研究中常用荧光染料和探针学习教案

1、会计学1研究中常用荧光染料研究中常用荧光染料(rnlio)和探针和探针第一页，共48页。Page 22022-7-1Date第1页/共48页第二页，共48页。Page 32022-7-1Date第2页/共48页第三页，共48页。Page 42022-7-1Date第3页/共48页第四页，共48页。第4页/共48页第五页，共48页。Page 62022-7-1Date第5页/共48页第六页，共48页。Page 72022-7-1Daten发荧光量的测定对物质定性、定量分析第6页/共48页第七页，共48页。Page 82022-7-1Date第7页/共48页第八页，共48页。Page 92022-

2、7-1Date第8页/共48页第九页，共48页。Page 102022-7-1Date第9页/共48页第十页，共48页。Page 112022-7-1Date第10页/共48页第十一页，共48页。Page 122022-7-1Date第11页/共48页第十二页，共48页。Page 132022-7-1Date第12页/共48页第十三页，共48页。Page 142022-7-1Date第13页/共48页第十四页，共48页。Page 152022-7-1Date第14页/共48页第十五页，共48页。Page 162022-7-1Date试剂试剂浓度温度浓度温度时间设定时间设定中性缓冲甲醛中性缓冲甲

3、醛乙醇乙醇乙醇乙醇乙醇乙醇过夜过夜无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇二甲苯无水乙醇二甲苯无水乙醇体积比为：体积比为：二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯石蜡石蜡石蜡石蜡 石蜡石蜡 第15页/共48页第十六页，共48页。Page 172022-7-1Date第16页/共48页第十七页，共48页。Page 182022-7-1Date第17页/共48页第十八页，共48页。Page 192022-7-1Date第18页/共48页第十九页，共48页。Page 202022-7-1Date抗原。第19页/共48页第二十页，共48页。Page 212022-7-1Date。n由于激光共聚焦显微镜观察采集图象很快，所以一

4、般(ybn)用PBS或生理盐水也可以。第20页/共48页第二十一页，共48页。Page 222022-7-1Date第21页/共48页第二十二页，共48页。Page 232022-7-1Date荧光荧光(ynggung)组织细胞染色（荧光组织细胞染色（荧光(ynggung)探针检测，荧光探针检测，荧光(ynggung)标记检测）标记检测）第22页/共48页第二十三页，共48页。Page 242022-7-1Date第23页/共48页第二十四页，共48页。Page 252022-7-1Date第24页/共48页第二十五页，共48页。Page 262022-7-1DateFluorochromes

5、 and StainsnDAPI, Hoechst, SYTO 16: semipermeant and permeant DNA stain, apoptosisnGFP: used in living systems as a gene/protein reporternLucifer yellow, Fluorogold: neuronal tracernMitoFluor green, MitoTracker green: mitichondrial marker第25页/共48页第二十六页，共48页。Page 272022-7-1DatenDiI: lipophilic membra

6、ne markernRhodamine 6G, MitoTracker red: mitochondrial and ER markernPropidium iodide, Ethidium Bromide, SYTO 25: impermeant and permeant nucleic acid stain第26页/共48页第二十七页，共48页。TO-PRO-3Alexa 488Alexa 568Human colon cryptChristine Anderson,Laboratory of Prof. Ray White,Hunstsman Cancer Institute, Utah

7、第27页/共48页第二十八页，共48页。Page 292022-7-1Date第28页/共48页第二十九页，共48页。Page 302022-7-1DatePhysiology ProbesnIndo-1, Fura-2: dual emission or dual excitation calcium probenCalcium green, Fluo-3: single wavelength calcium probenBCECF: single or dual excitation wavelength pH probenJC-1: potential sensitive mitocho

8、ndrial dual emissionnCalcein: volume changes, gap junctions, liposomes, permeabilitynLysosensor Blue DND-192, LysoSensor Green DND-153: lysosomal markernNBD-C6 ceramide: Golgi markernRhodamine-123: mitochondrial marker第29页/共48页第三十页，共48页。Page 312022-7-1DatenSNARF: pH indicator emission rationFM1-43,

9、RH-414: plasma membranenFura red: calcium indicator, decreased fluorescence on bindingnDIC18(3), DIC16(3): ER markernLysoTracker Yellow DND-68: lysosomal markernMitoTracker Orange, Rhodamine B Hexyl ester, Tetramethylrosamine: mitochondrial marker第30页/共48页第三十一页，共48页。Page 322022-7-1DateMouse; hippoca

10、mpal neurons;fluorescence of GFPShigeo OkabeDepartment of Anatomy and Cell BiologyTokyo Medical and Dental University第31页/共48页第三十二页，共48页。Page 332022-7-1Date第32页/共48页第三十三页，共48页。Page 342022-7-1Date第33页/共48页第三十四页，共48页。Page 352022-7-1Date第34页/共48页第三十五页，共48页。Page 362022-7-1Date第35页/共48页第三十六页，共48页。Page 37

11、2022-7-1Date第36页/共48页第三十七页，共48页。Page 382022-7-1Date第37页/共48页第三十八页，共48页。Page 392022-7-1Date第38页/共48页第三十九页，共48页。Page 402022-7-1Date第39页/共48页第四十页，共48页。Page 412022-7-1Date第40页/共48页第四十一页，共48页。Page 422022-7-1Date第41页/共48页第四十二页，共48页。Page 432022-7-1Date第42页/共48页第四十三页，共48页。Page 442022-7-1Date第43页/共48页第四十四页，共

12、48页。Page 452022-7-1Date第44页/共48页第四十五页，共48页。Page 462022-7-1Date3. GFP 绿色荧光蛋白绿色荧光蛋白GFP的的发现的的发现(fxin)：60年代，年代，Shimomura等首先从水母中分离出一种水母发光等首先从水母中分离出一种水母发光蛋白蛋白(aequoren)，该蛋白与钙和肠腔素结合后可产生蓝色荧光。然而水母整体几，该蛋白与钙和肠腔素结合后可产生蓝色荧光。然而水母整体几提取的颗粒都呈绿色，后经证实在水母体内还存在另外一种发光蛋白即绿色荧光提取的颗粒都呈绿色，后经证实在水母体内还存在另外一种发光蛋白即绿色荧光蛋白蛋白GFP, 后经研究表明，在水母体内后经研究表明，在水母体内Ca2+和肠腔素与水母发光蛋白结合后，水和肠腔素与水母发光蛋白结合后，水母发光蛋白产生蓝色荧光，母发光蛋白产生