大肠杆菌检测

1、会计学1大肠杆菌检测大肠杆菌检测2目录概述检测方法检测原理讨论与展望Your text Your text Your text 概述概述 大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%，是一种两端，是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。大肠杆钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。大肠杆菌能合成维生素菌能合成维生素B和和K，正常栖居条件下不会致病；若，正常栖居条件下不会致病；若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在水和食品中检出进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在水和食品中检出，可认为是

2、被粪便污染的指标。大肠菌群数常作为饮，可认为是被粪便污染的指标。大肠菌群数常作为饮水、食物或药物的卫生学标准。大肠杆菌是国际上公水、食物或药物的卫生学标准。大肠杆菌是国际上公认的卫生监测指示茵，因此大肠杆菌的检测技术显得认的卫生监测指示茵，因此大肠杆菌的检测技术显得十分重要，相应出现了大量的大肠杆菌的各种检测方十分重要，相应出现了大量的大肠杆菌的各种检测方法。我将介绍一些常用的大肠杆菌检测的传统方法以法。我将介绍一些常用的大肠杆菌检测的传统方法以及最近出现的新的检测方法，为以后大肠杆菌检测提及最近出现的新的检测方法，为以后大肠杆菌检测提供一些参考。供一些参考。 传统检测方法 检测新技术多管发酵

3、法多管发酵法滤膜法滤膜法平板计数法平板计数法气相色谱与液相色谱法气相色谱与液相色谱法ATP生物发光技术生物发光技术PCR检测技术检测技术生物传感器检测技术生物传感器检测技术免疫磁珠技术免疫磁珠技术IMS基因芯片技术基因芯片技术自动化仪器自动化仪器Your text Your text Your text 检测原理检测原理 多管发酵法是一种检测食品及水体中大肠多管发酵法是一种检测食品及水体中大肠杆菌的传统方法。这种方法是将样品接种于杆菌的传统方法。这种方法是将样品接种于LST肉汤中在肉汤中在371的条件下培养的条件下培养242h，之后对产气样品进行复发酵；复发酵是将初，之后对产气样品进行复发酵；

4、复发酵是将初发 酵 中 产 气 样 品 接 种 于发 酵 中 产 气 样 品 接 种 于 E C 肉 汤 中 ，肉 汤 中 ，44.50.2条件下培养条件下培养242h，若产气则进，若产气则进行平板分离培养。多管发酵法对试验条件要求行平板分离培养。多管发酵法对试验条件要求不高不高，成本低，但是检测时间较长，容易受其，成本低，但是检测时间较长，容易受其他条件干扰，进而影响到测定结果的精确度。他条件干扰，进而影响到测定结果的精确度。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 滤膜法适用于水质监测，是首先于滤器滤膜法适用于水质监测，是首先于滤器内

5、加入内加入10mL无菌稀释水，接着将适量充分无菌稀释水，接着将适量充分混匀的待检食品的水溶液加入滤器中，进行混匀的待检食品的水溶液加入滤器中，进行抽滤，快滤完前加少许无菌稀释水以冲洗滤抽滤，快滤完前加少许无菌稀释水以冲洗滤器内壁，使水溶液内的细菌全部集中于滤膜器内壁，使水溶液内的细菌全部集中于滤膜上；用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在上；用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在M-FC培养基上培养基上,滤膜截留细菌面向上，滤膜滤膜截留细菌面向上，滤膜与培养基完全紧贴不能有气泡，将培养皿紧与培养基完全紧贴不能有气泡，将培养皿紧密盖好后，置于能准确恒温于密盖好后，置于能准确恒温于44.50.5的恒温培养

6、箱中的恒温培养箱中,经经242h培养，粪大肠菌培养，粪大肠菌群呈蓝色或蓝绿色群呈蓝色或蓝绿色,计数此类菌落数目。计数此类菌落数目。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 平板计数法首先选取较适宜的连续稀释梯度样品匀液平板计数法首先选取较适宜的连续稀释梯度样品匀液，将冷却至，将冷却至450.5的结晶紫中性红胆盐琼脂（的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注于平皿内，混匀并凝固后加入）倾注于平皿内，混匀并凝固后加入34mL的的VRBA-MUG覆盖平板表层，覆盖平板表层，361下培养下培养1824h，之，之后在紫外灯下计数。该方法是将样本做一定

7、比例的稀释，后在紫外灯下计数。该方法是将样本做一定比例的稀释，其中的微生物被稀释后分散成单个细胞，然后在一定的条其中的微生物被稀释后分散成单个细胞，然后在一定的条件下进行培养一直到生长成能用肉眼观察的菌落，最后通件下进行培养一直到生长成能用肉眼观察的菌落，最后通过样本数量和稀释度来计算出单位样本中的菌数。过样本数量和稀释度来计算出单位样本中的菌数。本方法本方法适用于除贝类产品外的食品中大肠杆菌检测。适用于除贝类产品外的食品中大肠杆菌检测。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 气相色谱法主要是将大肠杆菌经过一系列衍生化的前气相色谱法主要

8、是将大肠杆菌经过一系列衍生化的前处理后，为接下来的分析研究提供尽可能多的化学组分。处理后，为接下来的分析研究提供尽可能多的化学组分。大肠杆菌的污染程度可以用顶空气相色谱法来分析，其原大肠杆菌的污染程度可以用顶空气相色谱法来分析，其原理是利用食品密封系统顶部的微生物代谢产物理是利用食品密封系统顶部的微生物代谢产物CO2对微生对微生物进行分析。这种方法对食品质量安全检测有重大意义。物进行分析。这种方法对食品质量安全检测有重大意义。与上述传统技术相比，此种方法具有检测速度快、灵敏度与上述传统技术相比，此种方法具有检测速度快、灵敏度高的优点。高效液相色谱法（高的优点。高效液相色谱法（HPLC）主要是根

9、据离子配）主要是根据离子配对反相层析的原理来分析核酸。对反相层析的原理来分析核酸。HPLC主要是针对主要是针对DNA片片段分离。长链段分离。长链DNA所携带的磷酸基团比较多，因此会有更所携带的磷酸基团比较多，因此会有更多的多的TEAA与之相融合，其在柱内停留的时间增加。与之相融合，其在柱内停留的时间增加。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 ATP生物发光技术是近些年来发展较快的微生物快速生物发光技术是近些年来发展较快的微生物快速检测方法。检测方法。ATP是活细胞中最普遍的能量代谢产物，为是活细胞中最普遍的能量代谢产物，为细胞提供各种

10、生理活动所需的能量，而且其在生物体内细胞提供各种生理活动所需的能量，而且其在生物体内含量维持在一定的范围内。含量维持在一定的范围内。ATP含量检测的一种方法是含量检测的一种方法是荧光光度法，生物发光是活细胞在荧光素酶催化下发出荧光光度法，生物发光是活细胞在荧光素酶催化下发出的荧光。与传统检测方法相比，不同之处在于几分钟内的荧光。与传统检测方法相比，不同之处在于几分钟内便可获得检测结果，而且荧光光度计是便携式的，使用便可获得检测结果，而且荧光光度计是便携式的，使用非常方便，适用于现场检测，这种技术可以用于检测微非常方便，适用于现场检测，这种技术可以用于检测微小的污染物水平以及食品加工设备及其表面

11、的清洁程度小的污染物水平以及食品加工设备及其表面的清洁程度的检测。的检测。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 PCR检测技术是在检测技术是在1971年首先被年首先被Kleppe等提出，等提出，1985年才作为一种检测方法获得认可。年才作为一种检测方法获得认可。PCR检测技术是检测技术是一种聚合酶链反应，其采用变性一种聚合酶链反应，其采用变性退火退火延伸三个步骤延伸三个步骤使使DNA基因能够在体外实现解旋解链，类似于一种体外基因能够在体外实现解旋解链，类似于一种体外增加、复制形式。史云等建立了用于肉及肉制品中大肠增加、复制形式。史云等

12、建立了用于肉及肉制品中大肠杆菌的两重杆菌的两重PCR检测方法，但该方法需要较长的时间的检测方法，但该方法需要较长的时间的样品纯化处理，且对操作人员的专业知识的要求也较高样品纯化处理，且对操作人员的专业知识的要求也较高。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 生物传感器主要是以生物化学传感技术为基础，用生物传感器主要是以生物化学传感技术为基础，用抗体、酶、细胞等作为识别元件，并与信号转换器和电抗体、酶、细胞等作为识别元件，并与信号转换器和电子测量仪联合构成的一种分析工具。目前已经成熟的商子测量仪联合构成的一种分析工具。目前已经成熟的商品化

13、的传感器有免疫传感器、酶传感器、品化的传感器有免疫传感器、酶传感器、DNA杂交传感杂交传感器、微生物传感器、分子印迹传感器等。生物传感器具器、微生物传感器、分子印迹传感器等。生物传感器具有诸多优点，如高灵敏度、高选择性、较好的稳定性、有诸多优点，如高灵敏度、高选择性、较好的稳定性、低成本、且能在复杂的体系中快速在线监测。低成本、且能在复杂的体系中快速在线监测。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 免疫磁珠技术是一种大肠杆菌的分离技术。其原理免疫磁珠技术是一种大肠杆菌的分离技术。其原理是以磁珠为抗体载体，磁珠和大肠杆菌结合，通过磁力是以

14、磁珠为抗体载体，磁珠和大肠杆菌结合，通过磁力来实现力学移动进而将大肠杆菌进行分离。与其他的细来实现力学移动进而将大肠杆菌进行分离。与其他的细菌分离方法相比，免疫磁珠技术在很大程度上提高了样菌分离方法相比，免疫磁珠技术在很大程度上提高了样本中病原性副溶血性弧菌的检测效率。免疫磁珠技术可本中病原性副溶血性弧菌的检测效率。免疫磁珠技术可以快速地在不同菌种的样本中处理不同的微生物，该方以快速地在不同菌种的样本中处理不同的微生物，该方法可以大幅度地提升检测效率。法可以大幅度地提升检测效率。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 自动免疫测定分析仪

15、诞生于自动免疫测定分析仪诞生于20世纪世纪70年代。随着科年代。随着科技的发展，自动免疫测定分析仪在各领域的应用也越来技的发展，自动免疫测定分析仪在各领域的应用也越来越多，该仪器使用简单，无太多操作干扰，既省时省力越多，该仪器使用简单，无太多操作干扰，既省时省力，又大大提高了检测的精确度和灵敏度。这种自动酶标，又大大提高了检测的精确度和灵敏度。这种自动酶标免疫测试系统目前在国内外是酶免疫自动化系统中应用免疫测试系统目前在国内外是酶免疫自动化系统中应用最为广泛的一种。但是由于与其配套的试剂昂贵，从而最为广泛的一种。但是由于与其配套的试剂昂贵，从而限制了其在基层实验室的使用。限制了其在基层实验室的

16、使用。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 基因芯片技术基因芯片技术(gene chip)是是20世纪世纪90年代兴起的生年代兴起的生物技术，也叫物技术，也叫DNA微阵列微阵列(DNA microarray)。采用原。采用原位合成位合成(insitu synthesis)或显微打印方法，将数以万计或显微打印方法，将数以万计的的DNA探针固化在支持物表面，产生二维探针固化在支持物表面，产生二维DNA探针阵列探针阵列，接着与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实，接着与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效

17、地检测，由于它常用硅现对生物样品快速、并行、高效地检测，由于它常用硅芯片作为固相支持物，而且制备中运用了计算机芯片的芯片作为固相支持物，而且制备中运用了计算机芯片的制备技术，所以称为基因芯片技术。基因芯片可以对食制备技术，所以称为基因芯片技术。基因芯片可以对食品中的致病菌实行高通量和平行检测，一次实验就可以品中的致病菌实行高通量和平行检测，一次实验就可以得出全部检测结果。另外整个检测在很短时间内即可得得出全部检测结果。另外整个检测在很短时间内即可得出检测结果，且敏感性高，特异性强。出检测结果，且敏感性高，特异性强。Your text Your text Your text Your text

18、讨论与展望讨论与展望 近年来，世界各国针对水环境和食品中大肠杆菌的近年来，世界各国针对水环境和食品中大肠杆菌的快速检测技术展开了大量研究，在已知的检测方法中均快速检测技术展开了大量研究，在已知的检测方法中均有自己的优势与不足。随着科学和生物生化技术的发展有自己的优势与不足。随着科学和生物生化技术的发展，食品中大肠杆菌的检测计数也将趋于提高精度与速度，食品中大肠杆菌的检测计数也将趋于提高精度与速度，不断改进与完善才能切实解决食品安全问题，为人品，不断改进与完善才能切实解决食品安全问题，为人品生活提供保障。生活提供保障。Your text Your text Your text Your text

19、 参考文献参考文献1 4种食品中大肠杆菌检测方法评价.周宏霞.2关于食品中大肠杆菌检测方法的研究.姚勇.3食源性大肠杆菌快速检测技术研究进展.董妍.4水中细菌总数与大肠杆菌检测方法的比较研究.黄友芳.5GB4789.38-2012 食品微生物学检测 大肠埃希氏菌计数6HJ/T 347-2007 水质 粪大肠菌群的测定7快速检测大肠菌群数的研究.徐尔尼.Thank you!Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 气相色谱法主要是将大肠杆菌经过一系列衍生化的前气相色谱法主要是将大肠杆菌经过一系列衍生化的前处理后，为接下来的分析研究提供尽可能多的化学组分。处理后，为接下来的分析研究提供尽可能多的化学组分。大肠杆菌的污染程度可以用顶空气相色谱法来分析，其原大肠杆菌的污染程度可以用顶空气相色谱法来分析，其原理是利用食品密封系统顶部的微生物代谢产物理是利用食品密封系统顶部的微生物代谢产物CO2对微生对微生物进行分析。这种方法对食品质量安全检测有重大意义。物进行分析。这种方法对食品质量安全检测有重大意义。与上述传统技术相比，此种方法具有检测速度快、灵敏度与上述传统技术相比，此种方法具有检测速度快、灵敏度高的优点。高效液相色谱法