大气中苯并检出方法检出限#

1、大气中苯并 (a 芘的测定方法苯并 a芘是多环芳香烃类化合物，又名 3，4苯并芘，简称 Bap，分子式 C20H12；分子量 253.23 ；沸点 475；熔点 179；相对密度 1.351 。3，4苯并 芘纯品为无色或微黄色针状结晶，在水中溶解度较小，易溶于苯、氯仿、乙 醚、丙酮、环己烷、二甲苯等有机溶剂。在苯中溶解呈蓝色或紫色荧光，在浓 硫酸中呈桔红色并伴有绿色荧光。 3，4苯并芘是环境中普遍存在的对动物致 癌性很强的一种物质，主要是含碳燃料及有机物热解过程中的产物。煤炭、石 油等在无氧加热裂解过程中产生的烷烃、烯烃，经过脱氢、聚合，常可产生一 定数量的 3，4苯并芘。工厂烟气中的悬浮颗粒

2、物上吸附有 3，4苯并芘，散 布在大气，一部分降落到水面和陆地上，从而污染水源和土壤。炼焦、化工、 染料等工厂排出的工业废水中以及熏制食品、香烟烟雾中均含有3，4苯并芘。3，4苯并芘对动物具有局部和全身的致癌作用，对猴子反复皮下注射可在局 部形成肿瘤，从气管反复滴注可形成肺癌，在小鼠身上涂抹可使小鼠诱发皮肤 癌。流行病学调查认为人的肺癌与环境中 3，4苯并芘的含量之间有着极为密 切关系。虽然目前各国尚无公认 3，4苯并芘的最高容许浓度，但通过动物实 验和现场调查提出了一些建议，例如：车间空气中 3，4苯并芘最高容许浓度为 0.14 g/m3； 居民区大气最高容许浓度为 103g/m3。 飘尘上

3、有机物的组分异常复杂，仅其中多环芳烃 (简称 PAH就有几百种之多。 测定 3，4苯并芘的方法很多，主要是将 3， 4苯并芘与其他多环芳烃分开， 常用的有柱层、纸层、薄层、气相色谱、高压液相色谱、气质联机等一系列分 离体系。其中以气相色谱法分离 PAH尤为重要。 利用气相色谱法分离迅速、效能高，再与薄层层析结合起来，可以迅速判断提 取物中某些 PAH的存在。特别是用毛细管色谱与质谱及核磁共振谱联用，从城 市悬浮颗粒物、烟草焦油及汽车废气中，可分离出 100多种 PAH，极大地发挥 了气相色谱的分离效能。用高压液相色谱法分离 PAH比气相色谱法具有以下优点：工作温度低 ( 80 对被分离的各组分

4、可以完整地收集起来，再进一步的用紫外或荧光光谱分析。 色谱柱是十八烷基硅烷 (ODS化学键为固定相。被检样品在注入分离柱前，最好 先经过薄层作初步分离，除去其中混杂的烷烃、烯烃、杂环等化合物，以减轻 分离柱的负担，此种方法可以和薄层层析联用，是一种快速鉴定PAH较好的方法。柱层、纸层和薄层层析法，所需设备简单、操作容易，易于掌握和推广。但 是，柱层析法和纸层析法所需时间长，分离效果较差，无法排除PAH异构体之间的干扰，使之不能精确定量。为了改进分离效果，可以先经过柱层析，再在 乙酰化纸上进行分离。乙酰化纤维素薄层分离同分异构体效果较其他薄层为 好。采用两种吸附剂 ( 如氧化铝和 40%乙酸的乙

5、酰化纤维素 混合制板，进行双 向展开，第一向用正烷苯 (9 1，第二向用甲醇乙醚水 (441。这时 可以将干扰 3，4苯并芘的几种干扰物分离，进行几种主要 PAH的定量测定。 一、高效液相色谱法 1( 一 原理 空气中颗粒物中的多环芳烃被采集在玻璃纤维滤纸上，经索氏提取或真空升华/ 13后，用高效液相色谱分离测定，以保留时间定性，峰高或峰面积定量 ( 二 仪器见图610。(1大流量采样器见第十二章第一节总悬浮颗粒物大流量采样称量法。 (2 索氏提取器容量 60ml (3 升华管见图 69。(4真空升华装置(5 浓缩器及浓缩瓶 见图 6-11(6微量注射器 10l 、20l ，刻度应校正。(7

6、离心机 4000rpm。(8离心管 5ml ，刻度应校正。(9 高效液相色谱仪 附荧光检测器或紫外检测器。( 三 试剂(1玻璃纤维滤纸规格见第十二章第一节总悬浮颗粒物。滤纸需作预处理，方法 是将滤纸不重叠地放在高温炉中，经 500灼烧 30min，保存备用。(2 色谱柱 内径 4mm，长 20cm不锈钢柱，内装 YWGCH型微粒硅胶粒子 (10 m，塔板数为 30000/m，柱压不超过 5MPa。(3 苯 重蒸馏。/ 13(4 甲醇 重蒸馏。(5 环己烷 重蒸馏。(6碱性氧化铝 200 300 目。(7标准溶液 取一个 10ml 棕色容量瓶，准确称量，然后小心加入约 10mg苯并 a芘 ，再准

7、确称量，两次称量之差即为苯并 a芘质量。加苯溶解并稀释 至刻度，计算每毫升溶液中苯并 a芘的含量。然后再用甲醇稀释成 1.00ml 含 100g 苯并 a芘的贮备液。临用时，用甲醇稀释成 1.00ml 含 2g 苯并 a芘的标准溶液。贮于棕色容量瓶中，置冰箱中保存。( 四 采样 采样方法同第十二章第一节中“总悬浮颗粒物大流量采样重量法” ( 五 分析步骤液相色谱仪测试条件 分析时，应根据液相色谱仪的型号和性能制定能测定苯并a芘的最佳测试条件。柱温：室温。流动相： (3 1甲醇水。流动相温度： 40。流量： 1ml/min 。柱压： 4MPa。 检测器：紫外检测器波长 254nm。 荧光检测器激

8、发波长 365nm。 荧光检测器发射波长 405nm。绘制标准曲线和测定校正因子 在作样品测定的同时，绘制标准曲线或测定校正因子。(1绘制标准曲线将液相色谱仪调至最佳测试条件，如用紫外检测器，可用微量 注射器分别吸量 1.00ml 含 100g 苯并 a芘标准溶液 5、10、15、20l 注 入色谱仪；如用荧光检测器，可用微量注射器分别吸量 1.00m1含 2g苯并 a芘标准溶液 2、4、6、8、10l 注入色谱仪，得苯并 a芘的色谱峰和 保留时间。另取试剂空白溶液作零浓度点的测定，每个浓度重复三次测定，得 峰面积或峰高的平均值。以苯并 a芘的含量 (ng 为横坐标，峰面积 (mm2或 峰高(

9、mm为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归线的斜率。以斜率倒数作为样 品测定的计算因子 Bs(ng/mm2或 ng/mm。(2测定校正因子在测定的线性范围内，可用单点校正法求校正因子。在样品测 定同时，取试剂空白溶液和与样品提取溶液苯并 a芘浓度相接近的标准溶 液，按液相色谱的最佳测试条件进行测定，得苯并 a芘的色谱峰和保留时 间。重复做三次，得峰面积或峰高的平均值。用下列公式计算校正因子：式中 f 校正因子， ng/mm2或 ng/mm； cs标准溶液中苯并 a芘含量， ng； As标准溶液平均峰面积或峰高， mm2或 mm； A0试剂空白溶液平均峰面积或峰高 mm2或 mm。样品测定(1 样品

10、提取 用索氏提取法或真空升华法。 索氏连续提取法：采样后，取/ 1380 100cm2的玻璃纤维滤纸，折叠后放进索氏提取器，加 40ml 环己烷，于沸水 浴中连续提取 8h(每小时回流次数不少于 10 次。将提取液移至浓缩器中，在 7080水浴上减压浓缩至 0.5 1.0ml( 不可蒸干 。将浓缩液转移至 5ml 离心 管内，用少量环已烷洗涤浓缩瓶，合并于离心管内，使总体积控制在 1.0ml 。 加入 0.5g 碱性氧化铝，摇匀，离心 5min，取上清液待测。 真空升华提取法：采样后，取 80100cm2 的玻璃纤维滤纸，卷成筒状，放入 升华管内。勿使滤纸折叠或堵塞管口，旋紧磨口。接口处用少量

11、石膏浆密封， 石膏固化后，将升华管放在管状电炉内，连接气路和真空泵，将管内抽成真 空， 35min 后，转动三通活塞 4，向管内充氮气，再抽真空、再充氮气，如此 重复三次，以除去管内残留的空气。同时，将管状炉升温至 300，升华 40min。此时，可看到黄色的油状物凝集在升华管的毛细管内壁上，为防止升华 物被抽走，可在毛细管一端外壁放一小块纱布，裹以冰块冷却。待管状电炉温 度下降至室温后，转动三通活塞，使内外气压平衡，关闭真空泵 ( 避免真空泵的 油进入管道和真空规中 。取下升华管，旋开磨口，将毛细管的大口朝上，垂直 地固定在铁架上。用 100 l 注射器吸取甲醇，注入毛细管内壁，必要时可用金

12、 属丝摩擦管壁，帮助溶解，如此重复多次冲洗内壁，冲洗液收集于浓缩管中， 将洗脱液浓缩至 0.1 0.5ml ，即为待测样品。(2样品分析在液相色谱仪的最佳测试条件下，取 120l 样品提取液 ( 根据浓 度大小决定进样量 注入色谱仪，得色谱峰，以保留时间确认苯并 a芘峰， 测定峰面积 (mm2或峰高 (mm，重复做三次，得峰面积或峰高的平均值。 在样品测定的同时，取同样规格及大小的未采样滤纸，按相同的操作步骤作试 剂空白测定。( 六 计算1. 用绘制标准曲线法式中 c空气中苯并 a芘浓度， g/100m3； A样品溶液峰面积或峰高， mm2或 mm； A0试剂空白溶液峰面积或峰高， mm2或

13、mm； Bs用标准溶液绘制标准曲线得到的计算因子， ng/mm2或 ng/mm； V1样品提取溶液的总体积， ml；式中 f 用单点校正法得到的校正因子，ng/mm2或 ng/mm；V2注入色谱仪中样品溶液的体积，ml；S1滤纸总过滤面积， cm2；S2分析时所取滤纸的过滤面积，2 cm；Es由实验室确定的苯并 a芘平均提取效率；V0换算成标准状况下的采样体积，3m。2. 用单点校正法其他符号与上式相同 ( 七 说明(1检出限和测定范围本法检出限 0.1ng( 荧光检测器、10ng(紫外检测器 。用 荧光检测器测定范围为 0.2 20ng苯并 a芘。如采样体积为 1440m3，取 1/5 滤纸

14、样品，制成溶液总体积为 1ml，进样量为 10l ，则可测浓度范围为/ 1330.007 0.7 g/100m3。(2精密度对浓度为 0.17 17mg/L的溶液重复测定的相对标准差为 9.5% 3.1%。(3干扰与排除样品经过预处理以及色谱柱分离，消除了大部分有机物的干扰。(4 真空升华法和连续提取法各具优缺点。前法操作简单、快速、节省溶剂，可 同时提取一组样品，但需要有一定的设备和条件，后法不需要特殊仪器设备， 方法简单，提取效率高，易推广；缺点是使用溶剂多，需要增加浓缩这一步 骤，提取时间太长。实验证明，这两种方法提取颗粒物中苯并 a芘的回收率 都很高，加入 5g 苯并 a芘，真空升华法

15、回收率为 95%100%，索氏提取 法为 96% 108%。(53 ，4苯并芘是致癌性物质，操作人员要特别注意防护，防止污染。接触 3，4苯并芘溶液时，要带医用橡胶手套，并在专用实验台上操作，标准溶液 要注意保管。测定后的 3， 4苯并芘废液应集中起来，统一处理。所用过的玻 璃仪器，必须用铬酸钾硫酸洗液浸泡 4h 以上，最好浸泡过夜后用水洗净。 (6色谱条件的选择流动相：用甲醇和水调节其不同比例，在每种比例下，变化流量，固定柱 温，用萘、联苯、菲、蒽混合样品测量在各种条件下的保留值、柱效和蒽菲的 分离度，结果见表 610。表 610 流动相极性、流量变化对多环芳烃保留值、柱效和分离度 (菲、蒽

16、 的影响续表/ 13流动相甲醇和水的比例影响分离组分的保留值、柱效和分离度。如增加甲醇，保留时间减少，柱效和分离度发生变化，这主要是由流动相极性变化所引起 的。另外，流量对保留时间、柱效和分离度也有影响，如流量变大，则保留时 间减小，柱效降低，分离度下降。因此，对于甲醇和水的比例以及流量均须严 格控制恒定。柱温：提高柱温能缩短保留时间、增加塔板数 （见表 611，这是因为温度 增高，溶剂粘度减少，增加了溶剂在固定相中的渗透性，所以加快了分离；但 温度过高，对低沸点溶剂 （如甲醇 易形成气泡析出，影响结果。表 6 11 柱温对保留值、柱效和分离度影响（7标准和空气样品的色谱图/ 13标准和空气样

17、品的色谱图示于图 612、图 613、图 614，空气样品测量结果列于表 6 12表 612 大气飘尘中多环芳烃含量 (ng/m 3/ 13从色谱图上看到，二个环的仅知道萘和联苯，三个环的有蒽、菲二个峰，这在 气相谱不易分开，而用液体色谱是可以分开的。四个环的芘和荧蒽基本能分 开， 和苯并 a蒽是难分离的异构体，此法虽能分开，但不理想。五个环的 有苯并 e芘、苯并 a芘和苝是能分开的。仪器型号用北京分析仪器厂生产的 SY01型高压液体色谱仪 UV254 检测器得到 多环芳烃标准曲线如图 6 15。二、纸层析荧光分光光度法 1( 一 原理 采集在玻璃纤维滤纸上颗粒物中的多环芳烃，经索氏提取或真空

18、升华后，用苯 洗脱浓缩，经乙酰化滤纸层析分离，分离出的苯并 a芘在紫外光照射下呈蓝 紫色荧光斑点，用苯洗脱或斑点直接扫描，用荧光分光光度法定量。( 二 仪器(1层析缸 5L 。(2紫外灯 附 365 或 254nm滤光片。(3具塞比色管 10ml ，刻度需校正。(4 荧光分光光度计 用 10mm石英比色皿，在激发波长 385nm和发射波长 400 410nm下测定荧光强度或附薄层扫描装置，用于荧光斑点直接扫描测定荧光强 度。其他仪器 同一法(415 页。( 三 试剂(1玻璃纤维滤纸 同一法(415 页。(2 苯 重蒸馏。(3 环己烷 重蒸馏。(4 二氯甲烷 重蒸馏。(5 无水乙醇 重蒸馏。(6

19、乙酰化溶液 按150ml苯、50ml乙酸酐和 0.1ml 硫酸的比例混合配制。(7 层析滤纸 新华牌中速层析滤纸。/ 13 (8展开剂 无水乙醇十二氯乙烷，按 (2 1比例(体积比配制。 (9乙酰化滤纸 将层析滤纸裁成长 27cm、宽 15cm。取 20 张卷成圆筒形，逐张 浸入到盛有 2000ml 乙酰化溶液的烧杯中，滤纸圆筒状中空部分放入一个高 10cm，内径 6cm玻璃管( 防止滤纸在搅拌时被搅破 。将电动搅拌棒置于玻璃柱 中心，在 (50 55下缓慢搅拌 6h，在搅拌浸泡过程中，溶液液面始终保持超 出滤纸 1cm，并在通风橱中进行。然后，静置浸泡过夜。取出滤纸在通风橱内 晾干，再将滤纸

20、逐张放入无水乙醇中浸泡 4h 以上，取出晾至微干，夹入粗滤纸 之间，用玻璃板压平至干备用。经乙酰化处理过的滤纸，对着光线观察，质地 应均匀，透明度一致。如质地不均匀，透明度明、暗不一，则不能用于分析。 乙酰化滤纸检验方法：在乙酰化滤纸上分别点 3， 4苯并芘、芘、 1， 2苯并 芘溶液和三种物质的混合液，用乙醇和二氯甲烷 (2 1为展开剂，展开上升 20cm后，在荧光灯下观察，三种物质均分开， 3，4苯并芘的斑点 Rf 值小于 0.10 ，此滤纸即可供分析使用。(10 标准溶液 贮备液的配制方法同一法，临用时，用苯稀释成 1.00ml 含 2g 苯并 芘的标准溶液，贮于棕色容量瓶中，并置冰箱中

21、保存。( 四 采样 采样方法同第十二章第一节中总悬浮颗粒物大流量采样重量法。( 五 分析步骤样品提取 同一法(415 页。纸层析分离 将空气总悬浮颗粒物样品的提取液定容后，作为纸层析点样待测液。 (1 点样 在乙酰化滤纸一端距底边 5cm处，用铅笔轻轻划一横线，在横线上点 6个样：二个点样品、二个点标准 (取 10l 标准溶液含 0.02 g 苯并 芘、二个点试剂空白 ( 均为平行双样 。各点间隔 2cm。用微量注射器吸量样品 提取液，根据苯并 芘浓度点样 1050l 。在点样过程中用吹风机缓缓 送风，促使溶剂挥发，点样斑点直径不应超过 5mm，点样速度应缓慢。如需将 全部样品点样时，可用玻璃

22、毛细管点样。溶液点完后，可用少量苯洗涤浓缩 瓶，并将洗涤液全部点在斑点上。按相同操作步骤点标准溶液和试剂空白溶 液。(2 层析 在层析缸中加入适量展开剂，将点完样的层析滤纸悬挂在层析缸中， 下端浸入展开剂约 5mm，将层析缸用透明胶纸密封并避光，待溶剂前沿上升至 离原点 20cm处，取出滤纸，在通风橱中使展开剂自然晾干。然后在暗室内，于 365nm紫外光下观察层析纸上苯并 芘的亮紫色荧光斑点，并用铅笔圈出 苯并 芘标准斑点及与其位置相对应的样品斑点和空白斑点。(3 洗脱 用光亮无锈的剪刀分别剪下层析滤纸上苯并 芘标准、样品和空 白斑点，各放入 5ml 比色管中，各管准确加入 5.00ml 苯，

23、加盖，于 6070 水浴中，不断振摇，浸泡 15min，使苯并 芘转移至苯液中。测定(1 洗脱液的荧光分光光度测定 将标准、样品和空白斑点的苯洗脱上清液分别 倒入 10mm石英比色皿中，在激发狭缝 10nm，激发波长 385nm和发射狭缝 5nm， 发射波长 400，405和 410nm的条件下，分别测定荧光强度 (mm。(2苯并 芘荧光斑点直接扫描定量用荧光分光光度计的薄层扫描仪时，将/ 13层析纸展开的一面朝下，用透明胶纸将其固定于玻璃板上，放入薄层层析扫描 板框座架上，设定激发波长为 385nm、入射狭缝 10nm、入射狭缝 5nm，发射波 长为 405nm，以标准斑点调节仪器的负高压和

24、记录器灵敏度，使记录笔的响应 值在 1/2 满量程处。然后在发射波长 400、405和 410nm处，对标准，空白和样 品斑点逐一进行直线或曲线移动扫描，测得每个斑点峰高或峰面积的积分值之 和，即为该斑点的荧光强度 (mm或 mm2。( 六 计算荧光光度法测定洗脱液或斑点直接扫描标准、空白和样品的相对荧光强度：式中 A相对荧光强度；A405于 405nm发射波长处测定的荧光强度；A400于 400nm发射波长处测定的荧光强度；A410于 410nm发射波长处测定的荧光强度。2. 空气中苯并芘浓度式中 c空气中苯并 芘浓度，A样品斑点相对荧光强度， mm2 或 mm；3 g/100m ；A0试剂

25、空白样品相对荧光强度， mm2或 mm；As标准样品相对荧光强度， mm2 或 mm；W标准斑点苯并 芘含量， g；B样品洗脱定容体积， l ； D点样时所取洗脱液体积， l ；S1样品滤纸的总面积， cm2； S2分析时所取样品滤纸的面积， cm2；Es由实验确定的苯并 芘的平均提取效率；V0换算成标准状况下的采样体积， m3。( 七 说明(1 纸层析法分离荧光光度法测定苯并 芘，具有灵敏度高，操作简便， 样品便于保存等优点，是目前测定苯并 芘普遍采用的方法之一，检出限 为 2ng/5ml 。(2精密度和准确度对 0.58 g 苯并 芘重复测定的相对标准差小于 6%； 对 5g 苯并 芘的加

26、标回收率为 95%108%。(3精确量取 10l 混合样品提取物各 5 份进行纸层析法和薄层层析法比较，测 定结果见表 613，从表中结果可以看出两种方法测定结果基本上是一致的。目视观测纸层分离荧光点分界不清晰，不如薄层法。但制备乙酰化滤纸比较容表 613 两种分离方法测定飘尘中 3， 4苯并芘的比较三、薄层层析荧光或紫外分光光度法( 一 原理/ 13 采集在玻璃纤维滤纸上颗粒物中的 3，4苯并芘 (Bap，用充氮升华法或连续 提取法提取，再经醋酸纤维素薄层层析法分离，分离出的 Bap 斑点，用苯洗 脱，以荧光分光光度法或紫外分光光度法定量。( 二 仪器(1薄层涂布器。 (2薄层层析仪。(3

27、离心机 4000rpm。(4 玻璃熔封铁芯转子 长 6mm。(5电热式磁力搅拌器。(6 其他仪器同二法 (425 页。( 三 试剂(1玻璃纤维滤纸预处理同一法 (415 页，Bap 的空白值不应大于 1ng。(2 无水乙醇 重蒸馏。(3 甲醇 重蒸馏。(4 乙醚 重蒸馏。(5 苯 使用前提纯，提纯方法：在分液漏斗中每次加少量浓硫酸，振摇，至浓 硫酸层无色为止，再加水振摇数次，洗去硫酸。然后加入无水硫酸钠脱水，再 蒸馏。(6展开剂 甲醇+乙醚+水 4+4+1(体积比 。(7薄层板 以每块板 (200200mm平 均需用 4g乙酸纤维素，和 15ml 无水乙醇 的比例调成糊状，在涂布器上制板。涂布

28、后，先在室温下风干，再于80干燥箱中活化 30min。然后，放在干燥器内，冷却备用。(8乙酸纤维素 160 250 目，结合酸的含量为 26%30%。乙酸纤维素制备方 法：量取 682.5ml 乙酸酐、 300ml 苯、7.5ml 水依次放入 2L 烧杯中，混匀。置 于冰水浴中，缓慢加入 10ml 高氯酸，搅匀 (注意防止反应剧烈溅出 。然后，在 不断搅拌下慢慢加入 100g微晶纤维素 (色层用，在通风橱内于 3035水浴 中放置 2h，并不断搅拌，以保证乙酰化反应充分，并注意观察温度，以防温度 骤增。然后，再倒入大型离心管中，以 4000rpm 速度，离心 35min，除去上 层乙酰化剂溶液

29、，沉淀物用无水乙醇洗涤三次，再离心，至 pH6 为止。最后 将乙酰化纤维素置于通风橱中吹风晾干。放置过夜，再放入干燥箱中，于80干燥 1h，取出冷却后，研磨，过 160 目筛，备用。(93 ，4苯并芘标准溶液同一法 (415 页，临用时配制成 1.00ml 含 10gBap 标准溶液。( 四 采样采样方法同一法 (415 页 。( 五 分析步骤1. 样品提取 同一法(415 页。薄层分离(1 点样取活化处理过的薄层板，将三边各刮去 5mm。在距离底边 2cm处，以 15cm间隔，用毛细管将样品液全部 ( 或一部分，视浓度而定 ，在薄层板上作 条状点样。斑点不大于 15mm 3mm。用 0.05

30、ml 苯洗管壁，洗液再点样。如此反 复，直至洗液无荧光为止。同时，以同样方法，用微量注射器取10l 苯并芘/ 13 标准溶液 (0.1 g点样，作为标准对照点。另外一个点不点样品，作为展开剂 空白点。如用紫外分光光度法测定时，标准对照应点 0.5g 苯并芘，并且不留 展开剂空白点。(2层析点样后薄层板放入薄层层析仪中，加入 15ml 展开剂。待展开剂前沿上 升至 15cm处，取出薄层板，放在通风橱中，让展开剂自然挥发，晾干。然后在 暗室内，于紫外线灯下观察薄层板上荧光斑点。用针划出苯并芘标准斑点和其 相对应位置的样品斑点和空白点。(3洗脱用光亮无锈的小刀仔细刮下标准斑点、样品斑点和空白点。通过漏斗分 别移入 10ml 比色管中，再加入 5ml 苯，并放入一个玻璃熔封铁芯转子。将比色 管放在盛水的烧杯中，于电热磁力搅拌器上加热 65， 10min，进行洗脱。然 后，在离心机上，以 4000rpm，离心 2min。上清液分别转移于 10ml 比色管中。 再向原比色管中加 5ml 苯，重复洗脱一次，合并洗脱液，混匀，作为被测样 品。测定将标准管及样品管和空白管中洗脱液均用苯定容至 10ml，分别进行荧光或紫外 分光光度法测定，测定步骤同二法 (425 页。( 六 计算同二法(425 页。(