1、血清学检验-新疆农业职业技术学院首

1、 能力单元八 血清学检验与生物制品 一 血清学检验定义：抗原及相应抗体在体外的特异性结合。在体外能发生可见的免疫反应。抗体主要存在于血清中，将这一反应称为-。(一)血清学试验的特点：1、特异性：抗原决定簇的组成、结构不同，所产生的抗体也就不同，一种抗原只能与相应抗体结合，表现出高度的特异性。2、交叉性：（二）用已知测未知：用已知抗原（抗体）监测未知抗体（抗原）。（三）最适比与带现象：最适比：抗原与抗体结合需要适当比例才能出现可见反应。带现象：如抗原过多或抗体过多，大的抗原抗体复合物很难形成，不能出现可见的反应。（四）反应的可逆性：正常：温度：0-40度，PH：4-9。当T60度，PH3时，发生

2、可逆反应。（五）反应的两阶段型：第一阶段：抗原抗体相互结合，作用快，形成的复合物较小，不出现可见反应。第二阶段：在电解质作用下，形成大的复合物，出现各种可见反应，反应慢。（六）反应的敏感性：极微量的抗原或抗体都能检测。二 影响血清学实验的因素1、电解质：常用的是氯化纳，0.9%生理盐水，促进可见现象的发生。2、温度：37度，适宜的温度可增加抗原抗体活性及相互接触的机会。3、PH=6.8,PH=5-5.5,非特异性沉淀，PH=2-3,离解。 4、振荡：加速碰撞，但过强可解离。5、杂质：蛋白质、脂质、糖等杂志时，抑制反应进行，或引起非特异性反应。故实验设立对照。三、血清学试验的类型： （一）凝集试

3、验：颗粒性抗原与相应抗体结合后，在电解质存在下互相凝结成絮片状团块的现象。参与的抗原为凝集原，抗体为凝集素。 、直接凝集试验：（1）平板凝集试验：例如：沙门氏菌，痢疾杆菌，布氏杆菌病，血型鉴定。（2）试管凝集试验：抗原等量，抗体作倍比稀释，37，50%以上为该血清的效价（滴度）。例如：布氏杆菌病，沙门氏菌。 2、间接凝集试验：将可溶性抗原（或抗体）吸附与免疫无关的颗粒表面，再与抗体结合，出现肉眼可见的凝集现象。间接血凝试验：以红细胞为载体。正向血凝实验：红细胞+抗原 抗体。反向血凝试验：红细胞+抗体 抗原。（二）沉淀试验：可溶性抗原与相应抗体结合后，形成肉眼可见的白色沉淀。、环状沉淀试验：d=

4、34毫米试管中，抗血清加入管底，再将稀释的抗原重叠其上，阳性：一二分钟出现反应，一小时，三-五h。例如：炭疽病诊断。2、琼脂扩散实验：机理：略例如：蓝舌病，马传染性贫血，MD，传染性法氏囊病。（三）补体结合试验：1、原理：补体无特异性，能与任何抗原抗体复合物结合，红细胞+溶血素+补体 溶血，阴性。红细胞+溶血素 不溶血，为阳性2、应用：牛付结核，乙型脑炎，马鼻疽（四）中和试验：病毒或毒素与相应抗体结合后，可失去对易感动物的致病力的实验。1、毒素、抗毒素的中和试验：LD50常用2、病毒中和试验：（1）体外中和试验 （2）体内中和试验例： 口蹄疫病毒(FMDV) 47d乳鼠 乳鼠死亡 FMDV+抗

5、血清 47d乳鼠 乳鼠不死亡例: FMDV 仔猪肾传代细胞(IB-RS-2)单层细胞 细胞病变(CPU)：变圆、成串、空泡、变形、脱落、裂解FMDV+抗血清 IB-RS-2单层细胞 细胞无病变CPU（五）抗体标记技术：用荧光素、酶和同位素等对抗体进行标记的试验技术。1、荧光抗体技术：将荧光染料标记在抗体上制成荧光抗体，标记的抗体仍能与相应抗原结合并形成带有荧光的抗原抗体复合物。 荧光材料：异硫氰酸荧光素 显微镜下的荧光荧光显微镜（1）直接法：荧光染料+已知抗体 监测未知抗原。（2）间接法：荧光染料标记在抗抗体上检测未知抗原 2、免疫酶标抗体技术： 利用抗原抗体的特异性结合和酶的高效特异的催化作用，显色而建立起来的免疫检测技术。酶标记抗体抗原复合物上的酶在遇到相应的底物时，能催化底物分解，并使底物中的供氢体呈现颜色反应。常用标记酶：辣根过氧化物酶（HRP）。作用底物为过氧化氢。供氢体：3，3-二氨基联苯胺（棕色沉淀）免疫酶组织化学染色法；邻苯二胺（橙色可溶物质）酶联免疫吸附试验。直接法：1 免疫酶组织化学染色法：酶标抗体+被检抗原洗涤 过氧化氢+DAB的反应液中