第章黄酮类化合物

1、第五章 黄酮类化合物主讲(zhjing)：陈欲云 共一百一十五页*2第一节 概述(i sh)第二节 黄酮类化合物的理化性质及显色反应第三节 黄酮类化合物的提取和分离第四节 黄酮类化合物的检识与结构鉴定共一百一十五页*3（一）基本(jbn)结构 1952年以前，黄酮类化合物主要是指基本母核为2-苯基色原酮的一系列化合物。 色原酮 2-苯基色原酮（黄酮） 一、基本结构(jigu)和分类第一节 概 述共一百一十五页*4现在的黄酮类化合物则泛指(fn zh)两个苯环（A与B环）通过中央三碳链相互连接而成的一类化合物。 C6-C3-C6第一节 概 述BA共一百一十五页*5 黄酮类化合物的苷元的结构类型根

2、据三碳链氧化程度、B环（苯基）连接位置（2-位或3-位）以及三碳链是否(sh fu)构成环状分为下列类型：第一节 概 述共一百一十五页*6黄酮类（flavones）木犀草素（luteolin），存在于忍冬藤、菊花(jhu)、浮萍中，具有抗菌作用。 luteolin第一节 概 述共一百一十五页*7luteolin第一节 概 述共一百一十五页*8 黄芩为清热解毒类中药(zhngyo)，抗菌成分主要有黄芩苷(baicalin)、次黄芩素(wogonin)等。第一节 概 述共一百一十五页*9第一节 概 述共一百一十五页*10黄酮醇类（flavonols） 槲皮素(quercetin)具有抗炎、止咳祛痰

3、等作用。槲皮素片用于治疗支气管炎。此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量等作用。 芦丁(rutin)是槲皮素的O芸香糖苷。用于治疗毛细管脆弱引起(ynq)的出血病，并用作高血压的辅助治疗剂。quercetinrutin第一节 概 述共一百一十五页*11 豆科植物槐米中含有(hn yu)芦丁和槲皮素。第一节 概 述共一百一十五页*12二氢黄酮类(flavanones) 橙皮(chn p)苷（hesperidin），具有Vp样作用第一节 概 述共一百一十五页*13甘草(gnco)苷（liquiritin）具有溃疡抑制作用第一节 概 述共一百一十

4、五页*14 柚皮素（Naringenin）：来源于芸香科植物(zhw)柚(Citrus paradisi Macfadyen)的果实；分子式C15H12O；分子量 272.25结构式： 第一节 概 述共一百一十五页*154二氢黄酮醇类(flavanonols) 水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的黄酮木脂素类成分。具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝炎(n yn)及肝硬化，代谢中毒性肝损伤。 水飞蓟素（silybin）第一节 概 述共一百一十五页*165查尔酮类（chalcones） 查尔酮为苯甲醛(ji qun)缩苯乙酮类化合物，其邻羟基衍生物可视为二氢黄酮的异构体，二者可相互转化。查耳酮

5、第一节 概 述共一百一十五页*17 二氢黄酮的吡酮环芳香性低，在碱的作用下易开环生成6-羟基(qingj)查耳酮，由无色转为深黄色，后者经酸化又能转化为原来的二氢黄酮。邻羟基(qingj)查耳酮二氢黄酮第一节 概 述共一百一十五页*18 红花所含的色素红花苷是第一个发现(fxin)的查耳酮类植物成分。 红花在开花初期，花冠呈淡黄色；开花中期，花冠呈深黄色；开花后期或采收干燥过程中由于酶的作用，氧化成红色。第一节 概 述共一百一十五页*19菊科植物(zhw)红花。第一节 概 述共一百一十五页*206异黄酮类 (isoflavones) 主要存在(cnzi)于豆科、鸢尾科等植物中。如葛根主要含有下

6、列几种异黄酮类成分。葛根总黄酮具有扩冠、增加冠脉流量及降低心肌耗氧量等作用。大豆素具有类似罂粟碱的解痉作用。大豆苷、葛根素及大豆素均能缓解高血压患者的头痛(tutng)等症状第一节 概 述共一百一十五页*21豆科植物葛。第一节 概 述共一百一十五页*227二氢异黄酮类第一节 概 述共一百一十五页*238双黄酮类 由二分子(fnz)黄酮衍生物聚合生成的二聚物，多分布于裸子植物中。银杏中含有多种双黄酮，如银杏素。银杏(ynxng)黄酮（ginkgetin）第一节 概 述共一百一十五页*24银杏(ynxng)科植物银杏(ynxng)共一百一十五页*259花色(hus)苷类(anthocyanidin

7、s) 是使花、叶、果、茎等呈现蓝、紫、红等颜色的色素(s s)。以苷的形式存在于细胞液中，经水解可生成苷元花色素及糖。第一节 概 述共一百一十五页*2610黄烷-3-醇(flavan-3-ols)及黄烷-3，4-二醇(flavan-3,4-diols)类第一节 概 述共一百一十五页*2711苯骈色酮 (xanthanes) 石韦中的异芒果素具有(jyu)止咳祛痰的功效。 第一节 概 述共一百一十五页*28 水龙骨科植物(zhw)石韦第一节 概 述共一百一十五页*2912橙酮类化合物硫磺(lihung)菊素(sulphuretin)第一节 概 述共一百一十五页*30二、黄酮类化合物的生物合成(h

8、chng)途径第一节 概 述共一百一十五页*31三、黄酮类化合物的生物(shngw)活性 1. 对心血管系统的作用 Vp样作用：芦丁、橙皮苷等有Vp样作用，能降低血管脆性(cuxng)及异常通透性，可用作防治高血压及动脉硬化的辅助治疗剂。 扩冠作用：芦丁、槲皮素、葛根素、人工合成的力可定。 降血脂及胆固醇：木樨草素 第一节 概 述共一百一十五页*32芦丁片 芦丁是从中国所独有的国槐的花蕾中提取的植物药，也称维生素P，具有降低毛细血管的异常通透性和脆性的作用，是心脑血管保护药，国内用于心脑血管药品制剂的主要成分，国外还大量(dling)用于食品添加剂和化妆品。 鉴别： (1)取本品的细粉少许，加

9、氢氧化钠试液5mL，溶液显橘黄色。(2)取本品的细粉少许，加乙醇15mL，微热使芦丁溶解，溶 液分成二份：一份中加盐酸1mL与金属镁或金属锌数小粒，渐显红色；另一份中加三氯化铁试液1滴，显棕绿色。 第一节 概 述共一百一十五页*33 2. 抗肝脏毒作用 从水飞蓟种子中得到的水飞蓟素具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝炎、肝硬化及多种中毒性(d xn)肝损伤。（+）-儿茶素(catergen)也可抗肝脏毒作用，治疗脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引起的中毒性肝损伤。第一节 概 述共一百一十五页*34水飞蓟第一节 概 述共一百一十五页*35水飞蓟片 本品为菊科植物水飞蓟（紫花）Silybum maria

10、num (L) Gacntm的果实，经提取精制所得的淡黄色粉末，或结晶性粉末。无味、无臭、易溶于丙酮(bn tn)、模酸乙酯、乙醇及由醇、难溶于氯仿，不溶于水，主要化学成份为水飞蓟宾（Silybin) C25H22O10及其异物等黄酮类物质。功能与主治：本品具有保肝及降血脂作用，用于治疗慢性肝炎，早期肝硬变、代谢中毒性肝损伤及高血脂症。第一节 概 述共一百一十五页*36 3. 抗炎 芦丁及其衍生物羟乙基芦丁、二氢槲皮素等具 抗炎作用。 4. 抗菌及抗病毒作用 如木樨草素、黄芩苷、黄芩素 5. 解痉作用 异甘草素、大豆素：解除平滑肌痉挛； 大豆苷、葛根素及葛根总黄酮可缓解高血压患者(hunzh)

11、的头痛等症状； 杜鹃素、川陈皮素、槲皮素、山奈酚、芫花素、羟基芫花素：止 咳祛痰。第一节 概 述共一百一十五页*376. 雌性激素样作用(zuyng) 大豆素(daidzein)等异黄酮具有雌性激素样作用，可能与它们与己烯雌酚结构类似。第一节 概 述共一百一十五页*387. 清除人体(rnt)自由基作用 黄酮类化合物多具有酚羟基，易氧化成醌类而提供氢离子，故有显著的抗氧特点。 另外还有降血脂、血糖，抗动脉粥样硬化及抗癌抗突变(tbin)等作用。第一节 概 述共一百一十五页*398.抗肿瘤作用(zuyng) 抗癌新药Flavopiridol的发现(fxin)与研 Flavopiridol是一种源

12、于植物（CDYSOXYLUMBINECTARIFERUM）的黄酮类化合物。目前正被用于十几项一期和二期的癌症临床试验。最近，不同的研究者证实其对艾滋病也有异于其他药物的疗效。它的早期发现得益于工业界对自然产物的研究兴趣。在从树皮中提取出纯化合物后，前HOECHST公司又进行了结构与人工合成的研究。由此建立了一系列同型物，包括Flavopiridol的专利。 第一节 概 述共一百一十五页*40 在NIH大规模抗癌物筛选中，Flavopiridol脱颖而出，成为一种新的低毒性的研究药物。它的治癌机理被认为是作用于激酶，从而阻断细胞循环。这一解释间接地为CDK2-Flavopiridol的复合晶体结

13、构所证实。跨学科外向的合作以及现代技术的应用是加速(ji s)Flavopiridol和其他后续药物的研究与开发所不可缺少的。第一节 概 述共一百一十五页*41第二节 黄酮类化合物的理化性质(xngzh)及颜色反应 一、性状 1. 多为结晶性固体，少为（如黄酮苷类）无定形粉末。 2. 旋光性：游离苷元中，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷、黄烷醇及双黄酮有旋光外，其余无旋光性。 苷类由于结构(jigu)中引入糖的分子，均有旋光性，且多为左旋。共一百一十五页*42 3. 颜色(yns)：分子中是否存在交叉共轭体系助色团的数目取代基的位置有关。 色原酮部分原本无色，但在2位引入苯环后，即形成交叉共轭体系

14、，且通过电子的转移，重排，使共轭链延长，而表现出颜色。第二节 黄酮类化合物的理化性质(xngzh)及颜色反应共一百一十五页*43 黄酮、黄酮醇及苷类 灰黄-黄色 查耳酮 黄-橙黄色 二氢黄酮、二氢黄酮醇 无色 异黄酮 微黄色 其中，黄酮、黄酮醇及苷类、查耳酮等因分子中存在交叉共轭体系，在7,4位引入-OH, OCH3等供电子基团则促进(cjn)电子移位、重排，使化合物颜色加深。 花色苷及其苷元的颜色随pH的不同而改变：呈现红（pH8.5） 第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色(yns)反应共一百一十五页*44二、溶解度 1. 游离苷元难溶或不溶于水，易溶于MeOH, EtOH, EtOAc,

15、Et2O 黄酮、黄酮醇及查耳酮是平面型分子，分子堆砌紧密，分子间引力较大，更难溶于水。 二氢黄酮、二氢黄酮醇是非平面型分子，分子排列(pili)不紧密，分子间引力降低，对水的溶解度较大。第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色(yns)反应共一百一十五页*45 花色苷元（花青素）类虽系平面(pngmin)型分子，但因以离子形式存在，具有盐的通性，故亲水性较强，水溶度较大。第二节 黄酮类化合物的理化(lhu)性质及颜色反应共一百一十五页*46 黄酮苷元引入羟基(qingj)越多，水溶性越强，羟基(qingj)甲基化后，则增加在有机溶剂中的溶解度。 如一般黄酮类化合物不溶于石油醚中，可与脂溶性杂质分开

16、，但川陈皮素（5,6,7,8,3,4-六甲氧基黄酮）却可溶于石油醚。 第二节 黄酮类化合物的理化(lhu)性质及颜色反应共一百一十五页*472. 黄酮类化合物的羟基苷化后，水溶性相应增大，而在有机溶剂中的溶解度相应减小。 黄酮苷一般(ybn)易溶于H2O, MeOH, EtOH等，难溶或不溶于苯，氯仿等。第二节 黄酮类化合物的理化(lhu)性质及颜色反应共一百一十五页*48三、酸碱性 1. 酸性 黄酮类化合物多具有酚羟基而呈酸性，可 溶于碱性水液，吡啶，甲酰胺及二甲基甲酰胺。 酸性强弱顺序(shnx)：7, 4-二羟基 7, 或4羟基 一般酚羟基5-羟基3-羟基 此性质可用于提取、分离及鉴定工

17、作。第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色(yns)反应共一百一十五页*49 2. 碱性 -吡喃酮上的1-位氧原子上有未共用电子对，表性微弱的碱性，可与强无机酸如浓硫酸，盐酸生成yang盐，但极不稳定(wndng)，加水即可分解。 黄酮类化合物溶于浓硫酸中生成的yang盐常表性特殊的颜色，可用于鉴别。第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色(yns)反应共一百一十五页*50四、显色(xin s)反应 (一)还原反应 1. 盐酸-镁粉（盐酸-锌粉）反应 黄酮、黄酮醇及二氢黄酮、二氢黄酮醇类在盐酸-镁粉作用下，易被氢化还原，迅速生成红-紫红（个别有绿-兰色）。 将样品溶于甲醇或乙醇，加少量镁粉振摇，滴加

18、几滴浓盐酸，1-2分钟内（必要时微热）即可出现颜色。多显橙红(chn hn)-紫红色，少数兰-紫色，B环有-OH或OCH3取代时，颜色随之加深，查耳酮、橙酮、儿茶素类则不反应。 花色素及部分查耳酮、橙酮等在浓盐酸酸性条件下也会发生色变，故须先做一对照。 第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色反应共一百一十五页*51 2. 四氢硼钠反应 与二氢黄酮类化合物产生红-紫色。 取样品10mg溶于甲醇(ji chn)，加NaBH4 10mg，再滴加1%浓盐酸或浓硫酸，呈红-紫色。第二节 黄酮类化合物的理化性质(xngzh)及颜色反应共一百一十五页*52（二）金属(jnsh)盐类试剂的络合反应 黄酮类化合物

19、分子结构中多有3-OH, 4=O; 5-OH, 4=O; 邻二酚羟基，常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐等试剂生成有色络合物。 1. 铝盐 1%AlCl3或Al(NO3)3：生成络合物为黄色(hungs)(max=415nm)，并有荧光。第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色反应共一百一十五页*532. 铅盐 1%PbAc2或碱式醋酸铅水液。生成黄-红色沉淀。 醋酸铅可沉淀具有邻二酚羟基(qingj)或兼有3-OH, 4=O或5-OH, 4=O者。 碱式醋酸铅可沉淀具有一般酚类化合物。第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色(yns)反应共一百一十五页*54 3. 锆盐: 2%氯氧化锆甲醇(ji chn)

20、液第二节 黄酮类化合物的理化性质(xngzh)及颜色反应共一百一十五页*55 4. 镁盐 醋酸镁甲醇液作显色剂，可在纸上进行。二氢黄酮（醇）类显天蓝色荧光，若具有(jyu)C5-OH，色泽更明显。而黄酮、黄酮醇及异黄酮类则显黄-橙黄-褐色。 5. 氯化锶(SrCl2) 使具有邻二酚羟基的黄酮显绿-棕色-黑色沉淀。第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色(yns)反应共一百一十五页*56 6. 氯化铁(FeCl3) 检查酚羟基(qingj)。 多数黄酮类化合物具有酚羟基，可产生正反应，生成绿、蓝、黑、紫等颜色。第二节 黄酮类化合物的理化性质(xngzh)及颜色反应共一百一十五页*57（三）硼酸(pn

21、 sun)显色反应 条件(tiojin)：1 具有下列结构（5-羟基黄酮，2-羟基查耳酮） 2 有无机酸或有机酸存在 在草酸存在下，显黄色并带绿色荧光。 在枸橼酸丙酮存在条件下，只显黄色而无荧光。 第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色反应共一百一十五页*58（四）碱性试剂(shj)显色反应 日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用碱性试剂处理后的色变情况(qngkung)。 1. 二氢黄酮类易在碱液中开环，转变成相应异构体查耳酮类化合物，显橙-红色。第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色反应共一百一十五页*59 2. 黄酮醇类在碱液中先呈黄色，通入空气后变为棕色(zngs)，据此可与黄酮类区别。

22、 3. 黄酮类化合物当分子中有邻二酚羟基取代或 3,4-二羟基取代时，在碱液中不安定，很快氧化，由黄色深红色绿棕色沉淀。第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色(yns)反应共一百一十五页*60(五)与五氯化锑的反应(fnyng) 查耳酮的无水(!)CCl4溶液与五氯化锑作用生成红或紫红沉淀,黄酮、黄酮醇、二氢黄酮类显黄-橙黄色。 方法(fngf)： 样品5-10mg溶于5ml无水CCl4中，加1ml 2%的五氯化锑的CCl4溶液。 反应必须无水，否则生成沉淀不稳定。第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色反应共一百一十五页*61（六）Gibbs反应(fnyng) 检查5-OH对位未被取代的黄酮。 将

23、样品溶于吡啶中，加入Gibbs试剂显蓝或蓝绿色。Gibbs试剂: 甲液：0.5%2,6-二氯苯醌-4氯亚胺的乙醇溶液。 乙液：硼酸(pn sun)-氯化钾-氢氧化钾缓冲液(pH9.4)第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色反应共一百一十五页练习(linx)1：HCl-Mg反应(fnyng) NaBH4反应 锆-枸橼酸反应 SrCl2反应 硼酸+草酸反应 Molish反应 *62()()黄色，加枸橼酸后褪色()()()共一百一十五页*63一、提取 黄酮类化合物在花、液、果等组织中，多以苷的形式存在(cnzi)； 在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在； 根据化合物极性不同，溶解性不同，采用不同溶剂

24、提取。第三节 黄酮类化合物的提取(tq)分离共一百一十五页*641. 苷元 多用CHCl3、Et2O、EtOAc等极性较小溶剂提取； 对于多OCH3化的成分(chng fn)，用苯、石油醚提取； 对于极性大的成分，如查耳酮、橙酮、双黄酮、羟基黄酮等，用EtOAc、EtOH、Me2CO、MeOH;H2O(1;1)等溶剂提取。第三节 黄酮类化合物的提取(tq)分离共一百一十五页*65 2. 苷类 水或热水提取(tq)，（多糖苷在热水 中溶解度较大，在冷水中溶解度较小）； 也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。 3. 含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。 4. 提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮类

25、化合物则应避免。第三节 黄酮类化合物的提取(tq)分离共一百一十五页*66二、粗提物的精制(jngzh)处理 1 溶剂萃取法去杂 石油醚：除去(ch q)叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性 物质 逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和非极性苷元。第三节 黄酮类化合物的提取分离共一百一十五页*672 碱水(jin shu)提酸沉淀法 适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。 注意事项： 酸碱度不宜过大 邻二酚羟基的保护(boh)：碱性条件下，邻二酚羟基易被氧化，加硼砂保护

26、(boh) 石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂质第三节 黄酮类化合物的提取分离共一百一十五页*683 炭粉吸附(xf)法 适用于苷类的精制工作。 植物(zhw)的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。依次用沸水、沸甲醇、 7%酚/水、15%酚/醇洗脱，分步收集、检查、合并。 大部分苷类可用7%酚/水洗下，经减压浓缩至小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得较纯黄酮苷。第三节 黄酮类化合物的提取分离共一百一十五页*694 离子交换(l z jio hun)法 用阳离子交换树脂(shzh)从水提液中吸附黄酮类化合物，与不被吸附的杂质分离，再用甲醇将黄酮类化合物洗脱。 RSO

27、3-H+ ArOH（黄酮） 无法交换，故实际上树脂仅起到吸附作用。第三节 黄酮类化合物的提取分离共一百一十五页*70三、分离(fnl) 1. 极性大小不同，利用吸附或分配原理进行分离 常用吸附剂有聚酰胺、硅胶、纤维素粉。 ）聚酰胺层析：主要有聚己内酰胺型(Perlon)、六次甲基二胺已二酸盐(Nylon)型、聚乙烯吡咯烷酮(Polyclar)型三种(sn zhn)。 其原理是酰胺羰基与黄酮酚羟基形成氢键缔合而吸附，吸附能力与酚羟基多少、位置及氢键缔合力大小有关。第三节 黄酮类化合物的提取分离共一百一十五页*71 各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力(nngl)由弱至强依次为： 水，甲醇，丙酮，氢氧化钠

28、水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰胺，脲素水溶液。第三节 黄酮类化合物的提取(tq)分离共一百一十五页*72黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱(x tu)时有下列规律：苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷双糖苷单糖苷苷元母核上增加羟基(qingj)，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有邻位羟基黄酮具有对位（或间位）羟基黄酮不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般是： 异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。第三节 黄酮类化合物的提取分离共一百一十五页*73）硅胶(u jio)层析 对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其苷类，硅胶减活性使用(shy

29、ng)对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰化黄酮及二氢黄酮、异黄酮，则无须减活性。第三节 黄酮类化合物的提取分离共一百一十五页*742. 利用分子大小不同(b tn)，用葡聚糖凝胶分子筛分离 主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G型和Sephadex-LH20型 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷糖少的苷游离苷元（极性小大） 常用洗脱剂： 碱性水溶液，含盐水溶液 醇及含水(hn shu)醇 含水丙酮，甲醇氯仿 第三节 黄酮类化合物的提取分离共一百一十五页*75利用酸性强弱，采用pH梯度(t d)萃取法 混合物溶于

30、有机溶剂，依次用NaHCO3、Na2CO3、0.2%NaOH、4%NaOH萃取，相应的黄酮类化合物洗脱顺序(shnx)：7,4二羟基7或4羟基一般酚羟基羟基黄酮第三节 黄酮类化合物的提取分离共一百一十五页*76根据分子中某些(mu xi)特定官能团进行分离 醋酸铅沉淀法 硼酸络合法：根据具有邻二酚羟基的黄酮与硼酸络合，生成物易溶于水的性质与其它类型黄酮分离。 通常(tngchng)在不与水混溶的有机溶剂如乙醚中，用硼酸液萃取，水相即为邻二酚羟基类黄酮。第三节 黄酮类化合物的提取分离共一百一十五页*77举例：从芹菜Apium graveolens L.种子(zhng zi)中分离graveobi

31、odide A及B第三节 黄酮类化合物的提取(tq)分离共一百一十五页*78共一百一十五页*79目前主要采用的方法有：与标准品或与文献对照PPC或TLC得到的Rf或hRf值（Rf100）分析对比样品在甲醇溶液中及加入(jir)酸、碱或金属盐类试剂后得到的UV光谱1H-NMR 13C-NMR MS第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*80一、色谱(s p)在黄酮类鉴定中的作用 1. 纸色谱(PPC) 苷类成分可采用双向展开，第一相展开采用醇性溶剂，如BAW系统（正丁醇： 醋酸(c sun)：水4：1：5上层）；第二相展开用水性溶剂，如氯仿：醋酸：水（3：6：1） 苷元则

32、多采用醇性溶剂。花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂。第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定共一百一十五页*81第一次第二次纸色谱(s p)第一相展开剂：醇性溶剂BAW（4:1:5），分配作用Rf：苷元单糖苷(tnggn)双糖苷(tnggn)第二相展开剂：水性溶剂，2%HAc，吸附作用Rf：（1）苷元原点附近，苷0.5，糖链越长， Rf越大（2）苷，黄酮（醇）查耳酮二羟黄酮（醇）第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定共一百一十五页*82二、紫外光谱(gungp)在黄酮类鉴定中的应用 可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含有羟基(qingj)。 一般程序： 测定样品在甲醇中的UV谱以了解母核类

33、型； 在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测UV 谱和可见光谱以了解3，5，7，4有无羟基及邻二酚羟基； 苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上法测苷元的UV谱以了解糖的连接位置。第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定共一百一十五页*83（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱(gungp) 多数(dush)黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：带I在300-400nm区间，由B环桂皮酰系统的电子跃迁所引起；第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定共一百一十五页*84 带II在240-285nm区间，由A环苯甲酰系统的电子(dinz)跃迁所引起。第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十

34、五页*85带II(240-285nm)（苯甲酰系统）带I(300-400nm)桂皮酰系统类 型说 明250-285304-350黄酮类-OH越多，带I带II越红移B环3,4有-OH基，带II为双峰（主峰伴肩峰）328-357黄酮醇类(3-OR)352-385黄酮醇类(3-OH)245-270270-295300-400异黄酮类二氢黄酮（醇）B环上有-OH, OCH3对带I影响不大220-270340-390或340-390(Ia) 300-320(Ib)查耳酮类查耳酮2-OH使带I向红移影响大370-430(3-4个小峰)橙酮类第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*8

35、62加入诊断试剂后引起的位移(wiy)及结构测定第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*87加入试剂带II带I说明样品+MeOH250-285304-385两峰强度基本相同，具体位置与母核上电负性取代基(-OH, -OCH3)有关，-OH, -OCH3越多，越长移+NaOMe或+NaOHA环有-OH，红移小，无意义40-60nm（不变或增强）50-60nm（下降）有4-OH，无3-OH有3-OH，无4- OH有3,4-OH或3,3,4-OH（衰减更快）7-OH带I，II随加NaOMe时间延长，逐渐衰减320-330nm有小峰+NaOAc(未熔溶)5-20有3-OH,4O

36、H也发生红移，但意义不大 7-OH第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*88加入试剂带II带I说明+NaOAc/H3BO35-1012-30有6,7-OH或7,8-OH (5,6-OH无)B环有邻二酚羟基AlCl3/HCl6050-6035-5517-200有3-OH有3,5-二OH有5-OH，无3-OH有6-OR无3-OH, 5-OH或6-OR存在AlCl3光谱-AlCl3/HCl光谱30-4050-650B环有邻二酚羟基A,B环皆有邻二酚羟基A,B环皆无邻二酚羟基第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*89说明(shumng)： 1）+Na

37、OMe, OHOMe，红移 另有有3,4-OH或3,3,4-OH时，在 NaOMe作用下易氧化(ynghu)破坏，故峰有衰减。 2）NaOAc为弱碱，仅使酸性较强者，如7,4-OH解离。第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定共一百一十五页*903）形成络合物的能力(nngl)：黄酮醇3-OH 黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH） 邻二酚羟基 二氢黄酮醇3-OH邻二酚羟基和二氢黄酮醇3-OH在酸性条件下不与AlCl3络合；但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合；形成络合物越稳定，红移越多。4）二者相减可检测邻二酚羟基。 第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*91芦丁(l dn

38、) 带II 带IMeOH 259 359NaOMe 272 410AlCl3 275 433AlCl3/HCl 271 402NaOAc 271 393NaOAc/H3BO3 262 387第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定黄酮醇或3-0-苷=410-359=51， 4-OH=402-433=-31，B环有邻二OH=402-359=43，有5-OH，无3-OH=271-259=12，7-OH=387-359=28，B环有邻二OH共一百一十五页*92三、1H-NMR常用(chn yn)溶剂： 氘代氯仿（CDDl3），氘代二甲基亚砜（DMSO-d6），氘代吡啶（C5D5N）。 也可将

39、黄酮类化合物作成三甲基硅醚衍生物溶于四氯化碳中进行测定。第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*93（一）A环质子(zhz)15，7-二OH黄酮第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*9427-OH黄酮H-5较H-6、H-8低场，是由于(yuy)羰基的负屏蔽效应的影响。H-6、H-8较5, 7-二OH黄酮低场，且相互位置可能颠倒。 第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*95（二） B环质子(zhz) 6.5-814-氧取代(qdi)黄酮类化合物H-3, 5 6.5-7.1, d, J=8.5HzH-2, 6 7.1-8.

40、1, d, J=8.5Hz由于C环对H-2, 6的负屏蔽作用大于对H-3, 5，且H-3, 5受4-OR的屏蔽作用，故前者较低场；C环氧化程度越高，H-2, 6处于越低场的位置。第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定共一百一十五页*9623, 4-二氧取代(qdi)黄酮类化合物 H-2受C环负屏蔽(pngb)和3-OR屏蔽作用，H-6 也受C环负屏蔽作用，而H-5则仅4-OR屏蔽作用。故由低场到高场的顺序为：H-6 H-2 H-5。但有时也会发生H-2和H-6重叠的现象。（1）3, 4-二氧取代黄酮及 黄酮醇 H-5 6.7-7.1 d, J=8.5Hz H-2 7.2 d, J=2.5Hz H

41、-6 7.9 dd, J=2.5, 8.5Hz第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定共一百一十五页*97 （2）3, 4-二氧取代异黄酮、二氢黄酮及 二氢黄酮醇 H-2, 5,6常作为一个复杂(fz)多重峰（通常为两组峰） 6.7-7.1第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*9833, 4,5-三氧取代(qdi)黄酮类化合物若R1=R2=R3=H，则H-2,6为单峰， 6.7-7.5若上述(shngsh)条件不成立，则H-2,6分别为二重峰（J=2Hz） 第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定共一百一十五页*99（三） C环质子(zhz) 1. 黄酮类第四节 黄酮类化合物

42、的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*1003. 二氢黄酮和二氢黄酮醇 1) 二氢黄酮两个(lin )H-3, 分别为dd峰，中心位于2.8 ，J = 17Hz（偕偶），5Hz（顺偶）及J = 17Hz（偕偶），11Hz（反偶）H-2, dd, 5.2, Jtrans = 11Hz（反偶）, Jcis = 5Hz（顺偶）第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*101（2）二氢黄酮醇3-OR苷化，供电子能力(nngl)下降，两个氢的值升高（向低场位移），可用于判断二氢黄酮醇苷中糖的位置。 H-2与H-3为反 式双直立(zh l)键， J=11HzH-2 4.9H-3

43、 4.3第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定共一百一十五页*1024. 查耳酮第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*1035.橙酮第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*104四、13C-NMR 方法： 1）对比法：与简单的模型化合物如苯乙酮、桂皮酸及它们的衍生物光谱的比较； 2）计算法：用经验的简单芳香化合物的取代位移加和规律(gul)进行计算； 3）选用各种一维和二维NMR技术。第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*105（一）骨架(gji)类型的判断 根据中央三碳链的碳信号，即先根据羰基(tn j)碳的值，再结合

44、C2、C3的裂分和值判断。第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定共一百一十五页*106C=OC-2（或C-）C-3（或C-）归属168.6169.8(s)137.8140.7(d)122.1122.3(s)异橙酮类174.5184.0(s)160.5163.2(s)104.7111.8(d)黄酮类149.8155.4(d)122.3125.9(s)异黄酮类147.9(s)136.0(d)黄酮醇类182.5182.7(s)146.1147.7(s)111.6111.9(d)(=CH-)橙酮类188.0197.0(s)136.9145.4(d)116.6128.1(d)查耳酮类75.080.3(d)

45、42.844.6(t)二氢黄酮类82.7(d)71.2(d)二氢黄酮醇类第四节 黄酮类化合物的检识与结构(jigu)测定共一百一十五页*107（二）黄酮类化合物取代图式(t sh)的确定方法 黄酮类化合物中芳香碳原子的信号特征可以(ky)用来确定取代基的取代图式。 以黄酮为例，其13C-NMR信号如下所示：第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定共一百一十五页*108 1取代基位移(wiy)的影响 XZiZoZmZpOH26.6-12.81.6-7.1OCH331.4-14.41.0-7.8 -OH及-OCH3的引人将使直接相连碳原子(-碳)信号大幅度地向低场位移(wiy)，邻位碳原子(-碳)及对位碳则向高场位移。间位碳虽也向低场位移，但幅度很小。第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定共一百一十五页*109 A-环上引入取代基时，位移效应只