SDSPAGE所有详细试剂配方

1、 SDS30%聚丙烯酰胺溶液30%（w/v）Acrylamide【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积（mL）或质量（g）30%Acr-Bis(29:1)1000ml100ml29%Acrylamide(丙烯酰胺)290g29g1%BIS（N,N-亚甲丙烯酰胺）10g1g【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37C左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。0.45|jm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4C避光（用铝箔纸包扎起来）保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过

2、两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。【保存条件】4C避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和N,N-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。1MTris-HCL（pH6.8）（浓缩胶buffer）【组分浓度】1MTris-HCL名称用量备注Tris12.1g去离子水80ml浓盐酸9ml（36%的浓盐酸）预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存配制方法】称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解口0.7mL的

3、浓HCL调节所需要的pH值（7.4-大约0.7mL,7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L,高温高压灭菌后，室温保存。应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。【保存条件】室温保存。【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。1.5MTris-HCL(pH8.8)(分离胶buffer)【组分浓度】1.5MTris-HCL名称用量备注Tris18.17g去离子水80ml浓盐酸3ml（36%的浓盐酸）预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存配制方法】1L称量1

4、81.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L,高温高压灭菌后，室温保存。(1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。)【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。10%十二烷基硫酸钠SDS溶液10%(w/v)SDS【组分浓度】10%(w/v)SDS名称用量备注SDS10g去离子水80ml加入去离子水定

5、容至100ml后，室温保存配制方法】称取2g高纯度的SDS置于100200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68C加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】对人体有害，请注意防护。10%过硫酸铵溶液10%(w/v)AP【组分浓度】10%(w/v)过硫酸铵名称用量备注过硫酸铵0.1g去离子水1ml现配现用配制方法】称取0.1g过硫酸铵置于1.5ml离心管，加1mL去离子水吹打溶解，4C保存【保存条件】4C保存【注意事项】10%过硫酸铵溶液在4C保存时，可使用2周左右，超过期限会失去催化作用5xTris-甘氨酸电泳缓冲液5xTris-Gly

6、cinebuffer(SDS电泳缓冲液)组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)1000ml500ml0.125MTris15.1g1.25Mglycine(甘氨酸)94.0g0.5%(W/V)SDS5.0g配制方法】称取15.1gTris，94.0g甘氨酸(glycine)，5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。得0.125mol/LTris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释5倍。【保存条件】室温保存，两年有效。【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用

7、1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液5xSDS加样缓冲液5xSDSLoadingBuffer【组分浓度】0.25MTris-HCL(pH6.8)；10%(W/V)SDS；0.5%(W/V)BPB(溴酚蓝)；50%(V/V)甘油；5%(W/V)0-巯基乙醇(2-ME)各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)5ml3ml1MTris-HCL(pH6.8)1.25mlSDS0.5gBPB(溴酚蓝)25mg甘油2.5ml(0.5mL/份)分装，室温保存，使用前加25pL2-ME/小份，保存一个月左右。P-巯基乙醇(2-ME)0.25mlp功L至子【配制方法】量取1.2

8、5mL1MTris-HCL(pH6.8),0.5gSDS，25mgBPB,2.5mL甘油，置于10mL塑料离心管中，加去离子水溶解后，定容至5mL，小份(0.5mL/份)分装，于室温保存。使用前将25pL的2-ME加入到每小份中。加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右。【保存条件】-20r保存，至少一年有效。【注意事项】SDS蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微刺激性气味，必须完全溶解后再使用。摘自Takara商品目录-实验室常规试剂配制方法TEMED原液直接使用考马斯亮蓝R-250染色液【组分浓度】0.1%(w/v)考马斯亮蓝R-250,25%(v/v)异丙醇，10%(v/v)冰醋酸各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)1000ml400ml备注考马斯亮蓝R-2501.0g0.4g异丙醇250ml100m