小叶女贞叶斑病菌孢子萌发条件的研究

1、科技创新基金项目申报表项目名称：小叶女贞叶斑病菌孢子萌发条件的研究 一、 项目基本情况项目名称小叶女贞叶斑病菌孢子萌发条件的研究项目类别自然科学研究期限六个月申请经费500元项目简介小叶女贞是重要的绿篱植物，具有很高的观赏价值和重要的药用价值。小叶女贞叶斑病是小叶女贞的主要病害之一，该病会导致叶片、枝条生出病斑，甚至枯萎，严重地影响小叶女贞的观赏价值。本项目主要对小叶女贞叶斑病病原菌孢子萌发的条件进行系统地研究，了解温度、相对湿度、pH、光照、营养液等因素对病原菌孢子萌发的影响，探究小叶女贞叶斑病菌孢子萌发的条件要求，并找出最适合该病原菌萌发的条件；为小叶女贞小苗的培育以及小叶女贞绿化区的叶斑

2、病综合防治提供科学依据，为宜居城市、绿色城市的建设奉献力量。二、立论依据（项目的意义、现状分析、参考文献等）(一) 项目研究的意义小叶女贞（学名：Ligustrum quihoui Carr.）是木犀科女贞属的半常绿小灌木；叶薄且小、革质、常绿、耐修剪，生长迅速，是制作盆景的优良树种；此外叶还可入药、具清热解毒、治烫伤、外伤等功效。小叶女贞对二氧化硫、氯等多种有毒气体有较好的抗性，是优良的抗污染树种，在园林上常大量的用作绿篱及色块搭配，作用十分明显，不但可以保护城市生态，还能够吸收空气中的粉尘和有害气体，净化空气改善人们的生活环境。因此，搞好小叶女贞的苗木栽培和管理，对园林、城市的绿化建设具有

3、重要意义。由叶斑病菌引起的叶斑病是小叶女贞主要的病害之一。感病叶片初期出现圆形或近圆形病斑，在潮湿的环境条件下，病斑上出现黑色霉丝；感病一段时间后，由于病原菌的侵染还使嫩梢和枝条患病生出病斑，致使物质运输受阻嫩叶枯萎、脱落，以至严重的影响小叶女贞的生长繁殖及其观赏价值。因此，对小叶女贞叶斑病菌孢子萌发条件进行系统的研究，了解温度、相对湿度、pH、光照等因素对小叶女贞叶斑病菌孢子萌发的影响，不但对小叶女贞苗木的栽培和城市绿化区的管理具有指导意义，而且能够为花农及园艺工作者对小叶女贞进行合理密植及根据当地气候情况及时做好小叶女贞叶斑病的防范工作提供科学的参考依据。(一) 国内外研究现状分析目前，对

4、植物病原真菌孢子萌发条件的研究国外报道较多。Benlioglu研究了光照对孢子萌发产生的影响1。在国内对孢子萌发条件的研究也不少。陈昱君等对三七黑斑病病菌孢子萌发特性的研究结果表明黑斑病病菌孢子萌发的适宜温度和湿度分别为1825,RH90%100%2。王吉霞等研究了温度对小麦矮腥黑穗病菌冬孢子萌发的影响得出其萌发温度范围为212，5为萌发的最佳温度3。郑寰宇等对马铃薯早疫病病菌分生孢子萌发条件的研究结果表明该病原菌孢子萌发的最适温度为30、最适pH为7、黑暗条件有利于孢子萌发4。还有刁家文等对金叶女贞叶斑病发生机制及综合防治措施研究的报道5-6。然而，对小叶女贞只见关于栽培管理及用途的研究7，

5、对其叶斑病菌孢子萌发条件的研究尚未见报道，小叶女贞叶斑病菌孢子萌发的条件和已报道的病菌孢子萌发条件是否相同有待研究。（三）主要参考文献1 Benlioglu S, Delen N.Studies on the sporulation of the early blight agent Alternaria solani (Ell and Mart) Jones and Groat of tomatoes J.Journal of Turkish Phytopatholopy, 1996, 25(1/2):23-282 陈昱君，王勇，冯光泉. 三七黑斑病病菌孢子萌发特性研究J. 植物保护， 20

6、00，26（5）：24-253 王吉霞，周益林，段霞瑜等.温度对小麦矮腥黑穗病菌冬孢子萌发的影响J.植物保护，2006，32：38-404 郑寰宇，左豫虎，张树远，台莲梅等.马铃薯早疫病病菌分生孢子萌发条件的研究J 植物保护，2010,36（6）：91-955 刁家文，孙波.金叶女贞叶斑病发生机制及综合防治措施J. 贵阳学院学报，2007，2（2）：10-126 张红梅，李桂芝，王亚，等.金叶女贞常见病虫害及其防治J.平顶山工学院学报，2006（1）：46-47 王凤龙，陈金丰 小叶女贞的栽培管理及用途J. 吉林农业，2009，（16） 三、研究方案(一) 研究目标、研究内容和拟解决的关键问题

7、1. 本项目的研究目标：找出小叶女贞叶斑病菌孢子萌发的最适条件。2. 本项目的研究内容1) 了解小叶女贞叶斑病菌孢子萌发的环境，再通过实验系统地研究探索温度、相对湿度、pH、光照、营养液等因素对小叶女贞叶斑病菌孢子萌发的影响；2) 分析实验数据得出小叶女贞叶斑病菌孢子萌发的最适温度、相对湿度、pH以及光照时长。3. 拟解决的问题1) 小叶女贞叶斑病菌大量孢子的获得；2) 实验环境的无菌保持。(二) 拟采取的研究方法及可行性分析1. 研究方法：1) 温度对小叶女贞叶斑病菌孢子萌发的影响将培养的孢子用水稀释混匀成悬浮液，把悬浮液平均分成9×3等份放入灭菌的培养皿中，置于不同温度的恒温培养

8、箱中培养，然后观察孢子萌发情况，统计孢子的萌发率，每处理重复3次。2) 相对湿度对小叶女贞叶斑病菌孢子萌发的影响利用不同盐的饱和溶液控制密闭容器内的相对湿度，将铺有新鲜孢子粉的载玻片悬放于不同湿度的容器内，在最适温度下培养。然后观察孢子萌发情况，统计孢子的萌发率，每处理重复3次。用自来水做对照。3) pH对小叶女贞叶斑病菌孢子萌发的影响用浓度为1mol/L的HCl和NaOH配制不同pH的溶液，以上述溶液为浮载剂配制孢子悬浮液，将孢子悬浮液放入培养箱中并在最适温度下培养，之后观察孢子萌发情况，统计孢子的萌发率，每处理重复3次。4) 光照对小叶女贞叶斑病菌孢子萌发的影响设24h光照（日光连续光照）

9、、12h光照/12h黑暗（光暗交替）、24h黑暗（连续黑暗）、自然光照射4个处理，在最适温度下培养，之后观察孢子萌发情况，统计孢子的萌发率，每处理重复3次。5) 营养液对小叶女贞叶斑病菌孢子萌发的影响用不同的碳、氮源营养液和不同浓度的新鲜小叶女贞叶片汁液作为浮载剂配制孢子悬浮液，将孢子悬浮液置于最适温度下培养，之后观察孢子萌发情况，分别统计不同营养液中孢子的萌发率，每处理重复3次。用自来水做对照。2可行性分析：首先，实验室已有小叶女贞叶斑病病菌菌株，实验材料的供应有保证；其次，本项目实验过程中所用到的实验仪器和设备较普通常见，大多数（恒温箱、干燥器、培养皿等）是基础生物学实验室的常规设备；实验

10、所需试剂：如葡萄糖、乳糖、蔗糖、尿素、硝酸铵、蛋白胨、HCl和NaOH等都是实验室常用试剂，并且价格也相对便宜。综上所述，该项目是完全可行的。(三) 本项目的特色与创新之处1. 本项目是首次针对小叶女贞这种园林绿化小灌木的叶斑病菌孢子萌发的条件进行系统的研究；2. 本项目考虑了温度、相对湿度、pH、光照、营养液等多个因素对叶斑病菌孢子萌发进行探究，其中将新鲜小叶女贞叶片汁液配成培养液来研究叶斑病菌孢子萌发条件是本项目的又一大创新点。(四) 预期的研究进展和成果1. 预期的研究进展：1） 2011-4-1 到2011-5-15 前期准备工作。2） 2011-5-16到2011-7-30 实验阶段（实验过程、实验现象观察 和数据记录、实验数据处理、实验总结得出结论）。3） 2011-7-31到2011-8-29撰写论文。2.预期成果1) 得出适合小叶女贞叶斑病病菌萌发的温度、湿度、光照等条件， 为该病的预防、治理提供科学依据。2) 提交小叶女贞叶斑病菌孢子萌发条件的研究学术论文一篇。创 作 过 程 中 的 问 题1. 本项目需要购买一定量的实验药品，但团队的经费资源有限。2. 本项目需要进行大量的实验研究，实验持续时间较长，需要团队成员暑期留校。3. 本项目需要申请使用实验室，为实验的顺利进行提供场所和仪器设备。指导老师意见（一）该项目把“小叶女