安捷伦型HPLC使用操作学习课程

1、主要内容 仪器的组成 操作前准备 开机及关机 工作站使用 数据分析 注意事项第1页/共37页第一页，编辑于星期日：十四点 二十分。仪器的组成 主体 安捷伦1260HPLC 流动相瓶、四元泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器 附件 电脑、显示器、打印机等第2页/共37页第二页，编辑于星期日：十四点 二十分。仪器的组成安捷伦1260HPLC 流动相瓶 四元泵 自动进样器 柱温箱 二极管阵列检测器第3页/共37页第三页，编辑于星期日：十四点 二十分。仪器的组成四元泵自动进样器柱温箱二极管阵列检测器排气阀流动相瓶电源开关指示灯色谱柱第4页/共37页第四页，编辑于星期日：十四点 二十分。操作前准备

2、流动相选择 流动相过滤 流动相超声与脱气 流动相冷却第5页/共37页第五页，编辑于星期日：十四点 二十分。操作前准备 流动相选择 分类：组成分-单组分和多组分 极性-极性、弱极性、非极性 常用溶剂：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、四氯化碳等 （溶剂最好为HPLC级，水为超纯水） 其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相，通过调节各组分的比例改变流动相的极性，已达到最佳的分离效果，对于部分情况还可以加入缓冲盐，调节出峰时间和达到改善峰型的效果。第6页/共37页第六页，编辑于星期日：十四点 二十分。操作前准备 流动相过滤 为了除去流动相中的杂质,保护系统和色谱柱，在流动相使用完后，装入新的溶剂前应使

3、用抽滤瓶对溶剂进行过滤。滤膜滤膜：有机膜和水系膜，二者不能混用。一般HPLC流动相过滤使用孔径为0.45m的滤膜。针对混合溶剂首选有机滤膜过滤。第7页/共37页第七页，编辑于星期日：十四点 二十分。操作前准备 流动相超声与脱气 为了除去溶解在流动相中得气泡,降低基线噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中超声30min左右。 对于溶解在流动相中的极微气体，安捷伦1260HPLC四元泵中集合了脱气机，可以进一步对混合后的流动相进行脱气处理。第8页/共37页第八页，编辑于星期日：十四点 二十分。操作前准备 流动相冷却 流动相在超声机中长时间超声后，由于水分子振动摩擦，使水温上升，因此流动相瓶中

4、的溶剂也会被加热。加热后的流动相进入液相系统和色谱柱后，会影响基线噪声的增加，使平稳时间延长。第9页/共37页第九页，编辑于星期日：十四点 二十分。开机及关机 1260HPLC及化学工作站开机使用与关机打开计算机打开主机电源点击仪器1联机进入工作站排气（A/B/C/D）调节流速与流动相比例关闭排气阀打开柱温箱逐步增大流速检查压力稳定后打开检测器跑基线稳定后清洗针与管路样品命名进样检测保存数据冲洗管路及关机第10页/共37页第十页，编辑于星期日：十四点 二十分。第11页/共37页第十一页，编辑于星期日：十四点 二十分。开机及关机 关机前，用90%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量1.0mL/m

5、in，再用100%有机溶剂（甲醇）冲0.5小时，然后保存方法和仪器设置。 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。 关掉液相主机各模块电源开关，拔掉电源插头。 做好仪器使用登记。第12页/共37页第十二页，编辑于星期日：十四点 二十分。工作站使用 进入工作站 主界面 方法和各模块参数设置 跑基线 样品命名与进样检测第13页/共37页第十三页，编辑于星期日：十四点 二十分。工作站使用进入工作站第14页/共37页第十四页，编辑于星期日：十四点 二十分。工作站使用主界面第15页/共37页第十五页，编辑于星期日：十四点 二十分。工作站使用方法和各模块参数设置在各模块中空白处点击右键，选择“方法”编辑参

6、数。第16页/共37页第十六页，编辑于星期日：十四点 二十分。仪器方法设置第17页/共37页第十七页，编辑于星期日：十四点 二十分。仪器方法设置1bar14.5psi0.1MPa=100kPa不同仪器单位不同第18页/共37页第十八页，编辑于星期日：十四点 二十分。仪器方法设置第19页/共37页第十九页，编辑于星期日：十四点 二十分。仪器方法设置第20页/共37页第二十页，编辑于星期日：十四点 二十分。工作站使用视图在线信号信号窗口1第21页/共37页第二十一页，编辑于星期日：十四点 二十分。工作站使用跑基线至少平稳30min第22页/共37页第二十二页，编辑于星期日：十四点 二十分。工作站使

7、用单次样品：样品命名第23页/共37页第二十三页，编辑于星期日：十四点 二十分。工作站使用序列样品：命名与序列表设置第24页/共37页第二十四页，编辑于星期日：十四点 二十分。工作站使用进样检测样品色谱图第25页/共37页第二十五页，编辑于星期日：十四点 二十分。数据分析 进入仪器1脱机 打开数据文件夹 打开样品色谱图 色谱峰编辑 色谱峰数据 打印报告 色谱峰实例第26页/共37页第二十六页，编辑于星期日：十四点 二十分。数据分析打开仪器1脱机第27页/共37页第二十七页，编辑于星期日：十四点 二十分。数据分析数据文件夹序列样品数据单次样品数据样品数据色谱图色谱图编辑色谱峰数据第28页/共37

8、页第二十八页，编辑于星期日：十四点 二十分。数据分析色谱峰手动积分第29页/共37页第二十九页，编辑于星期日：十四点 二十分。数据分析报告打印报告主峰数据主峰要求：分离度1.50.95对称因子 1.05塔板数8000以上第30页/共37页第三十页，编辑于星期日：十四点 二十分。数据分析患者丙戊酸钠血药浓度检测色谱图环己烷羧酸丙戊酸钠空白标准品色谱峰实例第31页/共37页第三十一页，编辑于星期日：十四点 二十分。注意事项 氘灯是易耗品，分析前应最后开灯，不分析样品应及时关闭氘灯；第32页/共37页第三十二页，编辑于星期日：十四点 二十分。注意事项 流动相不要使用多日存放的蒸馏水，一般不易超过三天（易长菌），影响基线平衡； 仪器使用后，应用90%水冲洗柱子和系统0.5-1h，流量1.0mL/min，再用100甲醇冲洗0.5h；第33页/共37页第三十三页，编辑于星期日：十四点 二十分。注意事项 开机时，打开排气阀，设置流动相为100%水，泵流量5.0mL/min，若此时显示压力10bar，则应更换排气阀里的过滤白头。第34页/共37页第三十四页，编辑于星期日：十四点 二十分。注意事项 流速突然变大或突然变小会导致柱压的突然改变，时间久了