脱落细胞实验课程

1、脱落细胞实验课程一、常用细胞学染色结果1、巴氏染色结果：完全角化的鳞状上皮细胞胞浆呈橘黄色；不完全角化的鳞状上皮细胞胞浆呈粉红色；角化前的鳞状上皮细胞胞浆呈蓝色；上皮细胞核呈紫蓝色，核仁呈红，红细胞染成粉红色。2、HE染色结果：上皮细胞核呈紫蓝色，核仁呈红色，胞浆染成淡红色，红细胞染成淡红色。二、阅片方法和步骤（1）方法：从左至右、自上而下移动推进器（2）观察各种细胞成分先用低倍镜观察细胞形态再转到高倍镜观察细胞的形态结构判断细胞的类型。正常脱落细胞形态特征（一）正常复层鳞状上皮细胞1、底层鳞状上皮细胞：内、外底层鳞状上皮细胞。2、中层鳞状上皮细胞3、表层鳞状上皮细胞：角化前鳞状上皮细胞、不完

2、全角化鳞状上皮细胞、完全角鳞状上皮细胞。内底层鳞状上皮细胞:呈圆形,直径1215 um,核圆形或椭圆形,直径810 um,居中或偏位,核质比为1:0.51,核染色质呈细颗粒状,素木素染色呈紫蓝色,巴氏染色胞质成深蓝色或灰蓝色.伊红染色为暗红色.外底层鳞状上皮细胞:呈圆形,直径1530 um,细胞核与内底层细胞相似, 核质比为1:12,核染色质呈细颗粒状,略疏松,素木素染色呈紫蓝色,巴氏染色胞质成淡蓝色或灰色.伊红染色为暗红色.中层鳞状上皮细胞:细胞呈多边形、菱形、圆形，直径3040 um,细胞核相对较小, 核质比为1:23,核染色质呈细颗粒状,素木素染色呈紫蓝色,巴氏染色胞质成淡蓝色或灰色.伊

3、红染色为淡红色.表层角化前鳞状上皮细胞:细胞呈多角形、直径40406um,细胞核直径为68um, 核质比为1:35,核染色质呈细颗粒状,深染，素木素染色呈紫蓝色,巴氏染色胞质成淡蓝色或灰色.伊红染色为淡红色表层不完全角化前鳞状上皮细胞:细胞呈多角形、直径40406um,细胞核直径约4um, 核质比为1:5,核染色质呈细颗粒状,深染，素木素染色呈紫蓝色,巴氏染色胞质呈淡红色.伊红染色为淡红色表层完全角化前鳞状上皮细胞:细胞呈多角形、直径40406um,细胞核消失，巴氏染色胞质呈橘黄色.伊红染色为淡红色各层细胞伊红染色胞质为红色.纤毛柱状上皮细胞：细胞呈圆锥形，顶端宽平，表面有密集的纤毛，染淡红色

4、，细胞底不尖细，细胞核居细胞中底部，直径812um，呈卵圆形顺细胞长轴排列，核染色1质细颗粒分布均匀。正常脱落细胞形态特征（二）柱状上皮细胞形态特征（1）纤毛柱状上皮细胞（2）粘液柱状上皮细胞（3）储备细胞粘液柱状上皮细胞：细胞肥大，呈卵圆、或圆柱圆锥形，细胞核居细胞底部，细胞质丰富，含大量粘液着色透明，核染色质细颗粒分布均匀。正常脱落的非上皮细胞储备细胞：细胞体积小，呈圆形、卵圆形或多角形，染色质呈细颗粒状分布均匀，核边清楚，常见核仁。胞质量少，略嗜碱性。脱落细胞标本制备技术目的:掌握脱落细胞标本采集和涂片制作、伊红染液染色方法. 脱落细胞标本采集和涂片制作苏木素-伊红（H-E）染色1、染色

5、原理:细胞核的核酸带有磷酸根，当染液PH大于2时，核酸带负电荷，能结合染液中带正电荷的碱性染料氧化苏木素矾，而呈紫蓝色。由于天然苏木素的着色力弱，需经碘化钾氧化成氧化苏木素，才具有染色，氧化的苏木素红呈弱酸性，所带的阳离子电荷不强，与含铝金属的媒染剂结合后，可成为带强正电荷的氧化苏木素矾，能与DNA磷酸复合物牢固地结合。染液中的伊红能与细胞质的蛋白质结合，而呈红色。2、实验标本采集：胸、腹水。3、器材：玻片、离心机、吸管、染色缸、盖玻片（24x50mm）4、试剂：伊红染液、苏木素染液、乙醇、稀碱、中性树胶、二甲苯。（1）苏木素染液：苏木素染料1.18g+碘酸钠0.1g+硫酸铝8.8g+乙二醇1

6、25ml+蒸馏水365ml放入1000ml烧杯混匀后，恒们温30度搅拌约2小时，停止后再加10 ml冰醋酸混匀，放入棕色瓶，存放半个月后才使用效果更佳。（2）稀碱：于100ml蒸馏水中加入12饱和碳酸锂（3）乙醇：95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇、50%乙醇（4）伊红染液：0.5g伊红+100ml蒸馏水5、涂片制备步骤：1）将胸或腹水混匀后，取10ml放入离心管离心5分钟.2)吸去上清液，然后用吸管吸取沉淀物的灰白色细胞层12滴（如沉淀物少可将其混匀后再取沉淀物涂片）滴在玻片一端，用滴管前端部分平放于标本后向玻片另一端推移或用玻片推片，使沉淀物分布均匀，厚薄适宜，一般涂片34张。3）涂片固定

7、：涂片干燥时放入95%乙醇固定液固定。4）固定时间：1530分钟。4、涂片的染色操作步骤：（1）核染色：将涂片从固定液中取出，用自来水洗净固定液后，再放入苏木素染液中23分钟，取出用自来水洗净。（2）核蓝化：将涂片放入稀碱约30秒，取出用自来水洗净。（3）胞质染色：将涂片放入伊红染液中12分钟，取出放入70%乙醇洗去多余的染料。（5）脱水：将涂片依次放入80%、95%乙醇脱水30秒，再放如无水乙醇1分钟。（6）树胶封片后镜检。6、染色结果:细胞核呈紫蓝色,细胞质呈淡玫瑰红色,红细胞呈淡红或朱红色.涂片制备步骤:取标本10ml 离心5min 吸去上清液,取沉淀物涂片干燥95%乙醇固定1530ni

8、m染色步骤:（1）核染色：将涂片从固定液中取出，用自来水洗 净固定液后，再放入苏木素染液中23分钟，取出用自来水洗净。（2）核蓝化：将涂片放入稀碱约30秒，取出用自来水洗净。（3）胞质染色：将涂片放入伊红染液中12分钟，取出放入70%乙醇洗去多余的染料。（4）脱水：将涂片依次放入80%、95%乙醇脱水30秒，再放如无水乙醇1分钟。（5）树胶封片后镜检。损伤细胞形态要求目的:掌握损伤细胞形态特征增生、化生细胞、修复细胞形态特征增生的上皮细胞上皮细胞的炎症性改变增生的上皮细胞修复细胞鳞状化生细胞学形态特征1）轻度核异质：慢性炎症等刺激所致，上皮细胞核轻度增大，核比正常大半倍左右，核染色质加深，核形

9、有轻度到中度畸形，胞质正常。又称炎症核异质（2）重度核异质：上皮细胞核增大比正常大12倍，核染色质深染，呈粗网或粗颗粒状，分布不均匀，核膜增厚，核形有中度以上畸形，核质比例增大。恶性肿瘤细胞形态特征目的要求:掌握恶性脱落细胞形态学特征1、鳞癌2、腺癌3、未分化癌1、细胞核的改变（1）核增大（2）核畸形（3）核深染、染色质分布不均匀（4）核质比例失调（5）核仁增大、增多（6）核分裂异常（7）多核、裸核恶性肿瘤细胞的形态学特征细胞核的改变细胞核的改变2、细胞质的改变1、胞质量的异常2、染色加深3、细胞形态畸形4、空泡变异5、吞噬异物鳞癌高分化的鳞癌：以表层细胞为主，形态多形性，如蝌蚪状、纤维状等，

10、多数胞质有角化，红染，核畸形深染，核染色质增粗，有时可见癌珠鳞癌低分化鳞癌：以中、底层细胞为主，胞体小多为园型，胞质少、无角化，细胞大小不，常成团脱落成堆叠状，核增大畸形，可见核仁。腺癌1、高分化腺癌：细胞体积较大，呈圆形或卵圆形，形态异形不明显，细胞核大、畸形深染，核仁增大、增多，细胞大小悬殊，胞质丰富，含有空泡等。腺癌低分化腺癌：细胞较小，多成团互相重叠，极性混乱，易融合成团呈花边样或桑椹样。胞质少，嗜碱性，细胞核畸形和深染明显。未分化癌1、大细胞未分化癌：细胞体约为外底层细胞大小，呈不规则圆形、卵圆形，胞质中等，嗜碱性，细胞核大小不一，畸形明显、染色质深染。未分化癌小细胞未分化癌：细胞体小，胞质很少，核质比例增大显著，似裸核样，常成束出现，排列紧密，核呈不规则圆形、梭形、瓜子形或燕麦形，染色质增粗，分布不均匀。痰液脱落细胞学检查目的要求掌握痰液正常脱落细胞形态特征及鳞癌、腺癌、小细胞未分化癌细胞形态特征浆膜腔积液细胞学检查掌握浆膜腔积液正常脱落细胞及恶性肿瘤细胞形态特征浆膜腔积液脱落细胞学检查一、标本采集与制片1、标本量：100200ml2、送检时间：0.51h内。3、制片4、染色正常间皮细胞形态：细胞呈圆形或卵圆形，直径约1