十五章第二节后回顾

1、回顾1、请简述乙肝病毒的结构。请简述乙肝病毒的结构。2、乙肝疫苗的种类和在酵母中制备乙肝疫苗的方、乙肝疫苗的种类和在酵母中制备乙肝疫苗的方法。法。大球形颗粒大球形颗粒（Dane颗粒颗粒）小球形颗粒小球形颗粒管形颗粒管形颗粒100-1000 nm（完整的病毒，具有传染性）（完整的病毒，具有传染性）HBsAgHBcAgHBV DNADNA P（外膜蛋白）（外膜蛋白）（核衣壳蛋白）（核衣壳蛋白）乙肝病毒结构名称名称形态形态 HBsAg基因组基因组DNASP（Main）MPLP小球形小球形蛋白蛋白22nm主组分主组分 5%管形蛋白管形蛋白22nm、100-1000 nm主组分主组分 2-5%5-10%

2、大球形大球形蛋白蛋白42nm 主组分主组分5-10%20%双联环状双联环状DNA乙肝疫苗的种类乙肝疫苗的种类血源性血源性疫苗疫苗重组蛋白重组蛋白疫苗疫苗多肽多肽疫苗疫苗核酸核酸疫苗疫苗以以HBV GD 为模板为模板上游工艺上游工艺上游工艺：上游工艺：1、扩增扩增HBV S基因；基因；2、插入插入克隆载体；克隆载体；3、转化转化原核工程菌测序、原核工程菌测序、提取质粒；提取质粒；4、经酶切，连接，将、经酶切，连接，将HBV S基因插入基因插入表达载体表达载体；5、转化酵母细胞；、转化酵母细胞；6、筛选阳性克隆、筛选阳性克隆预处理、粗提预处理、粗提乙肝疫苗制备乙肝疫苗制备破碎酿酒酵母，除去细胞碎片

3、破碎酿酒酵母，除去细胞碎片;硅胶吸附粗提硅胶吸附粗提HBsAg稀释、除菌稀释、除菌疏水色谱疏水色谱纯化，纯化，硫氰酸硫氰酸盐盐处理，稀释和处理，稀释和过滤除菌过滤除菌检定、甲醛处理检定、甲醛处理无菌检查、蛋白含量测定、无菌检查、蛋白含量测定、100 g/ml 甲醛，甲醛，37保温保温铝吸附铝吸附铝佐剂铝佐剂检定、分批、分装和包装检定、分批、分装和包装成品成品半成品半成品原液原液发酵液发酵液粗提液粗提液2-8 低温低温铝吸附产物铝吸附产物检定检定2、通过重组大肠杆菌表达治疗性蛋白质常见的方通过重组大肠杆菌表达治疗性蛋白质常见的方法有哪几种，各有何优缺点？法有哪几种，各有何优缺点？（1）非融合表达

4、）非融合表达（2）融合表达）融合表达（3）分泌表达）分泌表达2022-6-27（1）非融合）非融合表达2022-6-27（2）融合）融合表达表达且用且用凝血酶凝血酶可将目的蛋白的可将目的蛋白的GST标签切掉，便于下游蛋白标签切掉，便于下游蛋白纯化纯化2022-6-27（3）分泌表达）分泌表达目的基因嵌合在目的基因嵌合在信号信号肽肽下游进行表达下游进行表达细胞周质和培养基中细胞周质和培养基中，减少代谢负荷，有利减少代谢负荷，有利于形成天然构象的活于形成天然构象的活性产物。性产物。2、通过重组大肠杆菌表达治疗性蛋白质常见通过重组大肠杆菌表达治疗性蛋白质常见的方法有哪几种，各有何优缺点？的方法有哪几种，各有何优缺点？名称名称优点优点缺点缺点非融合表达非融合表达结构、功能和免疫原性结构、功能和免疫原性与目的蛋白类似与目的蛋白类似包涵体包涵体、复杂的变性、复杂的变性、复性（复性率低）复性（复性率低）融合表达融合表达高效表达高效表达细胞内细胞内蛋白蛋白分泌表达分泌表达天然构象天然构象