单元(扩充)繁殖生物技术ppt课件

1、单元扩展 繁衍生物技术 Bio-Tec of Reproduction第一节 体外受精第二节 发情控制第三节 其它繁衍生物学技术.第一节 体外受精 体外受精是指卵母细胞与精子在体外交融，构成合子的过程。体外受精胜利的标志是经过移植产生后代。 卵母细胞：体内；体外 精子：体外获能一、卵母细胞1、体内成熟卵母细胞 1超数排卵：略，胚胎移植讲 2卵母细胞采集 ：在内窥镜的导引下，穿刺成熟卵 泡，从卵泡中抽吸卵泡液和成熟卵母细胞。 3镜检：将汲取的卵泡液及卵母细胞置于评皿中，在 体视显微镜下25X， 选那么合格的卵母细胞，用 于体外受精。. 合格卵母细胞规范：放射冠细胞分散良好，质地均一，放射冠细胞间

2、透明；透明带明晰；卵母细胞圆形，直径大小适中，细胞质质地均匀，色泽柔和，透明度适中图1。2、体外成熟的卵母细胞1卵母细胞来源1卵巢来源：从屠宰 场宰杀的母畜获得卵巢， 38 C生理盐水中保温， 宰杀后 2 小时内运回实 验室。图1 成熟卵母细胞图. 2采集卵母细胞卵丘细胞复合物：用 38 C 生理盐水洗涤卵巢 2 次，左手持卵巢，右手持注射器，如下图，抽取 35mm 卵泡 的卵泡液及卵母细 胞卵丘细胞复合 物，置于20ml试管 内，静置待检。 选择 35 mm 卵泡的缘由是：更 大卵泡的闭锁比例 能够例高，更小卵 泡的发育程度能够 低。图2 卵母细胞卵丘细胞复合物采集 表示图. 生理盐水配方：

3、NaCl 18g，Mill-Q或三蒸水2l， 青霉素2,000,000IU，链霉素2g。3镜检卵母细胞卵丘复合物：用吸管汲取经静置 后试管底部的混合物于平皿中，用吸管铺平，在实体显微镜下用吸管检出卵母细胞卵丘复合物，置于另一平皿中，用洗涤液在实体显微镜下洗涤2次，在洗涤过程中要剔除不合格的卵母细胞卵丘复合物。选择合格的卵母细胞卵丘复合物非常重要，否那么将降低卵母细胞的成熟比例。卵母细胞卵丘复合物分类规范 a、分类根据：卵母细胞的直径、外形、质地的均匀度、色泽；透明带的完好性；卵丘细胞围绕卵母细胞的完好性、数量、分散程度、色泽。 普通分为4级，1、2级为合格；3、4级为不合格。. 一级：卵母细胞

4、：直径120m，圆形，质地均匀。 卵丘细胞：包围卵母细胞数层、严密、完好， 质地均匀。二级：卵母细胞：直径120m，圆形，质地均匀。 卵丘细胞：包围卵母细胞数层、严密，但不完 整，质地均匀。三级：卵母细胞：直径太大或太小，椭圆形，质地均 匀。 卵丘细胞：包围卵母细胞单层或无、不严密、 不完好，质地均匀。四级：卵母细胞：直径太大或太小，椭圆形，质地不 均匀。 卵丘细胞：包围卵母细胞单层或无、不严密、 不完好，质地不均匀。. 4卵母细胞卵丘复合物体外成熟 体外成熟大多采取液滴或试管培育。液滴培育的 优点是培育液不蒸发，浸透压稳定，缺陷是培育液中 的脂溶性物质能溶于覆盖的石蜡油；试管培育的缺陷是培育

5、液容易蒸发而致浸透压提高。普通来说，采用液滴培育普遍，因此，这里引见液滴培育。a、制造体外成熟培育液滴 在一次性利用的平皿36cm中，用加样器整 齐、小心地参与液滴大多采用50l液滴，然后用 石蜡油覆盖，在CO2培育箱中平衡2小时图3。b、培育 牛：在平衡后的每个液滴中用吸管参与510个卵母细胞卵丘复合物， 39 C 、5 CO2、潮湿环境中培育24小时，卵母细胞成熟，细胞核到达第二次减数分裂。. 猪：在平衡后的每个液滴 中用吸管参与 510 个卵 母细胞卵丘复合物，在 39 C 、5 CO2、潮湿环 境中培育4048小时，卵 母细胞成熟，细胞核到达 第二次减数分裂。 c、 成熟卵母细胞的检查

6、 外观检查：卵母细胞在成熟过程中，卵丘细胞分散，因此，卵丘细胞分散，阐明卵母细胞能够成熟图4。 卵母细胞核成熟：在卵母 图3 液滴表示图. 细胞成熟过程中，卵母细胞启动第一次减数分裂，根据其核型进展鉴定。在成熟过程中，核型可分为核膜期、染色质浓缩期、核膜消逝期、第一次减数分裂中期、第一次减数分裂后期、第二次减数分裂中期。各期特点如下图5： 核膜期：经染色后可见完好的核膜。 染色质浓缩期：染色质染色很深、均一，此为卵 母细胞曾经启动第一次减数分裂。 核膜消逝期：核膜从断续到完全消逝。 第一次减数分裂中期：染色体分为两组。此时标 志着卵母细胞核曾经成熟。 第二次减数分裂中期：染色体分为两组，可见第 一极体。 卵母细胞质成熟：细胞质成熟较难鉴定，因此，通常 只检查细胞核的成熟。. 卵母细胞核染色图6 制片：压片。 固定：固定液 乙醇：乙酸3：1，24h 染色：1地衣红，40乙酸 镜检：光学显微镜.图6 制片、固定、染色 表示图. 液体制备. 二、精子体外获能1、牛冷冻精液：Swimming-up2、