatteF,RiaR,Iurlar,DaaF.AngigenesisextentandarphagedensityinreasesiultaneuslyithpathlgialprgressininBellnnHdgkinslyphasJ.BrJaner,1999;79(5):965-970.7VaaA,RibattiD,Iurlar,AlbiniA,inishetti,BusslinF,PellegrinA,RiaR,Rusnati,Presta,VinentiV,PersiG,DaaF.Huanlyphblast

17、idellsprdueextraellularatrixdegradingenzyesandindueendthelialellprliferatin,igratin,rphgenesis,andangigenesisJ.IntJlinLabRes,1998;28(1):55-68.8ShulzesthffK,Risau,VllerE,Srg.InsitudetetinfbasifibrblastgrthfatrbyhighlyspeifiantibdiesJ.AJPathl,1990;137(1):85-92.9KandelJ,BssyetzelE,RadvanyiF,Klagsbrun,FlkanJ,HanahanD.NevasularizatinisassiatedithasithttheexprtfbFGFintheu