125农药残留量测定法标准操作规程

1、文件名称农药残留量测定法标准操作规程编号：#制定人审核人批准人制定日期审核日期批准日期颁发部门质颁发日期生效日期分发部门制作份数修订号修订日期版本号00目 的：制定农药残留量测定法的检验标准，使检验有据可依。范 围：本公司药材农药残留量的测定。责任人：质检中心负责人及检验员。依 据：中国药典2010年版一部。内容：1本法系用气相色谱法测定药材、饮片及制剂中部分有机氯、有机磷和拟除虫菊酯 类农药，除另有规定外，按下列方法测定。2有机氯类农药残留量测定2.1 仪器与用具：2.1.1 气相色谱仪带 有63Ni-ECD电子捕获检测器，载气为高纯氮（纯度99.9999%）, 必须安装脱氧管（购自）。2.

2、1.2 超声仪。2.1.3 离心机。2.1.4 旋转蒸储发仪。2.1.5 色谱柱：SE-54或DB-1701弹性石英毛细管柱（30mX0. 32mmX 0. 25仙m）2.1.6 具塞刻度离心管00 mI）,刻度浓缩瓶，具塞锥形瓶100ml）,移液管等。2.2 试药与试液1.1.1 丙酮、石油醴（6090C）和二氯甲烷均为分析纯，且全部经过全玻璃蒸储储装 置重蒸储储，经气相色谱法确认，符合农残检测的要求。（有条件的实验室可使用进口的农残级的试剂）1.1.2 无水硫酸钠钠和氯化钠均为分析纯，硫酸钠为优级纯。1.1.3 农药对照品：六六六（BHC）包括a-BHC, 0-BHC , 丫-BHC和6-

3、BHC四 种异构体,滴滴涕（DDT）包括pp-DDE, pp-DDD , op-DDT和pp-DDT四种异构体 及五氯硝基苯（PCNB）,由中国计量科学研究院提供标示含量（浓度）的农药标准品，也 可采用国际认可的农药标准品自行配制。2.3 色谱条件与系统适用性试验文件名称农药残留量测定法标准操作规程编号：#2.3.1 SE-54色谱柱：进样口温度：230C。检测器温度：300C ,不分流进样。程序 升温：初始温度100C,每分钟10c升至220C ,再以每分钟8c升至250C ,保持10min。2.3.2 DB-1701色谱柱：进样口温度：220C,检测器温度：300C ,不分流进样。程 序升

4、温：初始温度140C,彳持lmin,以每分钟10c升至210C,再以每分钟20c升至 260 C ,保持 4min。按上述条件操作，理论板数以a - BHC峰计算应不低于1 X106,两个相邻色谱峰的 分离度应大于1.5。2.4 操作方法2.4.1 对照品储备液的制备 精密称取六六六（BHC） a-BHC , B-BHC , 丫-BHC和 6-BHC、滴滴涕（DDT）PP-DDE , PP-DDD, OP-DDT, PP-DDT及五氯硝基苯（PCNB） 农药对照品溶液适量，用石油醴（6090C）分别制成每1ml含45用 的溶液。2.4.2 制备精密量取上述各对照品储备液 0. 5ml,置10m

5、l量瓶中，用石油醴（6090C） 稀释至刻度，摇匀。2.4.3 混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品储备液，用石油醴（6090c）制成每1L分别含0/，1 g, 5g, 10g, 50卜g, 100卜g和250卜g的溶液。2.5.4供试品溶液制备2.5.4.1 方法1 （药材）取供试品于60c干燥4h,粉碎成细粉，取约2 g,精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，加水20 ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml,称定重量，超声 处理30min,放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6 g,精密加二氯甲烷30 ml,称定重量，超声处理15min,直至氯化铀完全溶解，再称定重量，用二

6、氯 甲烷补足减失的重量，静置使水相与有机相完全分层，将有机相迅速移入装有适量无水硫 酸钠钠的100 ml具塞锥形瓶中，脱水4h,精密量取35ml,置100 ml旋转蒸储发瓶中， 40C水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醴 （6090c）如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除 净，用石油醴（6090C）溶解并转移至10 ml具塞刻度离心管中，加石油醴（6090C）精密 稀释至5ml,小心加入硫酸钠1 ml,振摇1min,离心（3000r/min） 10min ,精密量取上精液 2ml,置刻度浓缩瓶中，连接旋转蒸储发器，40C下（或用氮气）将溶液浓缩至适量，精密稀释至1 ml,即得。同法制备空白样品。2.5

7、.4.2 方法2 （制剂）取供试品，研成细粉（蜜丸切碎，液体直接量取），精密称文件名称农药残留量测定法标准操作规程编号：#取适量（相当于药材2g）,以下按方法1,制备供试品溶液。2.6 测定法按上述色谱条件操作，分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的 混合对照品溶液各1口，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中 9 种有机氯农药残留量。2.7 注意事项2.7.1 本试验所用器皿应严格清洗（不能残存卤素离子）。2.7.2 供试品溶液制备时，有机相减压浓缩务必至近干，避免待测成分损失。2.7.3 3为防止假阳性结果，可选择不同极性的色谱柱进行验证，有条件的可采用气 质联用予以确认。

8、2.7.4 如样品中其它成分有干扰，可适当改变色谱条件也但需进行空白验证。3有机磷类农药残留量测定3.1 仪器与用具3.1.1 气相色谱仪，带有氮磷检测器（NPD）,载气为高纯氮（纯度99.9999%）。3.1.2 超声仪。3.1.3 旋转蒸储发仪。3.1.4 多功能真空样品处理器。3.1.5 活性炭小柱120400目，石墨碳填料 0.25g,内径0.9cm, 3ml）。3.1.6 氮吹仪（Organomation Associates Inc., N-EV AP TM 112 nitrogen evaporator）。3.1.7 色谱柱：DB-17MS或HP-5弹性石英毛细管柱（30mX0.

9、 25mmX 0.25 m）或类 似极性的毛细管柱。3.1.8 具塞锥形瓶、250ml平底烧瓶、棕色量瓶、移液管等。3.2 试药与试液3.2.1 无水硫酸钠为分析纯。3.2.2 乙酸乙醋、正己烷（农残级或分析纯试剂经过全玻璃蒸储装置重蒸储，经气相 色谱法确认，符合农残检测的要求）。3.2.3 2.3农药对照品：对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二 嗪农、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酷甲胺磷，由中国计量科学研究院及农业 部环境保护科研检测所提供，其纯度大于99%;也可以使用国际认可的、纯度要求等符合规定的进口标准物质。文件名称农药残留量测定法标准操作规程编号：#3.3

10、色谱条件与系统适用性试验 进样口温度：220C。检测器温度：300 C o不分 流进样。程序升温：初始120C,每分钟10c升至200C,每分钟5c升至240C,保持 2min,每分钟20c升至270C ,保持0.5min。理论板数按敌敌畏峰计算应不低于 6000, 两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。3.4 操作方法3.4.1 对照品储备液的制备 精密称取对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺 磷、久效磷、二嗪农、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷农药对照品适量， 用醋酸乙醋分别制成每1ml约含100仙g的溶液，即得。3.4.2 混合对照品储备液的制备精密量取上述各对照品储备液1

11、ml,置20ml棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得。3.4.3 混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品储备液，用乙酸乙酯制成每 1ml 分别含 0.1 pg、0. 5（i g、1pg、2pg、5仙 g 的溶液，即得。3.4.4 供试品溶液的制备药材取供试品粉末（过二号筛）约5g,精密称定，加无水硫酸钠5g,加入乙酸乙酯50100ml,冰浴超声处理3min,放置，取上层液滤过，药渣加乙 酸乙酯30 50ml,冰浴超声处理2min,放置，滤过，合并两次滤液，用少量乙酸乙酯洗 涤滤纸及残渣，与上述滤液合并。取滤液于40c下减压浓缩至近干，用乙酸乙酯转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，精密

12、量取1ml,置活性炭小柱l20400目,0.25g,内径0. 9cm, （如Supelclean ENVICarb SPE Tubes, 3ml活性炭小柱），用乙酸乙酯5ml预洗上，置多 功能真空样品处理器上，用正己烧一乙酸乙酯1: 1）的混合溶液5ml洗脱，收集洗脱液，置氮吹仪上浓缩至近干，精密加入乙酸乙酯1ml使溶解，即得。同法制备空白样品。3.5.5测定法按上述色谱条件操作，分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混 合对照品溶液各1仙1,分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中12种 有机磷农药残留量。3.6注意事项3.6.1 所用玻璃仪器不能用含磷洗涤剂洗涤， 应用洗液浸

13、泡洗涤，使用前用丙酮荡洗 并挥干溶剂。3.6.2 乙酸乙酯提取液减压浓缩时，水浴温度不能高于40C,且减压浓缩务必至近干，避免待测成分损失。3.6.3 为防止假阳性结果，可选择不同极性的色谱柱进行验证，有条件的可采用气质文件名称农药残留量测定法标准操作规程编号：#联用予以确认。3.6.4 本项方法的加样回收率应为 70%110%。3.6.5 如由于具体试验要求对本操作规程的色谱条件及操作步骤进行了修改，应在原始记录上予 以记录。4拟除虫菊酯类农药残留量测定4.1 仪器与用具4.1.1 气相色谱仪（如 PE-9000,Varian6000,Shimadzu GC-17A）,带有 63Ni-ECD

14、 电 子捕获检测器。载气为高纯氮，必须安装脱氧管。4.1.2 超声仪。4.1.3 离心机。4.1.4 旋转蒸发仪。4.1.5 色谱柱：SE-54或DB-5弹性石英毛细管柱（30mx 0.32mmX0.25仙m）。4.1.6 具塞锥形瓶、圆底烧瓶、量瓶、移液管等。4.2 试药与试液4.2.1 丙酮、石油醴（6090C）和乙醴均为分析纯，且全部经过全玻璃蒸储装置重 蒸储，经气相色谱法确认，符合农残检测的要求（有条件的实验室可使用进口的农残级的 试齐IJ）。4.2.2 无水硫酸钠、氧化铝（80100目）、微晶纤维素为分析纯。4.2.3 弗罗里硅士 （ Florisil 80-100 目，Supelc

15、o 公司）。4.2.4 农药对照品：氯秋菊酯，鼠戊菊酯，澳秋菊酯对照品（由中国计量科学研究院 提供），纯度大于98%。4.3 色谱条件与系统适用性试验进样口温度：270C,检测器温度：330C,分流或不分流进样，分流比：20: 1; 5: 1。程序升温：初始160C,彳持1min,每分钟10C 升至278C ,保持0.5min,每分钟1C升至290C ,保持5min。理论板数按澳氟菊酯峰计 算应不低于1X105,两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。注：操作中可根据样品实际情况，选择 1min后分流进样，初始50C （低于溶剂沸点 10C,以每分钟30c升至160C,彳持1min,以每分钟10c

16、升至278C ,保持0.5min, 再以每分钟1c升至290C , 持5min。4.4 操作方法文件名称农药残留量测定法标准操作规程编号：#4.4.1 对照品储备液的制备 精密称取氯秋菊酯、1K戊菊酯及澳氟菊酯农药对照品适 量，用石油醴（6090C）分别制成每1ml含2025卜g的溶液，即得。4.4.2 混合对照品储备液的制备精密量取上述各对照品溶液储备液1ml,置10ml量瓶中，用石油醴（6090C）稀释至刻度，摇匀，即得。4.4.3 混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品储备液,用石油醴（60-90 C）制成每1L分别含为0仙g、4仙g、8仙g、40仙g、200 g的溶液，即得。4.4

17、.4 供试品溶液的制备药材取供试品于60c干燥4h,粉碎成细粉（过五号筛），取约12g,精密称定,置100ml具塞锥形瓶中，加石油醴（6090C）-丙酮（4: 1）混合溶 液30ml,超声处理15min,滤过，药渣再重复上述操作 2次后，合并滤液，滤液加入适 量无水硫酸钠脱水后，置100ml圆底烧瓶中，于4045c减压浓缩至近干，用少量石油醴 （6090C）反复操作至丙酮除净，残渣用适量石油醴（60-90C）溶解，置玻璃层析柱混合小柱（内径11.5cm的玻璃柱），从下至上依次为无水硫酸钠 2g、弗罗里硅士 4g、 微晶纤维素1g、氧化铝（100目）1g和无水硫酸钠2g,用石油醴（6090C）-乙醴（4： 1）混合溶液20ml预洗上，用石油醴（6090C）-乙醴（4: 1）混合溶液90ml洗脱，收集 洗脱液，于4045C减压浓缩至近干，再用石油醴（6090C） 34ml重复操作至乙醴除 净，残渣用石油醴（6090C）溶解转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，即得。同法制备 空白样品。4.5 测定法按上述色谱条件操作，分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的