解毒与活血配伍干预高脂血症与动脉粥样硬化的临床及机理研究学习教案

1、会计学1解毒与活血配伍干预高脂血症与动脉粥样解毒与活血配伍干预高脂血症与动脉粥样硬化的临床及机理研究硬化的临床及机理研究第一页，编辑于星期三：一点 二分。第1页/共78页第二页，编辑于星期三：一点 二分。第2页/共78页第三页，编辑于星期三：一点 二分。效的中医药治法效的中医药治法？值得我们深？值得我们深思。思。第3页/共78页第四页，编辑于星期三：一点 二分。第4页/共78页第五页，编辑于星期三：一点 二分。第5页/共78页第六页，编辑于星期三：一点 二分。块块”和和“解毒活血法稳定易损解毒活血法稳定易损斑块斑块”的假说。的假说。第6页/共78页第七页，编辑于星期三：一点 二分。第7页/共7

2、8页第八页，编辑于星期三：一点 二分。C57BL株系株系 Jackson 实验室实验室 美国缅因州，世界上最重要的老鼠遗传学研究中心之一 1986-1989年培育出第一只基因敲除小鼠ApoE基因敲除小鼠于1992年培育成功 基因敲除小鼠基因敲除小鼠 美国科学家于美国科学家于1992年培育成功的年培育成功的载脂蛋白载脂蛋白E（ApoE）基因敲除小鼠）基因敲除小鼠，在正常饮食下，在正常饮食下即可形成明显的高脂血症及弥漫纤维增殖性即可形成明显的高脂血症及弥漫纤维增殖性As损伤病灶。成为研究损伤病灶。成为研究As发病机理发病机理、干预措施、筛选抗、干预措施、筛选抗As药物及机理研究较理想的动物模型。药

3、物及机理研究较理想的动物模型。 第8页/共78页第九页，编辑于星期三：一点 二分。n高校博士点科研基金高校博士点科研基金（20060441002）第9页/共78页第十页，编辑于星期三：一点 二分。第10页/共78页第十一页，编辑于星期三：一点 二分。第11页/共78页第十二页，编辑于星期三：一点 二分。虎杖虎杖具有解毒消肿、利湿等功效具有解毒消肿、利湿等功效山楂山楂擅长活血行滞而消积擅长活血行滞而消积两者配伍不仅有前期实验论证的基础，而且两者配伍不仅有前期实验论证的基础，而且已经应用于临床科研，疗效显著。已经应用于临床科研，疗效显著。 第12页/共78页第十三页，编辑于星期三：一点 二分。虎杖

4、与山楂第13页/共78页第十四页，编辑于星期三：一点 二分。第14页/共78页第十五页，编辑于星期三：一点 二分。第15页/共78页第十六页，编辑于星期三：一点 二分。第16页/共78页第十七页，编辑于星期三：一点 二分。参照参照血脂异常防治建议血脂异常防治建议标准、标准、非酒非酒精性脂肪性肝病诊断标准精性脂肪性肝病诊断标准及及腹部疾病腹部疾病超声诊断超声诊断制定。制定。本研究纳入病例来自济南市机床二厂集团本研究纳入病例来自济南市机床二厂集团职工及家属。职工及家属。符合上述高脂血症及脂肪肝诊断标准者。符合上述高脂血症及脂肪肝诊断标准者。年龄在年龄在4069岁之间者。岁之间者。诊断标准诊断标准病

5、例来源病例来源纳入标准纳入标准第17页/共78页第十八页，编辑于星期三：一点 二分。空白对照组空白对照组 20例例 山楂虎杖配伍组山楂虎杖配伍组（活血解毒配伍组）（活血解毒配伍组）虎杖组（解毒组）虎杖组（解毒组） 20例例山楂组（活血组）山楂组（活血组） 20例例洛伐他汀组洛伐他汀组 20例例分分组组及及治治疗疗方方法法 山楂提取物山楂提取物 虎杖提取物虎杖提取物 山楂提取物及山楂提取物及 虎杖提取物虎杖提取物 洛伐他汀洛伐他汀 不给予药物不给予药物20例例A BC DE第18页/共78页第十九页，编辑于星期三：一点 二分。虎杖组虎杖组山楂虎杖组山楂虎杖组洛伐他汀组洛伐他汀组 一般体格 检查项

6、目 肾功能指标 Cr BUN TC TG HDL-C LDL-C ALT hs-CRP sICAM-1 sVCAM-1 脂肪肝超声 声像分度药物治疗药物治疗6个月饮食调节个月饮食调节空白组空白组山楂组山楂组观察项目观察项目安全性观察安全性观察疗效性观察疗效性观察第19页/共78页第二十页，编辑于星期三：一点 二分。第20页/共78页第二十一页，编辑于星期三：一点 二分。第21页/共78页第二十二页，编辑于星期三：一点 二分。 第22页/共78页第二十三页，编辑于星期三：一点 二分。第23页/共78页第二十四页，编辑于星期三：一点 二分。 第24页/共78页第二十五页，编辑于星期三：一点 二分。

7、第25页/共78页第二十六页，编辑于星期三：一点 二分。第26页/共78页第二十七页，编辑于星期三：一点 二分。第27页/共78页第二十八页，编辑于星期三：一点 二分。颈动脉粥样硬化的病变程度与心脑血管疾病的发颈动脉粥样硬化的病变程度与心脑血管疾病的发生有直接的相关性生有直接的相关性通过观察颈动脉粥样硬化程度，可客观地估计以通过观察颈动脉粥样硬化程度，可客观地估计以AsAs为病理基础的心脑血管疾病的发病危险性为病理基础的心脑血管疾病的发病危险性及治疗效果及治疗效果第28页/共78页第二十九页，编辑于星期三：一点 二分。颈动脉内中膜厚度（颈动脉内中膜厚度（IMT） 是指动脉内膜和中膜平滑肌的厚度

8、，即由管腔内膜面的前缘到是指动脉内膜和中膜平滑肌的厚度，即由管腔内膜面的前缘到中膜平滑肌与外膜交界面前缘的垂直距离。中膜平滑肌与外膜交界面前缘的垂直距离。 第29页/共78页第三十页，编辑于星期三：一点 二分。扁平斑扁平斑 硬斑硬斑 第30页/共78页第三十一页，编辑于星期三：一点 二分。软斑软斑 溃疡斑溃疡斑 第31页/共78页第三十二页，编辑于星期三：一点 二分。第32页/共78页第三十三页，编辑于星期三：一点 二分。第33页/共78页第三十四页，编辑于星期三：一点 二分。各组病例治疗后临床症状总疗效比较 第34页/共78页第三十五页，编辑于星期三：一点 二分。各组病例治疗前后中医症状积分

9、比较 *第35页/共78页第三十六页，编辑于星期三：一点 二分。*#*第36页/共78页第三十七页，编辑于星期三：一点 二分。颈动脉粥样硬化斑块超声检测指标比较 *#第37页/共78页第三十八页，编辑于星期三：一点 二分。*第38页/共78页第三十九页，编辑于星期三：一点 二分。颈动脉粥样硬化斑块超声检测指标比较 *第39页/共78页第四十页，编辑于星期三：一点 二分。*第40页/共78页第四十一页，编辑于星期三：一点 二分。*第41页/共78页第四十二页，编辑于星期三：一点 二分。斑块稳定性血清指标检测 *第42页/共78页第四十三页，编辑于星期三：一点 二分。斑块稳定性血清指标检测 *#第

10、43页/共78页第四十四页，编辑于星期三：一点 二分。#*第44页/共78页第四十五页，编辑于星期三：一点 二分。第二部分第二部分 研究结果研究结果斑块稳定性血清指标检测 #*第45页/共78页第四十六页，编辑于星期三：一点 二分。血压水平比较 *第46页/共78页第四十七页，编辑于星期三：一点 二分。血脂水平比较 *第47页/共78页第四十八页，编辑于星期三：一点 二分。1 1及及MMP-1/TIMP-1MMP-1/TIMP-1比值）等作用比值）等作用第48页/共78页第四十九页，编辑于星期三：一点 二分。第49页/共78页第五十页，编辑于星期三：一点 二分。第50页/共78页第五十一页，编

11、辑于星期三：一点 二分。第51页/共78页第五十二页，编辑于星期三：一点 二分。第52页/共78页第五十三页，编辑于星期三：一点 二分。技技 术术 路路 线线第53页/共78页第五十四页，编辑于星期三：一点 二分。IL-1含量含量TNF-含量含量NF-B蛋白表达蛋白表达TLR4蛋白表达蛋白表达第54页/共78页第五十五页，编辑于星期三：一点 二分。第55页/共78页第五十六页，编辑于星期三：一点 二分。第56页/共78页第五十七页，编辑于星期三：一点 二分。第57页/共78页第五十八页，编辑于星期三：一点 二分。第58页/共78页第五十九页，编辑于星期三：一点 二分。研究方法 第59页/共78

12、页第六十页，编辑于星期三：一点 二分。PPAR上游引物为上游引物为5 -CCC TGG CAA AGC ATT TGT AT -3 ， 下下游引物为游引物为5 -AAT CCT TGG CCC TCT GAG AT-3 （403bp）；）； ABCA1上游引物为上游引物为5 -CAG ATG CCC TAC CCC TGT TA-3 ， 下游引物为下游引物为5 - GGG AGA AGA GCG TGC TAA TG-3 （364bp）；）； CD36 上游引物为上游引物为5 -CCT TAA AGG AAT CCC CGT GT -3 ，下游引物，下游引物为为5 -CCA ATG GTC C

13、CA GTC TCA TT-3 （418bp）；）； -actin上游引物为上游引物为5 - TCC TCC CTG GAG AAG AGC TA -3 ，下游，下游引物为引物为5 - TCA GGA GGA GCA ATG ATC TTG -3 （302bp）。）。各引物序列第60页/共78页第六十一页，编辑于星期三：一点 二分。细胞总细胞总RNARNA提取及提取及RT-PCRRT-PCR反应均采用反应均采用RT-PCRRT-PCR检测细胞因子试剂盒（购自上检测细胞因子试剂盒（购自上海生工生物工程技术有限公司）。海生工生物工程技术有限公司）。收集收集107107细胞沉淀提取细胞总细胞沉淀提取

14、细胞总RNARNA，取，取1ug1ug逆转录成逆转录成cDNAcDNA，进行，进行PCRPCR扩增（扩增（所有操作均严格按照试剂盒说明书进行所有操作均严格按照试剂盒说明书进行）。）。第61页/共78页第六十二页，编辑于星期三：一点 二分。9494度度1 1分钟，分钟，5858度度1 1分钟，分钟，7272度度 1 1分分钟，共钟，共3535个循环，最后个循环，最后7272度延长度延长7 7分钟。分钟。 取各基因扩增产物取各基因扩增产物10ul10ul，经，经琼脂糖凝胶电琼脂糖凝胶电泳泳，溴化乙锭染色，多功能紫外投射反射分析仪，溴化乙锭染色，多功能紫外投射反射分析仪下观察并拍照，采用美国下观察并

15、拍照，采用美国KodakKodak凝胶分析系统，应凝胶分析系统，应用用1 D Image Analysis Software1 D Image Analysis Software进行产物灰度进行产物灰度图像分析，以各基因与图像分析，以各基因与-actin-actin的电泳条带光的电泳条带光密度值的比值作为各基因的相对表达量。密度值的比值作为各基因的相对表达量。第62页/共78页第六十三页，编辑于星期三：一点 二分。研究结果1 解毒活血中药配伍对解毒活血中药配伍对ApoE(-/-)ApoE(-/-)小鼠巨噬细胞小鼠巨噬细胞PPARmRNAPPARmRNA表达的影响表达的影响第63页/共78页第六

16、十四页，编辑于星期三：一点 二分。研究结果 1#与模型组比较 与解毒活血配伍组比较 第64页/共78页第六十五页，编辑于星期三：一点 二分。研究结果2 解毒活血中药配伍对解毒活血中药配伍对ApoE(-/-)ApoE(-/-)小鼠巨噬细胞小鼠巨噬细胞ABCA1mRNAABCA1mRNA表达的影响表达的影响 第65页/共78页第六十六页，编辑于星期三：一点 二分。 解毒活血中药配伍对解毒活血中药配伍对ApoE(-/-)ApoE(-/-)小鼠巨噬细胞小鼠巨噬细胞ABCA1mRNAABCA1mRNA表达的影响表达的影响 #与解毒活血配伍组比较 与模型组比较 #第66页/共78页第六十七页，编辑于星期三

17、：一点 二分。研究结果3 解毒活血中药配伍对解毒活血中药配伍对ApoE(-/-)ApoE(-/-)小鼠巨噬细胞小鼠巨噬细胞CD36mRNACD36mRNA表达的影响表达的影响 第67页/共78页第六十八页，编辑于星期三：一点 二分。研究结果3 解毒活血中药配伍对解毒活血中药配伍对ApoE(-/-)ApoE(-/-)小鼠巨噬细胞小鼠巨噬细胞CD36mRNACD36mRNA表达的影响表达的影响 #与解毒活血配伍组比较 #第68页/共78页第六十九页，编辑于星期三：一点 二分。第69页/共78页第七十页，编辑于星期三：一点 二分。n活血组及洛伐他汀组，相当于或活血组及洛伐他汀组，相当于或优于罗格列酮组。优于罗格列酮组。第70页/共78页第