土壤中分解尿素的细菌的分离与计数53349PPT学习教案

1、会计学1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数53349细菌脲酶细菌脲酶一、课题背景一、课题背景第1页/共25页二、研究思路 第2页/共25页选择培养基选择培养基第3页/共25页第4页/共25页 例：两位同学用稀释涂布平板法测定同例：两位同学用稀释涂布平板法测定同 一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为10106 6的培养基中，得到以下两种统计结果。的培养基中，得到以下两种统计结果。 1 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为的菌落数为230230。 2 2、乙同学在该浓度下涂布了

2、、乙同学在该浓度下涂布了A A、B B、C C三个平板三个平板，统计的菌落数分别为，统计的菌落数分别为2121、212212、256256，该同学以这，该同学以这三个平板上菌落数的平均值三个平板上菌落数的平均值163163作为统计结果。作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？题，错在哪？ 甲：没有甲：没有重复实验重复实验（至少涂布（至少涂布3 3个平板）个平板） 乙：乙：A A组结果误差过大，不应用于计算平均值组结果误差过大，不应用于计算平均值第5页/共25页（二）统计菌落数目 1、活菌计数法 （4）统计结果：统计的菌落数往往比活

3、菌的实际数目低，因此统计结果一般用菌落数表示。 每克样品中的菌株数=（C/V)* M C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数； V:所用稀释液的体积；M:稀释倍数。2、显微镜直接计数第6页/共25页第7页/共25页 利用选择培养基进行尿素分解菌的分离利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为过程中，从对应稀释倍数为10106 6的培养基中，的培养基中，A A、B B两同学分别得到以下两种统计结果。两同学分别得到以下两种统计结果。 1 1、A A同学筛选出同学筛选出150150个菌落。个菌落。 2 2、B B同学筛选出同学筛选出5050个菌落。个菌落。 B B认为认为A A的培养

4、基被杂菌污染了，或培养基的培养基被杂菌污染了，或培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。素的细菌也能在该培养基中生长。A A确认自己确认自己的操作无误，但也拿不出能令人信服的证据。的操作无误，但也拿不出能令人信服的证据。 请你帮助请你帮助A A同学改进实验，提供具有说明同学改进实验，提供具有说明了的证据。了的证据。 设置对照设置对照同等条件下，培养空白培养基同等条件下，培养空白培养基第8页/共25页四、实验过程 （一）土壤取样 1、天然培养基和合成培养基： 2、土壤取样： （1）取样的位置： 土壤，天然培养基，含有大量

5、的微生物，其中70 90是细菌。在富含有机质的土壤层的3 8cm处中分布着绝大多数的细菌。 （2）取样要求：铲去表层土。 菌落计数菌落计数配制土壤溶配制土壤溶液液系列稀释系列稀释涂布平板与涂布平板与培养培养第9页/共25页第10页/共25页（四）鉴定：筛选后必鉴定鉴别培养基：不影响微生物的生存 酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨培养基碱性增强 酚红变红脲酶阳性第11页/共25页(1)作样品系列稀释液作样品系列稀释液 (2)用适当的稀释液涂布平板用适当的稀释液涂布平板第12页/共25页 在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培

6、养时间），同种微生物表现出相同而稳定的菌落培养时间），同种微生物表现出相同而稳定的菌落特征。特征。第13页/共25页 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 第14页/共25页 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 第15页/共25页 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 第16页/共25页第17页/共25页1.使用选择培养基的目的是（ ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分

7、别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素CD第18页/共25页4.下列说法不正确的是（ ） A.科学家从7080度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐BC第19页/共25

8、页(2016四川卷) 图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。（1）图中选择培养基应以 为唯一氮源；鉴别培养基还需添加 作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成 色。尿素尿素酚红酚红红红第20页/共25页(2016四川卷) 图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105 的土壤样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。 该过程采取的接种方法是 ，每克土壤样品中的细菌数量为 108个；与血细胞计

9、数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较 。稀释涂布平板法稀释涂布平板法1.75 少 第21页/共25页(2016四川卷) 图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。 （3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码（终止密码有UAG、UGA和UAA）。突变基因转录的mRNA中，终止密码为 ，突变基因表达的蛋白质含 个氨基酸。UGA115第22页/共25页 空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：配置培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）;制作无菌平板；设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作； 将各组平板置于37恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。 回答下列问题:（1）该培养基中微生物所需的氮来源于_。若要完成步骤，该培养基中的成分X通常是_。（2）步骤中，实验组的操作是_ 。牛肉膏、蛋白胨琼脂 将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间 （3）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出