免疫血液学系统和鉴定原理

1、免疫血液学系统和鉴定原理主要内容： 1、红细胞血型系统 2、HLA血型 3、血小板血型系统 4、血清型 5、输血前免疫血液检查 6、新生儿溶血病 免疫血液学ABO血型的问题问题的发现正反定型不符可能性有许多种ABO亚型，疾病因素，年龄体质和个体差异，冷抗体，自身抗体，输血，其它血型抗体的干扰，蛋白干扰，多凝集等。通常情况下O型红细胞加AB血浆可以解决问题，但不总是这样。孟买型和类孟买型常常不能输O型血?Rh血型问题Rh阴性的患者输什么样的血？输什么样的血成分？RhD亚型问题（弱D，不完全D，Del）Rh系统抗D、C、c、E、e抗体及其联合Rh血型错误输血的后果 同种抗体问题常见红细胞同种抗体有

2、那些？如何锁定目标？谱细胞，抗原/抗体测定，效价测定它们的临床意义是否为温抗体？是否致敏补体？红细胞上有多少抗原？以往表现如何？是否能提供配合型的血？是否有权宜方案？（亲属血）自身抗体问题自身抗体冷自身抗体和温自身抗体如何锁定目标？针对红细胞的直抗试验和放散试验，针对血清的间抗试验病史，输血史它们的临床意义是否为温抗体？药物抗体，类抗体，多凝集是否能提供配合型的血？是否有权宜方案？新生儿溶血病诊断及换血新生儿溶血病的实验室诊断 直抗试验、游离试验、释放试验 ABO溶血病 换血血液的选择Rh溶血病 换血血液的选择骨髓移植后输血红细胞血型的选择血小板血型的选择其它特定病患的输血前检查白血病消化道疾

3、病多发性骨髓瘤冷凝集素病大量输血输液患者已经发生溶血性输血反应的患者区分自身抗体和同种抗体分离自身和输入的红细胞正确鉴定血型正确鉴定抗体血浆置换交换输血 1818年英国妇产科医生布伦德尔成功地用输血救活了一名产后大出血的产妇，成为人类历史上成功输血的第一例。 1900年奥地利维也纳大学 LandsteinerLandsteiner（18681943）获得1930年诺贝尔奖金发现了ABO、MN、P、RH等许多血型ABO血型的发现ABO血型发现的意义打开了免疫血液学、免疫遗传学的大门为临床输血铺平了道路，使它成为一项有效的治疗手段。1900年 2009年1990年1985年 ABO血型系统从血清学

4、到分子生物学抗原决定簇 (表位)血型抗原是红细胞上的一种特异性的呈立体排列的化学基团。依生化性质人红细胞抗原决定簇可分为多肽和糖分子两类。人出生时，抗原决定簇是多肽的红细胞膜的血型抗原已发育成熟，而决定簇为糖分子的血型抗原则在出生后逐渐发育成熟。决定簇糖分子多肽ABH，LweisIi，TTn抗原MNSs，Rh，Kell，Kidd存在多种细胞表面体液和分泌液中只分布于红细胞膜其他血细胞膜上分布组织血型抗原可以表示细胞分化和成熟的标志，胎儿和新生儿红细胞表达强i抗原，弱I抗原，而成人则为强I抗原，弱i抗原。IgG相对分子量为15万，由2条重链及2条轻链构成，根据重链恒定区氨基酸序列的差异，分为Ig

5、G1、IgG2、IgG3、IgG4四种亚类。IgG是唯一能通过胎盘到达胎儿的免疫球蛋白(1gG2通过胎盘效率最低)，并有结合补体的能力，IgG3结合补体能力最强。其次是IgGl，所以IgG3和IgGl在溶血性输血反应和新生儿溶血病中有重要意义。 IgM相对分子量为90万，由5个免疫球蛋白单体通过J链连接而组成的五聚结构。IgM是胎儿免疫系统成熟时最早出现的免疫球蛋白，并具有高度的有效凝集素，使补体活化的效率高，1个IgM分子与红细胞表面的抗原结合，就能引发补体介导的细胞溶解现象。ABO血型系统抗体若按产生的原因又分为“天然抗体”和“免疫性抗体”。“天然抗体”主要由自然界中与A、B抗原类似的物质

6、(细菌)免疫刺激产生，以IgM为主。 “免疫性抗体”主要是由母婴血型不合的妊娠、血型不合及有输血史的输血产生，以IgG为主。 ABO抗体的特性“天然抗体”与“免疫性抗体”的特征及区别特性天然抗体（IgM）免疫性抗体（IgG）抗原刺激分子量与红细胞反应的最适温度被血型物质中和溶血素效价耐热性在盐水中与相应红细胞反应发生肉眼可见凝集对酶处理红细胞的反应通过胎盘无察觉100万4-25能较低不耐热（冷抗体）能变化不大不能有（妊娠、输血）15万37 不能较高耐热（温抗体）不能能反应能人在出生前尚未产生抗体.ABO抗体出生后3-6个月出现，5-6岁时达高峰; 成人随年龄增长而降低。新生儿血清中抗体常是来自

7、母体的IgG，偶尔也有胎儿自身产生的IgM。由于新生儿血型抗原位点少，抗体效价低，为此检测血型时应十分慎重，可因抗原少或抗体效价低而凝集不明显而误定血型。抗A、抗B、抗AB抗体存在于所有缺少相应抗原的人血清中，唾液、乳汁、泪液等各种体液及分泌物中也可发现ABO抗体.ABO抗体的产生及存在部位 2 9个血型系统， 2 0 0多个抗原第一节 红细胞血型系统 一、ABO血型系统ABH血型抗原不仅存在于红细胞表面，而且还广泛存在于消化道，皮肤上皮细胞，呼吸道及泌尿系统，包括唾液、眼泪、尿液、消化液、胆汁、乳液、羊水、体腔液及卵巢囊肿液中。ABO血型系统的独特特点A和B抗原的免疫原性强血清中规律性存在抗

8、A和/或抗B抗体分泌型个体的血浆、唾液、组织细胞等处存在A、B、H血型物质ABO血型系统是根据每个人红细胞上是否存在A和B抗原，可将人分成四种血型ABO血型的配合性是输血前试验的重要基础血型抗原能够激活免疫系统 ：母胎不相容输血不相容自身溶血性贫血ABO血型的主要抗原和抗体已知血清+受检者红细胞 受检者血清+已知红细胞 （正定型） （反定型） 抗A 抗B 受检者血型 A细胞 B细胞 O细胞 A B O AB (一) ABO血型的遗传基础 我们从双亲的染色体各获得一半的遗传基因。我们遗传的是二个血型基因，一个是从母亲那儿来的A、B或O基因。另一个基因来自父亲的A、B或O基因。基因型，从双亲染色体

9、上所遗传下来的基因。表型，所观察到的遗传基因即血型本身。A和B基因对于O基因是显性基因，O基因是隐性基因。 不同婚配类型子女可能的血型A*OA OB*OB OA*BA B AB OAB*OA BA*ABA B ABB*ABB A ABA*AA O (二) ABO血型表型的频率中国：从北向西南的方向，B基因频率逐渐下降，而O基因频率升高；云贵川和长江中下游地区A基因频率升高，两广、福建、台湾O基因频率较其它地区高。欧洲：A基因频率最高B基因在亚洲频率最高。(三) (三) ABO血型抗原的生化合成ABO系统抗原概述A和B抗原是红细胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖类决定簇。二者之间的区别在于免疫结构域末

10、端单糖性质不同。A抗原末端糖基是N-乙酰氨基半乳糖B抗原末端糖基是D-半乳糖。Type1 Gal13GlcNAc 1R （主要存在于血浆）Type2 Gal14GlcNAc 1R （存在于红细胞、血浆）ABO生化合成的概述-血型前体物质在H基因编码产生的岩藻糖基转移酶(H转移酶)的作用下，把一个岩藻糖接在其前身物质即红细胞膜上寡糖链的半乳糖上形成H物质(H抗原)，它是A、B抗原的前身物质。ABO生化合成的概述-H物质ABO生化合成的概述-A酶和B酶A基因A酶编码(N-乙酰-D-半乳糖胺基转移酶)A抗原B基因B酶编码(D-半乳糖转移酶)D-半乳糖(H物质) + N-乙酰半乳糖胺D-半乳糖(H物质

11、) +D-半乳糖B抗原A和B抗原是红细胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖类决定簇。A抗原 N-乙酰半乳糖胺(GaLNAc)B抗原 D-半乳糖(GaL)。ABO生化合成的概述-A抗原和B抗原H抗原是形成A、B抗原的结构基础，但是H物质抗原性很弱，血清中一般没有抗H抗体。O型就只有H抗原，O基因为无效基因，不会产生转移酶，糖不会连接到H物质上。如果缺失H基因，即缺乏H转移酶，则无H物质，这时即使体内存在A或B转移酶也不能形成A或B抗原，如hh型(孟买型)就是缺乏H基因。ABO生化合成的概述-0型和孟买型ABO系统概述O基因的产物是一种无活性的转移酶，不能转移任何糖基到H抗原上，因此O型个体的抗原就是H抗

12、原。 ABO抗原不是ABO基因的直接产物，A和B基 因编码不同的糖基转移酶，催化不同的糖基转移到H抗原末端半乳糖基上，形成相应的A或B抗原。ABO基因糖基转移酶结构模式图（1）ABO基因糖基转移酶结构模式图（2）ABO物质的生物合成A、B、H血型物质1930年Lehrs发现唾液中有A和B物质1943年Wiener发现分泌型占80AB物质的量具有较显著的个体差异血清中的血型物质较弱唾液中的血型物质较容易测到-常见ABO亚型A抗原中主要为A1和A2 其它A亚型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、 Amos 、Aint、 Aw和AelB亚型一般比A亚型更少：B3、Bx、Bm、 Bmos和Bel等其他

13、亚型：嵌合体(Chimera) 、 CisAB型、孟买型、类孟买型 (四)ABO血型系统的抗原，亚型及变异型ABO亚型的判断1. 红细胞与抗A、抗A1、抗B及抗AB的凝集程度2. 红细胞上H物质活性的强弱3. 血清中是否存在抗A14.分泌型人的唾液中A、B和H物质A1和A2决定簇的区别是仅存在量的差异还是抗原决定簇结构不同？A1型和A1B型红细胞上的A1抗原数远远多于A2型和A2B型红细胞，A1型个体血清中A酶的活力也远强于A2型。表明二者之间有量的差别。A2和A2B个体常常产生抗A1，说明A2细胞上缺乏A1细胞上的一种决定簇。 H抗原强弱趋势：OA2 B A2B A1 A1BA1和A2同样存

14、在质的区别 两种A型抗原:A、A1。 A1细胞具有A、A1抗原。 A2细胞只有A抗原。 B型人血清中有抗A和抗A1。 A1细胞与抗A、抗A1反应 A2细胞只与抗A反应血型抗原抗体A1A2OBA1、AAHB抗B抗B、抗A1抗A、抗B、抗A1抗A、抗A1A1基因与A2基因共同遗传A1A2基因被存在的A1基因所隐蔽A2基因与B或O基因配对时A2B、A2此时的A2基因为显性遗传A1和A2的遗传及表型 根据ABO血型的血清学特点，A型和AB型可分为Al、A2和AlB、A2B四种亚型。抗A血清中含有抗A和抗A1两种抗体，抗A可以凝集所有A型和AB型红细胞，而抗A1只能与一部分A型和AB型红细胞反应. 据此

15、凡与抗A1反应者被定为A1或A1B型，不与抗A1反应，而与抗A反应者被定为A2或A2B型。A1和A2亚型鉴定原理A1和A2表型鉴别血型 抗原 抗-A 抗-A1A1 A、A1 + +A2 A + -A1、A2的血清学区别是以抗Al试剂作试验获得的。抗A1试剂：B型人的血清制成或为双花 扁豆提取并稀释的植物凝集素。凡与抗A1试剂发生凝集反应者为A1，如果同时还与抗B凝集，则为A1B型。不与抗A1试剂凝集者为A2或A2B型。A1、A2亚型的鉴定方法 防止误定血型。在常规输血试验中，A2或A2B型人的血清含有抗A1抗体，患者与供血者间的A1或A2需加以区别。 较A2更弱的亚血型不常发现， 一位弱亚型患

16、者错误地定型为O型而输予0型血液时，预期应无严重的后果。 若一位具有弱A抗原的供血者血液，被定型错误而输给一位0型的患者时，则能引发严重的输血反应问题。A1、A2亚型的临床意义用A2细胞重复吸收来源于B型血清，可以移去所有抗A血清，血清中余下的抗体只能与A1型红细胞反应，表明B型个体的血清中含有抗A和抗A1两种抗体。抗A1不仅存在于A2亚型，在B型和O型人的血清中除含抗A外还有抗A1 ，所以抗A1试剂可以从B型人血清中获取。A1 4+ 0 4+ 0 4+ 0 0 4+ 0 A HA2 4+ 0 4+ 3+ 0 2+ 0 4+ 0 A HA3 2+mf 0 2+mf 3+ 0 + 0 4+ 0

17、A HAm 0/ 0 +/ 4+ 0 0 0 4+ 0 A HAx 0/ 0 +/2+ 4+ 0 2+ 0/2+ 4+ 0 HB 0 4+ 4+ 0 3+ 4+ 0 0 B HB3 0 +mf 2+mf 4+ 4+ 4+ 0 0 B HBm 0 0 0/ 4+ 4+ 4+ 0 0 B HBx 0 0/ 0/2+ 4+ 4+ 4+ 0 0 HA亚型及B亚型的鉴定表红细胞表现型 红细胞与已知抗血清反应 血清与试剂红细胞反应分泌者唾液 含型物质抗A 抗B 抗AB 抗H 抗A1 A1 A2 B O注：mf为混合外观凝集；0为无凝聚A3最早由Friedenreich在1936年描述与抗A和抗AB共同孵育

18、时：“混合视野外观” 。即：小的凝集块周围是大量未凝集的细胞。与抗A反应强度低于A2。与抗AB反应呈混合视野,但并不增强.偶有抗A1 (occasionally) 血型物质 A、 HA3不像是A2和O细胞的嵌合体 Aend（Afinn，Abantu）Aend最早由Weiner等于1959年描述类似于A3细胞：它们与一些抗A和抗AB表现很弱的混合视野外观Aend分泌型的唾液中只有H物质，但是无A物质抗A1出现在部分Aend个体的血清中10细胞凝集（Mf）AmAm细胞不能被抗A和抗AB凝集，或者仅能发生很弱的凝集。血型物质: A、 HAm细胞可以吸附放散抗A。Am分泌型的唾液中包含正常含量的A和H

19、物质，Am血清中通常无抗A1。Am作为ABO位点上一个稀有等位基因遗传。AxAx表现型最初于1935年报道，它的主要血清学特点是：红细胞与多数来源于B型血清的抗A不发生反应，但是可以被大多数来源于O型个体的抗AB凝集。血清中含有抗A1，有时可凝集A1和A2细胞除了H物质，Ax分泌型个体唾液中可以捡出痕量的A物质。Ael在通常的条件下，Ael细胞与抗A和抗AB不发生凝集，虽然它们可以结合这些抗体，结合的抗体通过吸收放散技术可以检测到。Ael分泌型唾液中无A物质，仅有H物质，血清中常含有抗A1，也可以含有能够凝集A2细胞的抗体。Ael以ABO位点上的一种稀有的等位基因遗传的。各种弱A亚型的鉴别程序

20、红细胞与抗A及/或抗A1B反应弱凝集混合外观(mf）A60A3A3 Ax10 红细胞呈十分弱的mf凝集AendAend只与抗AB呈弱凝集Ax不凝集容易吸附放散抗AAm能吸附分泌型唾液中有一定量的A物质及放散不容易吸附放散抗AAy抗A分泌型唾液含少量的A物质Am Ay 吸附放散抗AAelAel分泌型唾液只含H物质无A物质B亚型弱的B变异型是很少的。可能是由于在许多群体中B基因的频率要相对低得多。弱B亚型较难以分类。Salmon做出结论：B亚型最好的分类应参照A变异型：B3、Bx、Bm和Bel，另外加上那些不符合其它4种类型的Bw。 成人与新生儿抗原数量比较细胞 成人新生儿A1810 0001170 000250 000 370 000A2240 000 290 000140 000B610 000 83