DB32-T 2792-2015南粳9108原种生产技术规程-（高清现行）

1、ICS 65.020.20B22备案号：47706-2015DB32江苏省地方标准DB32/T 2792-2015南粳 9108 原种生产技术规程Basic Seed Producing Technology of Rice Variety Nanjing 91082015 - 10 - 20 发布2015 - 12 - 20 实施江苏省质量技术监督局发 布DB32/T 2792-2015I前言为规范南粳9108原种生产技术，制定本标准。本标准按GB/T 1.12009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写编制。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院。本标准主要起草

2、人：周丽慧、陈涛、赵庆勇、姚姝、赵春芳、赵凌、朱镇、张亚东、王才林。DB32/T 2792-2015 PAGE 5南粳 9108 原种生产技术规程范围本标准规定了南粳9108原种生产的品种来源和类型、原种生产技术、株行决选技术。本标准适用于苏中及宁镇扬丘陵地区中上等肥力条件下南粳9108原种生产。规范性引用文件下列文件对于文本的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件， 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 3543.1-1995农作物种子检验规程总则GB/T 3543.2-1995农作物种子检验规程扦样GB/T 3543.3

3、-1995农作物种子检验规程净度分析GB/T 3543.4-1995农作物种子检验规程发芽试验GB/T 3543.5-1995农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定GB/T 3543.6-1995农作物种子检验规程水分测定GB/T 3543.7-1995农作物种子检验规程其他项目检验GB 4404.l-2008粮食作物种子禾谷类GB/T 17316-2011水稻原种生产技术操作规程DB32/T 79-2007水稻壮秧与育秧技术标准DB32/T 17622011稻米食味品质评价DB32/T 27912015水稻品种 南粳9108品种来源和类型来源南粳 9108 原原种（育种家）种子。类型迟熟中粳

4、稻。原种生产技术方法采用改良混合选择方法，即单株选择、分系比较、混合繁殖的三圃制。单株选择选择标准和决选标准应符合DB32/T 27912015水稻品种 南粳9108的规定。株行圃编号将上年当选的各单株种子，按顺序编号。育秧所有单株种子(包括对照种子)的浸种、催芽、播种， 均须分别在同 1d 进行，应符合 DB32/T 79-2007的规定。播期湿润育秧5月10日5月15日播种。播种密度按湿润育秧每亩净秧板播量 20kg 的密度标准进行控制。秧龄湿润育秧秧龄30d左右。田间设计和隔离要求符合GB/T 17316-2011 的规定，空间隔离距离不少于 100m，时间隔离扬花期要错开 15d 以上

5、。移栽应符合 GB/T 17316-2011 的规定，单株栽插。田间管理和记载应符合 GB/T 17316-2011 的规定。淘汰及收获应符合 GB/T 17316-2011 的规定。株行决选株行选择标准应符合 DB32/T 27912015 的规定。收获后的株行按附录 A 进行暗胚乳突变基因和香味基因检测，淘汰不含暗胚乳突变基因和香味基因的株行。株系圃应符合 GB/T 17316-2011 的规定。原种圃应符合 GB/T 17316-2011 的规定。储藏和检验储藏和检验按GB/T 3543.17-1995进行，符合GB 4404.1-2008之规定的原种种子签发合格证书。附 录 A（资料性

6、附录）南粳 9108 暗胚乳突变基因和香米基因的分子检测方法南粳9108是含有暗胚乳突变基因Wx-mq和香米基因fgr的水稻品种，可针对这两个基因进行分子标记检测，辅助辨别品种的真伪。Wx-mq基因四引物PCR分子标记检测四引物PCR 分子标记序列稻谷出苗后在三叶期按单株提取基因组DNA，利用四引物PCR 标记进行分子检测。正向外引物（Wx-mq-O-F）序列为 5-ATGTTGTGTTCTTGTGTTCTTTGCAGGC-3，反向外引物（Wx-mq-O-R）序列为 5-GTAGATCTTCTCACCGGTCTTTCCCCAA-3， 正向内引物（Wx-mq-I-F）序列为 5-GGGTGAGG

7、TTTTTCCATTGCTACAATCG-3， 反向内引物（Wx-mq-I-R）序列为 5-GTCGATGAACACACGGTCGACTCAAT-3。PCR 反应体系。20 L PCR 反应体系包括：DNA ( 10 ng/L) 2.0 L，Primer (4 pmol/L) 2.0 L，10PCR Buffer ( 含MgCl2 ) 2.0 L, dNTP( 2.5 mmol /L) 0.4 L，Taq 酶( 5U /L) 0. 5 L 和 ddH2O 13.1 L。PCR 反应在MJ Research PTC-200 热循环仪上进行，反应程序如下：94 下预变性5 min，每个循环94 下

8、变性30 s, 65 下退火 30 s，72 下延伸 1 min，共 35 个循环，最后 72下延伸 10 min，4下保存待用。A.1.3 产物分析反应产物在质量比浓度为 1.5%的琼脂糖凝胶上电泳，经溴化乙锭染色并于凝胶成像系统下观察分析。利用 Wx-mq 基因四引物分子标记扩增水稻品种的基因组 DNA，南粳 9108 标准稻谷能同时扩增出439bp 和292bp 的DNA 条带，而非南粳9108 标准稻谷则同时扩增出439bp 和200bp 或同时存在439bp、292bp 和 200bp 的DNA 条带。M123456789102000 bp1000 bp750 bp500 bp250

9、 bp100 bp439 bp292 bp200 bp（M：分子量标准；1、2、5、7、8、9、10为南粳9108稻谷标准带型，3、4、6为非标准带型。）香米基因 fgr 的分子标记检测fgr 标记序列将稻谷进行幼苗 DNA 提取，利用 InDel 标记进行分子检测。正向引物（InDel-E2-F）序列为 5-GGGAGGCGCTGAAGAGGA-3，反向引物序列（InDel-E2-R）序列为 5-GGGTAGTCACCACCCTACCTTG-3。PCR 反应体系。20 L PCR 反应体系包括：DNA ( 10 ng/L) 2.0 L，Primer (4 pmol/L) 2.0 L，10PC

10、R Buffer ( 含MgCl2 ) 2.0 L, dNTP( 2.5 mmol /L) 0.4 L，Taq 酶( 5U /L) 0. 5 L 和 ddH2O 13.1 L。PCR 反应在MJResearch PTC-200 热循环仪上进行，反应程序如下：94 下预变性 5 min，每个循环 94 下变性 30s， 55 下退火 30 s，72 下延伸 1 min，共 35 个循环，最后 72下延伸 10 min, 4下保存待用。产物分析反应产物在8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳，经硝酸银染色并于凝胶成像系统下观察分析。利用fgr基因InDel分子标记扩增水稻品种的基因组DNA，南粳9108