第四章第一节染菌的防止

1、第四章第四章 发酵工业的无菌技术发酵工业的无菌技术思考题思考题1 1、染菌对发酵有什么危害，哪些原因会引起、染菌对发酵有什么危害，哪些原因会引起染菌？染菌以后应采取什么措施？染菌？染菌以后应采取什么措施？ 2、简述好氧发酵时无菌空气制备的工艺流、简述好氧发酵时无菌空气制备的工艺流程与要求。程与要求。什么是染菌？什么是染菌？发酵过程中除了生产菌以外，还有其它菌生长发酵过程中除了生产菌以外，还有其它菌生长繁殖。繁殖。一、发酵工业的无菌处理一、发酵工业的无菌处理 灭菌灭菌（sterilizationsterilization）是指用物理或化学）是指用物理或化学方法杀灭或去除物料或设备中一切有生命物方

2、法杀灭或去除物料或设备中一切有生命物质的过程。质的过程。灭菌实质上可分杀菌和溶菌两种，前者指灭菌实质上可分杀菌和溶菌两种，前者指菌体虽死，但形体尚存，后者则指菌体杀死菌体虽死，但形体尚存，后者则指菌体杀死后，其细胞发生溶化、消失的现象后，其细胞发生溶化、消失的现象 。消毒消毒（disinfectiondisinfection）是指用化学或物理）是指用化学或物理的方法杀灭或去除病原微生物的过程，它一的方法杀灭或去除病原微生物的过程，它一般只能杀死营养细胞而不能杀灭细菌芽孢。般只能杀死营养细胞而不能杀灭细菌芽孢。消毒是一种采用较温和的理化因素，仅杀消毒是一种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内

3、部一部分对人体有害的病原死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。除菌除菌（degermingdegerming）是用过滤方法除去空气）是用过滤方法除去空气或液体中的微生物及其孢子或液体中的微生物及其孢子 。防腐防腐（antisepsisantisepsis）就是利用某种理化因）就是利用某种理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，从而达素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，从而达到防止食品等发生霉腐的措施。到防止食品等发生霉腐的措施。如低温、缺氧、干燥、高渗、添加防腐剂等。消毒与灭菌的区别消毒与灭菌的区别消毒与灭菌在发酵工业中的应用消

4、毒与灭菌在发酵工业中的应用二、发酵工业污染的防治策略二、发酵工业污染的防治策略（一）（一）污染的危害污染的危害（二）（二）污染的防治污染的防治 1.1.染菌的不良后果染菌的不良后果 （1 1）使发酵培养基因杂菌的消耗而损失，造成生产能力）使发酵培养基因杂菌的消耗而损失，造成生产能力下降直至倒罐，造成巨大经济损失下降直至倒罐，造成巨大经济损失（2 2）由于杂菌的污染，对产物提取和产品质量造成严重）由于杂菌的污染，对产物提取和产品质量造成严重的影响，如产物收率降低或产品质量下降。的影响，如产物收率降低或产品质量下降。（3 3）杂菌的代谢改变原反应体系的）杂菌的代谢改变原反应体系的PHPH，使发酵发

5、生异常，使发酵发生异常变化，变化，（4 4）杂菌分解产物，使生产失败。）杂菌分解产物，使生产失败。（5 5）细菌发生噬菌体感染，细菌细胞被裂解，导致整个）细菌发生噬菌体感染，细菌细胞被裂解，导致整个发酵生产的失败。发酵生产的失败。2、染菌危害的具体分析染菌危害的具体分析（1 1）染菌对不同菌种发酵的影响）染菌对不同菌种发酵的影响A细菌细菌v谷氨酸：发酵周期短，培养基不太丰富，较谷氨酸：发酵周期短，培养基不太丰富，较少染杂菌，但噬菌体威胁大。少染杂菌，但噬菌体威胁大。v肌苷：缺陷型生产菌，培养基丰富，易染菌肌苷：缺陷型生产菌，培养基丰富，易染菌，营养成分迅速被消耗，严重抑制菌生长和，营养成分迅速

6、被消耗，严重抑制菌生长和合成代谢产物。合成代谢产物。B. 霉菌霉菌vPenG：青霉素水解酶上升，：青霉素水解酶上升，PenG迅速破坏，迅速破坏，发酵一无所获。发酵一无所获。v柠檬酸：柠檬酸：pH2.0，不易染菌，主要防止前期染，不易染菌，主要防止前期染菌。菌。C. 酵母菌酵母菌: 易污染细菌以及野生酵母菌易污染细菌以及野生酵母菌 D. 疫苗：疫苗：无论污染的是活菌、死菌或内外毒素，无论污染的是活菌、死菌或内外毒素，都应全部废弃。都应全部废弃。（1）染菌对不同菌种发酵的影响染菌对不同菌种发酵的影响（2）染菌种类对发酵的影响染菌种类对发酵的影响v青霉素：怕染细短产气杆菌青霉素：怕染细短产气杆菌v链

7、霉素：怕染细短杆菌、假单孢杆菌和产气杆菌链霉素：怕染细短杆菌、假单孢杆菌和产气杆菌v四环素：怕染双球菌、芽孢杆菌和荚膜杆菌四环素：怕染双球菌、芽孢杆菌和荚膜杆菌v柠檬酸：怕染青霉菌柠檬酸：怕染青霉菌v肌苷（酸）：怕染芽孢杆菌肌苷（酸）：怕染芽孢杆菌v谷氨酸：怕染噬菌体，易造成连续污染谷氨酸：怕染噬菌体，易造成连续污染v污染噬菌体污染噬菌体 噬菌体的感染力强，传播蔓延迅速，噬菌体的感染力强，传播蔓延迅速，也较防治，故危害极大。也较防治，故危害极大。 污染噬菌体后，可使发酵产量大幅度污染噬菌体后，可使发酵产量大幅度下降，严重的造成断种，被迫停产下降，严重的造成断种，被迫停产。 污染其它杂菌污染其它

8、杂菌 有些杂菌会使生产菌自溶产生大量泡沫，有些杂菌会使生产菌自溶产生大量泡沫，即使添加消泡剂也无法控制逃液，影响发酵即使添加消泡剂也无法控制逃液，影响发酵过程的通气搅拌。过程的通气搅拌。 有的杂菌会使发酵液发臭、发酸，致使有的杂菌会使发酵液发臭、发酸，致使pH下降，使不耐酸的产品破坏。下降，使不耐酸的产品破坏。 芽孢杆菌耐热，不易杀死。芽孢杆菌耐热，不易杀死。 由于接种量较小，生产菌生长一开始不占优势，而且容易污染杂菌。如如在此阶段染菌，应将培养液全部废弃。在此阶段染菌，应将培养液全部废弃。（3 3）、不同）、不同染菌对发酵的影响染菌对发酵的影响种子扩大培养期染菌种子扩大培养期染菌发酵前期染菌

9、发酵前期染菌发酵前期最易染菌。发酵前期最易染菌。原因原因 ： 发酵前期菌量不很多，发酵前期菌量不很多，与杂菌没有竞争优与杂菌没有竞争优势势；且还未合成产物（抗生素）或产生很少，且还未合成产物（抗生素）或产生很少，抵御杂抵御杂菌能力弱。菌能力弱。在这个时期要特别警惕以防止染菌的发生。在这个时期要特别警惕以防止染菌的发生。措施：措施： 可以用降低培养温度，调整补料量，用酸可以用降低培养温度，调整补料量，用酸碱调碱调pH值，缩短培养周期等措施予以补救。如果前值，缩短培养周期等措施予以补救。如果前期染菌，且培养基养料消耗不多，可以重新灭菌，补期染菌，且培养基养料消耗不多，可以重新灭菌，补加一些营养，重

10、新接种再用。加一些营养，重新接种再用。处理方法应根据各种发酵的特点和具体情况来决定。 发酵中期染菌发酵中期染菌 原因：发酵中期染菌会严重干扰产生菌的代谢。杂原因：发酵中期染菌会严重干扰产生菌的代谢。杂菌大量产酸，培养液菌大量产酸，培养液pHpH下降；糖、氮消耗快，发酵液下降；糖、氮消耗快，发酵液发粘，菌丝自溶，产物分泌减少或停止，有时甚至会发粘，菌丝自溶，产物分泌减少或停止，有时甚至会使已产生的产物分解。有时也会使发酵液发臭，产生使已产生的产物分解。有时也会使发酵液发臭，产生大量泡沫。大量泡沫。措施：措施： 降温培养，减少补料，密切注意代谢变化情降温培养，减少补料，密切注意代谢变化情况。如果发

11、酵单位到达一定水平可以提前放罐，或者况。如果发酵单位到达一定水平可以提前放罐，或者抗生素生产中可以将高单位的发酵液输送一部分到染抗生素生产中可以将高单位的发酵液输送一部分到染菌罐，抑制杂菌。菌罐，抑制杂菌。发酵后期染菌发酵后期染菌发酵后期发酵液内已积累大量的产物，特发酵后期发酵液内已积累大量的产物，特别是抗生素，对杂菌有一定的抑制或杀灭能别是抗生素，对杂菌有一定的抑制或杀灭能力。因此如果染菌不多，对生产影响不大。力。因此如果染菌不多，对生产影响不大。如果染菌严重，又破坏性较大，可以提前放如果染菌严重，又破坏性较大，可以提前放罐。罐。1 1）发酵染菌对过滤的影响）发酵染菌对过滤的影响染菌的发酵液

12、一般染菌的发酵液一般发粘发粘，菌体大多数自溶，菌体大多数自溶，所以在发酵液过滤时不能或很难形成滤饼，导所以在发酵液过滤时不能或很难形成滤饼，导致致过滤困难过滤困难。污染杂菌的种类对过滤的影响程度有差异污染杂菌的种类对过滤的影响程度有差异如污染霉菌时，影响较小，而污染细菌时很难如污染霉菌时，影响较小，而污染细菌时很难过滤。由于过滤困难，过滤时间拉长，过滤。由于过滤困难，过滤时间拉长，影响发影响发酵液储罐和过滤设备的周转使用酵液储罐和过滤设备的周转使用，破坏了生产破坏了生产平衡。平衡。染菌发酵液还会因过滤困难而染菌发酵液还会因过滤困难而大幅度降低过滤大幅度降低过滤收率，收率，直接影响提取总收率。直

13、接影响提取总收率。2）发酵染菌对提取的影响）发酵染菌对提取的影响染菌发酵液中含有比正常发酵液更多的水溶性蛋白染菌发酵液中含有比正常发酵液更多的水溶性蛋白和其它杂质。和其它杂质。如果采用有机溶剂萃取的提炼工艺，则极易发生乳如果采用有机溶剂萃取的提炼工艺，则极易发生乳化，很难使水相和溶剂相分离，影响进一步提纯。化，很难使水相和溶剂相分离，影响进一步提纯。如果采用直接用离子交换树脂的提取工艺，如链霉如果采用直接用离子交换树脂的提取工艺，如链霉素、庆大霉素，染菌后大量杂菌黏附在离子交换树脂素、庆大霉素，染菌后大量杂菌黏附在离子交换树脂表面，或被离子交换树脂吸附，大大降低离子交换树表面，或被离子交换树脂

14、吸附，大大降低离子交换树脂的交换容量，而且有的杂菌很难用水冲洗干净，洗脂的交换容量，而且有的杂菌很难用水冲洗干净，洗脱时与产物一起进入洗脱液，影响进一步提纯。脱时与产物一起进入洗脱液，影响进一步提纯。v如果丝状菌发酵被产酸菌污染：如果丝状菌发酵被产酸菌污染：则则pH不断下降不断下降，菌丝大量自溶，发酵液粘度增加，过滤困难。，菌丝大量自溶，发酵液粘度增加，过滤困难。v 处理方法：将发酵液加热后再加助滤剂；先加絮处理方法：将发酵液加热后再加助滤剂；先加絮凝剂使蛋白质凝聚后沉淀。凝剂使蛋白质凝聚后沉淀。v杂菌分泌较多蛋白质杂质时，对发酵后处理过程中采杂菌分泌较多蛋白质杂质时，对发酵后处理过程中采用溶

15、媒萃取的提取工艺非常不利，使水相和溶媒之间用溶媒萃取的提取工艺非常不利，使水相和溶媒之间极易发生乳化极易发生乳化 （二）杂菌污染的防治（二）杂菌污染的防治1. 染菌的检查与判断染菌的检查与判断染菌的检查方法：染菌的检查方法：v显微镜检查法显微镜检查法 镜检出杂菌需要一定时间镜检出杂菌需要一定时间v平板划线培养或斜面培养检查法平板划线培养或斜面培养检查法：菌落：菌落 噬菌体检查可采用双层平板法：噬菌斑噬菌体检查可采用双层平板法：噬菌斑v肉汤培养检查法肉汤培养检查法 v发酵过程的异常现象判断：发酵过程的异常现象判断：v溶解氧、溶解氧、pHpH、尾气中的、尾气中的COCO2 2含量、发酵液黏度含量、

16、发酵液黏度、颜色等的异常变化，都可能是发生染菌的、颜色等的异常变化，都可能是发生染菌的重要信息。重要信息。v溶解氧水平的异常变化溶解氧水平的异常变化vpH异常变化异常变化12v尾气中尾气中CO2含量异常含量异常2、污染原因分析、污染原因分析 v主要原因：主要原因： 种子带菌种子带菌 无菌空气带菌无菌空气带菌 设备渗漏设备渗漏 灭菌不彻底灭菌不彻底 操作失误操作失误 技术管理不善技术管理不善v 染菌原因染菌原因 染菌百分率染菌百分率%种子带菌或怀疑种子带菌种子带菌或怀疑种子带菌 9.64接种时罐压跌零接种时罐压跌零 0.19培养基灭菌不透培养基灭菌不透 0.79总空气系统有菌总空气系统有菌 19

17、.96泡沫冒顶泡沫冒顶 0.48夹套穿孔夹套穿孔 12.36盘管穿孔盘管穿孔 5.89接种管穿孔接种管穿孔 0.39阀门渗漏阀门渗漏 1.45搅拌轴密封渗漏搅拌轴密封渗漏 2.09罐盖漏罐盖漏 1.54其它设备渗漏其它设备渗漏 10.13操作原因操作原因 10.15 原因不明原因不明 24.94日本工业技术院发酵研究所多年来抗生素发酵染菌原因分析日本工业技术院发酵研究所多年来抗生素发酵染菌原因分析上海第三制药厂染菌原因分析上海第三制药厂染菌原因分析 染菌原因染菌原因 染菌百分率染菌百分率%种子带菌种子带菌 14.15盘管穿孔盘管穿孔 14.20阀门渗漏阀门渗漏 23.30空气系统有菌空气系统有

18、菌 10.0管理不善管理不善 25.80其它其它 7.49原因不明原因不明 5.78 管理不善而染菌管理不善而染菌，经分析有下表所列原因：，经分析有下表所列原因： 染菌原因染菌原因 染菌百分率染菌百分率%进罐前未做设备严密度检查进罐前未做设备严密度检查 25.8接种违反操作规程接种违反操作规程 25.8检修质量缺乏验收制度检修质量缺乏验收制度 19.35操作不熟练操作不熟练 19.35配料违反工艺规程配料违反工艺规程 6.45调度不当调度不当 3.25耐热芽孢杆菌：耐热芽孢杆菌：灭菌不彻底；灭菌不彻底；球菌或无芽孢杆菌：球菌或无芽孢杆菌：种子染菌、设备渗种子染菌、设备渗漏、漏、无菌空气带菌无菌

19、空气带菌 、操作失误、操作失误；浅绿色杂菌：浅绿色杂菌：冷水管渗漏；冷水管渗漏；霉菌：霉菌：灭菌不彻底或操作问题；灭菌不彻底或操作问题；酵母菌：酵母菌：糖液灭菌不彻底或放置时间较糖液灭菌不彻底或放置时间较长长 种子带菌、培养基灭菌和设备灭菌不彻底、种子带菌、培养基灭菌和设备灭菌不彻底、设备或管道有死角。设备或管道有死角。补料的料液灭菌不彻底或补料管道、阀门渗补料的料液灭菌不彻底或补料管道、阀门渗漏，漏，操作不合理，操作不合理，一般不会是种子问题。一般不会是种子问题。数个发酵罐感染相同杂菌：数个发酵罐感染相同杂菌：空气系统；空气系统；个别罐连续感染杂菌：个别罐连续感染杂菌：设备问题；设备问题；不

20、是系统问题，而是该罐本身的问题。不是系统问题，而是该罐本身的问题。如如种子带种子带菌、培养基灭菌不彻底、罐有渗漏、分过滤器失菌、培养基灭菌不彻底、罐有渗漏、分过滤器失效。效。个别发酵罐连续染菌个别发酵罐连续染菌：设备问题设备问题(如阀门的渗漏或如阀门的渗漏或罐体腐蚀磨损罐体腐蚀磨损)，设备的腐蚀磨损所引起的染菌会，设备的腐蚀磨损所引起的染菌会出现每批发酵的染菌时间向前推移的现象。出现每批发酵的染菌时间向前推移的现象。个别发酵罐偶然染菌：个别发酵罐偶然染菌：原因比较复杂，因为各种原因比较复杂，因为各种染菌途径都可能引起。染菌途径都可能引起。 v系统问题，系统问题，如空气过滤系统有问题，特别是总如

21、空气过滤系统有问题，特别是总过滤器长期没有检查，可能受潮失效；移种或过滤器长期没有检查，可能受潮失效；移种或补料的分配站有渗漏或灭菌不彻底等。补料的分配站有渗漏或灭菌不彻底等。 如果发酵罐偶而染菌，原因一时找不出时一如果发酵罐偶而染菌，原因一时找不出时一般可以采取以下措施：般可以采取以下措施：(1)(1)连续灭菌系统前的连续灭菌系统前的料液贮罐料液贮罐在每年在每年4 4一一1010月份月份( (杂菌较旺盛生长的时间杂菌较旺盛生长的时间) )加入加入0.2%0.2%甲醛，加热至甲醛，加热至8080C C，存放处理，存放处理4 4小时小时 。(2)(2)对染菌的罐，在培养液灭菌前先对染菌的罐，在培

22、养液灭菌前先加甲醛进行空加甲醛进行空消处理消处理。甲醛用量每立方米罐的体积。甲醛用量每立方米罐的体积70.17升。升。(3)(3)对染菌的种子罐可对染菌的种子罐可在罐内放水在罐内放水进行灭菌，灭菌进行灭菌，灭菌后水量占罐体的三分之二以上。这是因为细菌后水量占罐体的三分之二以上。这是因为细菌芽孢较耐干热而不耐湿热的缘故。芽孢较耐干热而不耐湿热的缘故。 3、杂菌污染的途径及其预防、杂菌污染的途径及其预防（1）种子带菌及其防治）种子带菌及其防治 种子带菌的原因：种子带菌的原因：灭菌不彻底灭菌不彻底(如假压如假压)；移种污染；移种污染；培养或保藏过程中污染；培养或保藏过程中污染；

23、无菌室管理不善；无菌室管理不善； 防止种子带菌措施：防止种子带菌措施：制备种子时对沙土管及摇瓶严格加以控制。制备种子时对沙土管及摇瓶严格加以控制。沙土制备时要多次间歇灭菌沙土制备时要多次间歇灭菌注意接种时的无菌操作注意接种时的无菌操作子瓶、母瓶的移种和培养子瓶、母瓶的移种和培养无菌室和摇床间都要保持清洁。无菌室内要无菌室和摇床间都要保持清洁。无菌室内要供给恒温恒湿的无菌空气，还要装紫外灯用以供给恒温恒湿的无菌空气，还要装紫外灯用以灭菌，或用化学药品灭菌。灭菌，或用化学药品灭菌。无菌室结构要求无菌室结构要求v无菌室面积不宜过大，一般约无菌室面积不宜过大，一般约4 46 6米米2 2，高约，高约2

24、 26 6米。米。 v为了减少外界空气的侵入，无菌室要有为了减少外界空气的侵入，无菌室要有1 13 3个套间个套间( (缓冲过缓冲过道道) ) v无菌室内部的墙壁、天花板要涂白漆或采用磨光石子，要求无菌室内部的墙壁、天花板要涂白漆或采用磨光石子，要求无裂缝，墙角最好做成圆弧形无裂缝，墙角最好做成圆弧形 。v室内布置应尽量简单，最好能安装空气调节装置，通入无菌室内布置应尽量简单，最好能安装空气调节装置，通入无菌空气并调节室内的温湿度。空气并调节室内的温湿度。 v无菌室的每个套间一般都用无菌室的每个套间一般都用紫外线灭菌紫外线灭菌。无菌室接种要求无菌室接种要求v 打开紫外灯，照半小时，关灯后打开紫

25、外灯，照半小时，关灯后15分钟再接种。分钟再接种。v 消毒药水擦桌子、拖地，开启超净台的通风，消毒药水擦桌子、拖地，开启超净台的通风，v 接种时必须在超净台上操作，保证无菌条件。接种时必须在超净台上操作，保证无菌条件。v 接种人员必须穿好无菌服，戴好口罩，手用酒精接种人员必须穿好无菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干净。棉球擦干净。（2）过滤空气带菌及其防治）过滤空气带菌及其防治 无菌空气引起染菌的原因：无菌空气引起染菌的原因：l流程或设备设计的合理性；流程或设备设计的合理性；l过虑介质选用、装填；过虑介质选用、装填；l过虑介质的灭菌和管理；过虑介质的灭菌和管理；l空气除菌系统复杂，环节多，偶遇不

26、慎便会导致空气除菌系统复杂，环节多，偶遇不慎便会导致空气除菌失败。空气除菌失败。空气冷却器的列管穿孔泄露，冷却水会渗入到空空气冷却器的列管穿孔泄露，冷却水会渗入到空气中，造成染菌。气中，造成染菌。棉花棉花- -活性炭过滤器长期使用后变薄的一边失效。活性炭过滤器长期使用后变薄的一边失效。过滤介质受潮失效：过滤器灭菌完毕应立即缓慢过滤介质受潮失效：过滤器灭菌完毕应立即缓慢通入压缩空气，将水分吹干。超细纤维纸作过滤介通入压缩空气，将水分吹干。超细纤维纸作过滤介质，灭菌时必须将管道中冷凝水放干净，以免介质质，灭菌时必须将管道中冷凝水放干净，以免介质受潮失效。受潮失效。 在生产实践中，空气管道大多与其它

27、物料管道在生产实践中，空气管道大多与其它物料管道相接，要装上止逆阀防止其它物料窜入空气管道污相接，要装上止逆阀防止其它物料窜入空气管道污染过滤器，导致过滤介质失效染过滤器，导致过滤介质失效。（3）设备的渗漏或）设备的渗漏或“死角死角”造成的染菌及其防治造成的染菌及其防治发酵罐的发酵罐的“死角死角”v法兰、内衬、接口、表头、罐内部件及其支撑件如搅拌法兰、内衬、接口、表头、罐内部件及其支撑件如搅拌轴拉杆、联轴器、冷却盘管、挡板、空气分布管及其支轴拉杆、联轴器、冷却盘管、挡板、空气分布管及其支撑件。撑件。 口：人孔（或手孔）、排风管接口、灯孔、视镜口、进口：人孔（或手孔）、排风管接口、灯孔、视镜口、

28、进料管口料管口 。http:/ 消除方法：加强清洗并定期铲除污垢；消除方法：加强清洗并定期铲除污垢；管道安装不当或配置不合理管道安装不当或配置不合理形成的形成的“死角死角”安装放汽边阀安装放汽边阀 v消灭死角的措施消灭死角的措施减少挡板和开孔；减少挡板和开孔；焊接光滑；焊接光滑；法兰、阀门连接正好；法兰、阀门连接正好；减少残渣沉积；减少残渣沉积；严格清洗和检查；严格清洗和检查；定期检修易坏部件定期检修易坏部件化学腐蚀化学腐蚀电化学腐蚀电化学腐蚀磨蚀磨蚀设备加工不良设备加工不良防止设备渗漏：防止设备渗漏： 包括夹套穿孔、盘管穿孔、接种管穿孔、阀门包括夹套穿孔、盘管穿孔、接种管穿孔、阀门渗漏、搅拌

29、轴渗漏、罐盖漏和其它设备漏等。渗漏、搅拌轴渗漏、罐盖漏和其它设备漏等。v防止设备渗漏防止设备渗漏肉眼可见肉眼可见冷却盘管、夹套穿孔、阀门渗漏冷却盘管、夹套穿孔、阀门渗漏肉眼不可见肉眼不可见试漏试漏 水压试漏法水压试漏法 集气桶试漏集气桶试漏（4 4）培养基灭菌不彻底导致染菌及其防治）培养基灭菌不彻底导致染菌及其防治培养基灭菌不彻底原因：培养基灭菌不彻底原因：v原料性状：原料性状：v假压假压“冷压冷压”的形成；的形成；v灭菌时培养基产生泡沫灭菌时培养基产生泡沫v连续灭菌时参数不稳定连续灭菌时参数不稳定时间维时间维持不够或压力波动较大；持不够或压力波动较大；v灭菌后期的罐压骤变灭菌后期的罐压骤变“

30、负压负压”；v设备死角。设备死角。 v防治方法：防治方法：原料性状：大颗粒的原料过筛除去。原料性状：大颗粒的原料过筛除去。 实罐灭菌时要充分排除罐内冷空气实罐灭菌时要充分排除罐内冷空气。为什么蒸汽灭菌时会产生大量泡沫呢？为什么蒸汽灭菌时会产生大量泡沫呢？ 培养基和水的传热系数比空气的传热系数大，培养基和水的传热系数比空气的传热系数大，如果灭菌时升温太快，培养基急剧膨胀，发酵罐如果灭菌时升温太快，培养基急剧膨胀，发酵罐内的空气排出较慢，就会产生大量泡沫，泡沫上内的空气排出较慢，就会产生大量泡沫，泡沫上升到发酵罐顶，泡沫中的耐热菌就不能与蒸汽直升到发酵罐顶，泡沫中的耐热菌就不能与蒸汽直接接触，未被

31、杀死。接接触，未被杀死。防止方法：缓慢开启蒸汽阀门，或加入消泡剂防止方法：缓慢开启蒸汽阀门，或加入消泡剂连消不彻底连消不彻底 ：最好采用自动控制装置：最好采用自动控制装置 灭菌后期罐压骤变灭菌后期罐压骤变 ：通无菌空气维持正压：通无菌空气维持正压死角死角 ：（5 5）加强操作和卫生管理）加强操作和卫生管理 v严格操作规程、保持环境干净。严格操作规程、保持环境干净。v提高操作人员素质提高操作人员素质v温度压力的维持温度压力的维持v培养基、传感器培养基、传感器（6 6） 噬菌体污染及其防治措施噬菌体污染及其防治措施v染噬菌体对发酵的影响染噬菌体对发酵的影响v产生噬菌体的原因：自然界中的噬菌体在活菌产生噬菌体的原因：自然界中的噬菌体在活菌体中大量生长。随着风