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文档简介

1、1掌握毛细管电泳法的基本原理、结构与使用方法。2掌握紫外吸收光谱检测方法。3测定阿司匹林与水杨酸。实验二十一 毛细管电泳法测定水杨酸的含量实验目的1 毛细管电泳又称高效毛细管电泳( High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE) 是一种仪器分析方法。通过施加10-40kV的高电压于充有缓冲液的极细毛细管，对液体中离子或荷电粒子进行高效、快速的分离。现在，HPCE已广泛应用于氨基酸、蛋白质、多肽、低聚核苷酸、DNA等生物分子分离分析，药物分析，临床分析，无机离子分析，有机分子分析，糖和低聚糖分析及高聚物和粒子的分离分析。人类基因组工程中DNA的

2、分离是用毛细管电泳仪进行的。实验原理2仪器与试剂高效毛细管电泳仪；石英毛细管柱50cm50m；色谱工作站；PHS-3C数字酸度计 ；离心机 ；超纯水仪器A10 水杨酸（SA）、北四硼酸钠、氢氧化钠、十二烷基硫酸钠（SDS）等试剂均为高纯试剂；31电泳条件毛细管柱在使用前分别用0.1 mol的NaOH溶液和二次蒸馏水及缓冲液冲洗3min后，在运行电压下平衡10min。以后每次进样前均用缓冲液冲柱，在运行电压下平衡5min。 本实验采用电迁移进样（10Kv、5s）。 高压端进样， 低压端检测，20 Kv的工作电压。检测波长为214nm。2水杨酸标准样品的测定分别测定0.05、0.01、0.8、1.

3、2、1.6、2.0和5.0 mmol的水杨酸标准溶液。每个浓度平行测三次。实验步骤43阿司匹林药片中水杨酸含量的测定a取阿司匹林药品溶液，在上述的电泳条件下对样品溶液进行测定，平行测三次。 b把一定浓度的水杨酸加入样品溶液中，进行测定。4数据采集打开色谱工作站软件。把电压上升到20Kv，立即点击主界面的绿色图标谱图采集，开始谱图采集。在进样之前把屏幕调到色谱工作站的主界面。点击主界面的红色图标手动停止，可以停止谱图采集。然后将文件起名并保存在指定的文件夹。5数据处理从色谱工作站打开保存的文件，通过调节参数表里的满屏量程和满屏时间，把谱图调到最佳。当需要改动起始峰宽水平时，还要按在处理这个图标。把谱图调到最佳后，点击定量组分，出现一张表格。选中套峰时间下的一个空格，再用鼠标右键点击需要研究的峰的内部，弹出一个菜单，点击自动填写“定量组分”表中套峰时间。然后输进样品的浓度，点击定量方法，点击计算校正因子，点击屏幕上的定量计算图标，点击定量结果表，出现校正因子和峰面积，记录校正因子和峰面积。点击定量结果，在定量结果表格里输入组分名称、浓度、平均校正因子、平均峰面积。点击当前表存档，重复上述操作，存入七档数据。然后点击定量方法，点击工作曲线中的计算，再点击显示。显示出峰面积浓度的线性关系图和峰面积浓度的方程。然后把标准曲线复制到word文档里。 将样品中水杨酸峰面积的

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