海南霉素补料工艺的探讨3100字

1、海南霉素补料工艺的讨论3100字 摘要：通过对海南霉素发酵代谢在线实时曲线, 以及发酵过程中总糖、复原糖、氨基氮、pH、菌浓、菌丝形态、发酵单位等理化指标的分析研究，发现通过补料来补充碳源和氮源可以弥补发酵后期因碳氮比例失调而导致菌丝体断裂、自溶、从而导致产物合成才能衰退。补料可以延长到达发酵终点1的时间，到达增产增效的目的。 /关键词：海南霉素、碳源、氮源、补料工艺 海南霉素是一种新型的聚醚类抗生素，是从稠李链霉菌,8东方变种培养物中提取获得的中国自主开发的抗生素兽药，它是一种新型的消化促进剂，主要用来防治鸡球虫病2和家畜的饲料添加剂，是迄今为止我国唯一批准上市的属一类新药的抗球虫药3具有活

2、性高、无残留、无抗性等特点,其抗菌活性分别为盐霉素、莫能菌素的10倍和20倍。本实验通过增加补料工艺来控制碳氮比例平衡以到达进步海南霉素发酵单位的目的。1 材料与方法：1.1 实验中所用FCD- F2- 0801008 菌种为实验室自技术转让方提供的砂土管保存菌种自然分纯、传代得到的F2 代斜面, 摇瓶发酵单位3500ug/ mL。1.2 分别采用50L和250L 种子罐作为一二级种子罐，种子罐配方为：玉米淀粉1.5%，葡萄糖：1.0%，黄豆饼粉：1.0%，硫酸镁：0.05%，磷酸氢二钾0.05%，氯化钠：0.5%。1.2.1 种子罐工艺一级种子: 28. 5，通风比1:0.8， ,150 转

3、/ 分,周期25-27小时二级种子: 28. 5，通风比1:1， ,200 转/ 分,周期18-20小时1.2.2 发酵采用6.0m3罐，按3.5 m3计料，消后3.0 m3，发酵罐配方为：?玉米淀粉：8.0%，葡萄糖：1.0%，黄豆饼粉：1.0%，蛋白胨：0.5%，硫酸镁：0.05%，磷酸氢二钾0.05%，氯化钠：0.5%，酵母粉：0.5%,淀粉酶：0.02%。 作文 / 1.2.3 发酵工艺温度: 28 ; 罐压: 0.05MPa ;通风比：1：1；溶解氧: 30- 60%;2、补料采用流加的方式，总补料量为发酵总体积的15%，补料时间通过不同时间的理化指标及效价结果确定。2.1.1补料配

4、方：玉米淀粉：1.5%，a-淀粉酶：0.2%，黄豆饼粉：0.5%，泡敌：0.2%。2.1.2 原材料的灭菌采用200L罐，按30%比例先将玉米淀粉、黄豆饼粉、泡敌投入罐内，回调p至7.5左右，通蒸汽加热至50时参加淀粉酶，升温至80恒温糊化15 min，然后升温至120-121，消毒30min,降温至28-30.从非补料工艺的理化指标分析来看，024小时为菌体生长阶段，其代谢变化为碳源和氮源等进展分解代谢，菌体进展合成代谢，从而使新菌体不断被合成，菌浓明显增加，菌体生长恒定后生长阶段完毕，24小时之后菌体由菌丝生长转为次级代谢，代谢产物为海南霉素。海南霉素发酵过程中, 初级代谢利用葡萄糖时间较

5、长, 造成前期菌体生长过盛; 而转入次级代谢后,碳氮比例偏小, 导致碳源物质缺乏, 因碳氮比例逐步减小,引起菌体过早衰老， 发酵单位增幅缓慢, 后劲缺乏，最终放罐效价偏低。当总糖和复原糖比值约为1时，根本到达发酵终点，出现氨基氮上升，p反弹，镜检发现菌丝有自溶现象5，视野里散落菌丝增多，终点总糖和复原糖明显低于工艺要求，影响产素4才能，周期延 长20小时生化检测效价降低7。4、补料实验方案：分别将补料开场时间设定为48hr、60hr，补料截止时间均为90hr,跟踪各个实验的代谢过程。 48hr 开场补料的发酵不同时间点的参数变化时间h 0,24,48,72,96,120,140,总糖g/100

6、ml 8.80，7.35，6.88，4.53，3.42，3.00，2.35氨基氮mg/100ml25.6，20.38，18.28，19.96，20.35，20.90，25.78 菌浓% 9，24，30，34，34，35，35p 7.08，7.02，6.89，6.83，6.85，7.16，7.60效价ug/ml - ， - ， 790，2800，3550，4388,480048hr开场补料的代谢特点：总糖和复原糖的量一直比拟稳定，补料量根本与糖耗速度相符，发酵过程碳氮比例适中，发酵终点特征明显，p细微反弹，氨氮略有上升，镜检未见大量散落菌丝，菌丝空胞增多，效价涨幅较好。 60hr 开场补料的发酵

7、不同时间点的参数变化 时间h 0,24,48,60,96,120,140 总糖g/100ml 9.00，7.56，6.60，5.70，4.20，3.20，2.16氨基氮(mg/100ml 26.10，21.18，18.20，19.20，18.30，24.50，28.70菌浓% 10，24，30，32，34，33，35p 7.13，6.80，6.87，6.80，6.70，7.56，7.90效价ug/ml - ， - ，850 ，1400，3700，4200，4440hr 补料的代谢特征：前期菌浓生长缓慢，菌体生长期延长，补料后总糖偏高，碳氮比例发生变化，终点特征明显，菌丝体出现细微自溶现象，后期

8、效价涨幅放缓。综上实验分析：微生物所处的环境在发酵过程中不断的变化，其物理、化学和生物参数都随时间而变化，是个动态的过程。在产物合成阶段，菌体物质的物质合成仍未停顿，菌体重量有所增加但根本不繁殖。这个阶段的代谢变化是利用碳源和氮源来合成产物，基质浓度的变化很容易影响这个阶段的代谢，碳源和氮源的浓度必须控制在一个最正确的范围内，才能促进产物不断的被合成。假如这些营养物质过多，菌体就会进展生长代谢从而抑制产物合成。假如较少，菌体就会过早衰老从而合成才能下降。所以假如补料开场时间过早发酵前期总糖和复原糖较高，菌浓生长较为缓慢，生长期就会延长，补料速度大于菌丝体的糖耗速度，总糖偏高，菌丝革兰氏染色较重

9、，菌丝生长较为旺盛，延缓产物合成。通过图表可以看出48小时开场补料使得发酵代谢发生了明显的变化,在菌体生长期完成后，补料使菌体酶体系处于最利于产物合成的状态。虽然发酵周期延长了20小时，由于补充了碳源和氮源，总糖和复原糖并没有发生太大的变化，最终碳氮比例没有失调。镜检未见大量断裂菌丝及菌丝体自溶现象，同时p反弹及氨氮上升也没有正常工艺明显。从发酵产物6积累上来看，非补料工艺和补料工艺小时效价根本相当，但采用流加补料在极少增加原料及动力消耗的情况下效价到达了稳步增长，效价20小时增长了412ug/ml.进步了9.1%，可见采用补料工艺均比正常工艺进步了放罐效价，到达了延长周期进步发酵程度的目的。 / 参考文献：1曲音波.微生物技术开发原理.北京化学工业出版社，20222张延荣，宋玉芹，宋春阳，等.海南霉素在饲料中的毒性研究.莱阳农学院学报，2022,21:18-193陈志萍，刘学武，等。复方海南霉素的药效实验。中国兽医寄生虫病，2002,10:494黄幸纤，陈星假设.环境化学物致突变、致癌实验方法。浙江科技出版社，19855王菊凝。当前对化学物的致癌性、诱变性挑选性短测的组合。国外医学卫生学分册，1990,1:1