甾体激素类药物的分析、结构和鉴别测定

1、甾体激素类药物的分析、结构和鉴别测定基本要求结构与性质鉴 别 试 验杂 质 检 查含 量 测 定练习与思考概 述基 本 要 求1掌握甾体类药物的结构特点与分析方 法之间的关系。2掌握甾体类药物的鉴别原理与方法。3掌握甾体类药物的含量测定原理与方法。4熟悉甾体类药物杂质检查的方法。 回顾 激素（hormone）是生物体内特殊的腺体或组织产生的，直接分泌到体液中，通过体液运送到特定的部位，从而引起特殊激动作用的一群微量的有机化合物。 回顾外分泌腺和内分泌腺的区别无排泄管。其分泌物直接进入细胞周围的血管和淋巴，由血液和淋巴输送到各组织或器官中。 有排泄管。其分泌物通过腺导管输送到相应的组织或器官发挥

2、其调节作用。 回顾动物激素植物激素脊椎动物激素无脊椎动物激素氨基酸衍生物激素肽和蛋白质激素类固醇激素脂肪酸衍生物激素甲壳类激素昆虫激素激素 回顾（一）氨基酸衍生物激素 甲状腺素 肾上腺素 5-羟色胺（二）肽和蛋白质激素 这类激素包括由垂体（腺垂体、神经垂体），下丘脑、胰腺、甲状腺、甲状旁腺、胃肠和胸腺等分泌的激素。 回顾 回顾（三）脂肪酸衍生物激素 前列腺素(prostaglandin,PG） 前列腺烷酸 前列腺烷酸 基本结构：环戊烷骈多氢菲ABCD12345678910111213141516171819 概述类固醇激素分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素 肾

3、上腺皮质激素氢化可的松肾上腺皮质激素醋酸地塞米松肾上腺皮质激素曲安息龙肾上腺皮质激素地塞米松磷酸钠雄性激素甲睾酮雄性激素丙酸睾酮蛋白同化激素苯丙酸诺龙孕激素黄体酮孕激素醋酸甲地孕酮雌性激素炔雌醇雌性激素雌二醇炔诺酮此外炔诺孕酮一、结构与性质 1. 肾上腺皮质激素主要活性基团性 质4 3 酮UV、与羰基试剂反应 C17 醇酮基还 原 性2. 雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性 质4 3 酮UV、与羰基试剂反应 C17 羟基可成酯3. 孕激素主要活性基团性 质4 3 酮UV、与羰基试剂反应C17 甲酮基与亚硝基铁氰化纳反应4. 雌性激素主要活性基团性 质A环为3OH 苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应

4、C17 乙炔基与AgNO3反应C17 羟基可成酯二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应甾体激素类药物呈色H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl（母核）与硫酸显色反应 显 色 荧光 加水稀释泼尼松龙 深红 絮状灰泼尼松 橙 黄蓝绿炔雌醚 橙红 黄绿 红色 炔雌醇 橙红 黄绿 絮状玫红醋酸可的松 黄或微 褪色并澄 带橙 清(二) 官能团的反应肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐OH1、C17 醇酮基还原性呈色反应此外还有裴林试液、多伦试液甾酮类激素药物呈色羰基试剂3酮基和C20酮基常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色亚硝基铁氰化纳间二硝基酚芳香醛

5、3.甲酮基黄体酮蓝紫色亚硝基铁 氰化纳其他甾体淡橙色不显色有机氟F有机破坏有机氯Cl4.有机卤素茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸硝酸银AgCl 呈色 雌激素类药物红色偶 氮染料重氮苯磺酸5. 酚羟基含炔基的甾体激素银盐沉淀硝酸银6. 乙炔基的沉淀反应 (三)制备衍生物测定m.p.盐酸氨基脲苯丙酸诺龙缩氨基脲衍生物1. 缩氨基脲的生成m.p.约180（分解）2. 酯的水解丙酸睾酮碱性条件睾酮m.p.为150 156-3-酮、苯环、其他共轭结构（四）UV法1. 结构依据240nm左右280nm左右2. 示例 曲安西龙丙酸倍氯米松 溶剂甲醇乙醇20g/ml浓度20g/ml结果判断在238nm处有最大吸收在23

6、9nm处有最大吸收，A为 ，在239nm与263nm 处的吸收度比值为结构特征：酚羟基、C17 OH C17 乙炔基炔雌醇（五）IR法1505cm-13505cm-13300cm-11590cm-13610cm-1酚羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨架振动黄体酮结构特征：-3-酮、C17-酮基1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H双键（六）TLC法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。（七） HPLC法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟

7、轻松软膏） 方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。三、 特殊杂质检查（一）其他甾体的检查 检查意义：其他甾体与甾体激素药物结 构相似，也有一定的药理作 用而又互不相同.检查方法（具有一定分离能力） TLC法（高低浓度对比法） HPLC法（类似高低浓度对比法）（1）TLC法（高低浓度对比法） 判定方法： 规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色例：氢化可的松中其他甾体的检查供试液：本品+氯仿-甲醇（9：1） 浓度：对照液：供试液（）+氯仿-甲醇（9：1） 60g/ml 层析：供试液 点样、展开、斑点检出。 对照液判断：供试液如显杂质斑点，不得多于3个，其

8、颜 色与对照液的主斑点比较，不得更深。（2）HPLC法（主成分自身对照法） 判定方法： 规定杂质峰数目规定杂质峰面积硒的检查（二）来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢有毒方法药物氧瓶燃烧二氨基萘比色法测定（三）有机溶剂残留量的检查（灵敏度法）甲醇 不得出峰 检测限丙酮 5.0% 内标法 + 校正因子以地塞米松磷酸钠为例 GC法地塞米松磷酸钠检查 甲醇和丙酮 精密称取本品，置10ml量瓶中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至刻度，作为供试液；另精密量取甲醇10l(7.9mg)与丙酮100l(79mg)置100ml量瓶中，精密加内标溶液20ml，加水至刻度，作为对照液。照气相色谱法测定，含丙酮不得

9、过5.0%，并不得出现甲醇峰。（四）游离磷酸盐的检查地塞米松磷酸钠对照品比色法供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸 钼蓝：740nm对照液：同上 （对照液 0.0035%KH2PO4）（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RPHPLC（大多内标法）（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）四、含量测定测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。示例：黄体酮的含量测定色谱条件：固定相 ODS，流动相 甲醇-水 （65:35），检测波长254nm， 内标物 己烯雌酚系统适用性试验：n 1000，R符合规定。测定样品：黄体酮原料、注射液。定量方法：内标法对照

10、品溶液供试品溶液己烯雌酚黄体酮（二）UV法-3-酮 240nm（）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕药 苯环 280nm（）雌激素醋酸地塞米松片的含量均匀度检查（1）配制供试液（2）测定：240nm（3）计算肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3酮基（1） 原理异烟腙（黄）酮基异烟肼-3CHCl（缩合）1. 异烟肼比色法（三）比色法异烟腙（黄色）（2）方法对照品法55异烟肼挥去乙醇对照液供试液A暗45（3）讨论反应速度（反应专属性）A.C3= O C17= O 、 C20= O C11= O 不反应反应专属性 C3酮基B. 溶剂的选择异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇无水甲醇无水乙醇C.水分、温度、O2与光线的影响 含水量腙水解A%不挥发溶剂、不吸收水分时 O2与光线无影响t D. 酸的种类和浓度及异烟肼的浓度酸:异烟肼 = 2:1盐酸浓度0.0074mol/L异烟肼浓度0.00365mol/L最大A 肾上腺皮质激素类C17 -醇酮基强还原性（1）原理2. 四氮唑比色法有色甲瓒四氮唑盐醇酮基-a-17COH -还原三苯甲瓒深红氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（RT）H蓝四氮唑（BT）（2）方法对照品法25氢氧化四甲基铵对照液供试液ATTC4045暗（3）讨论A. 基团对反应速度的影响C11= O C11OHC21OH C2