抗氧化肽的研究进展

1、目录抗氧化肽的种类及其制备方法抗氧化多肽的发展前景及存在的问题抗氧化肽的作用机理体外抗氧化性检测方法 自1956 年英国科学家Harman 提出自由基理论以来，随着研究的深入，人们对自由基过量而导致的机体衰老以及对多种疾病的诱导作用有了更深的认识。而高活性的抗氧化剂的摄入是清除体内过量自由基的一个有效方法。 目前生产量最大的是化学抗氧化剂，但因明显的毒副作用，导致其使用受到限制。随着人们对食品安全和抗氧化剂安全要求的提高,人们开始把目光转向天然抗氧化剂。 与化学抗氧化剂相比，天然抗氧化剂的安全性要远高于前者，因而越来越受到人们的重视。在对天然抗氧化剂的研究中，抗氧化肽是目前的热门方向之一。 食

2、物蛋白质经蛋白酶温和水解后产生的肽，不仅比蛋白质本身更容易被人体消化吸收,还可促进人体对其他营养素如钙和铁的吸收，更重要的是，有些肽类还具有抗氧化、免疫调节、降血压、降血脂、抗菌等生理活性这些具有生理调节活性的肽，称为生物活性肽。 抗氧化性是近年来国内外科学工作者对多肽生物活性研究中的一个新的研究课题， 来源于食物蛋白的抗氧化肽，不但具有良好的抗氧化活性，且安全性极高, 因而在保健食品以及生物医药领域的应用前景十分广阔。1、抗氧化肽的种类及其制备方法天然抗氧化肽人工合成抗氧化肽蛋白降解产生抗氧化肽抗氧化肽 天然抗氧化肽是指生物体内天然存在的抗氧化性肽，主要有肌肽和谷胱甘肽。肌肽是典型的抗氧化活

3、性小肽，其抗氧化作用主要表现在能清除自由基、抑制脂质过氧化反应以及提高机体其他系统的抗氧化能力。 谷胱甘肽(Glutathione，GSH)在谷胱甘肽还原酶的作用下分解体内的脂质过氧化物，阻断活性氧自由基对机体进一步损伤，是生物体内重要的活性氧自由基清除剂。 人工合成抗氧化肽的途径主要有化学合成和酶法合成。化学合成是以氨基酸或小肽为原料，用固相液相合成法定向合成多肽。酶法合成主要是以氨基酸和小肽为底物，在合成酶的催化作用下，合成目的抗氧化肽。酶水解法发酵法酸碱水解法蛋白降解产生抗氧化肽的方式 酸碱水解法酸碱水解法 酸碱水解制备活性肽会对氨基酸产生破坏作用，且水解产物分子组成差异大，生产费用高，

4、因此该法已逐步被淘汰。 酶水解法酶水解法 酶水解法是利用蛋白水解酶在一定条件下催化水解蛋白质，降解成不同链长的小分子多肽，与酸碱水解反应相比，酶水解法具有条件温和、易于控制、专一性较强、副产物少等优点，因此酶解法应用最多。 发酵法与酶解法相比，能将微生物产酶和酶水解工艺同时进行，降低了成本，且微生物产生的端肽酶对肽末端具修饰作用，使制得的肽不但没有苦味，还具有发酵的天然芳香味。 刘明等用固态发酵法制备出大豆抗氧化肽，具有较强的还原能力，能清除羟自由基，抑制邻苯三酚自氧化，并对脂质过氧化有一定的抑制能力。2、抗氧化肽的作用机理 OH、O2- 1O2、H2O2 等都是生物体正常有氧代谢过程中的产物

5、。在正常状态下，体内自由基维持在一定水平，处于动态平衡之中，并不表现出对组织、细胞功能的损伤，相反还在杀菌、免疫调节等方面具有而重要的意义。然而，随着年龄的增长，或在某些病理状态下以及机体受到创伤时，体内抗氧化酶活性下降，过多的自由基不能被及时清除而堆积在细胞内，就会破坏细胞膜、蛋白质、引起线粒体DNA 的氧化、损伤、导致氧化应激等，从而引发疾病。 大量研究表明，抗氧化肽具有清除体内自由基的功能，能减轻自由基对机体的损伤，是一种理想的天然抗氧化剂，也称为自由基清除剂。 抗氧化肽对紫外线引起的线粒体的损伤和自由基诱导的脂质过氧化具有明显的保护作用此外，抗氧化肽的作用机理还包括给抗氧化酶提供氢、螯

6、合金属离子等。 由于多肽的氨基酸构成和排列顺序不同，其抗氧化作用机理可能存在一定的差异。目前，国内外对肌肽和谷胱甘肽的抗氧化机理研究较为明确。 肌肽主要表现在其侧链上的组氨基酸残基可做为氢的受体，起到清除自由基的作用。肌肽分子中的咪唑基具有螯和金属离子作用，能有效的阻止金属离子的催化作用。 谷胱甘肽主要是通过其巯基氧化- 还原态的转换，作为可逆的供氢体，在细胞内的水相中起到抗氧化保护作用。另外，谷胱甘肽还可以复活被活性氧损伤的巯基酶和参与体内氧化还原过程，能与过氧化物和自由基结合，抑制活性氧对巯基造成损伤，保护细胞膜中含巯基的蛋白质，并阻止自由基引起器官损伤和各种疾病。3、体外抗氧化性检测方法

7、抗氧化肽清除羟自由基(oH)的测定H2o2：诱导的红细胞氧化溶血实验清除02-能力测定清除1，1一二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的能力脂质过氧化检测方法体外抗氧化性检测方法 抗氧化肽清除羟自由基(oH)的测定 脱氧核糖一铁体系法，用分光光度计在波长532 nm处测吸光度。此外还有二甲基亚砜法、化学发光法和电子自旋共振法(ESR)，其中在ESR法中，OH可与5，5一二甲基一1一吡咯啉(DMPO)生成加合物(DMPO OH)，该加合物可以通过ESR分光计检测。抗氧化物能够与DMPO争夺OH，减弱DMPOOH信号强度，从而反映出抗氧化肽的活性。 H2o2：诱导的红细胞氧化溶血实验 韩立强等研究肌肽

8、的抗氧化特性，从绵羊颈静脉中采血制备红细胞，取红细胞悬液，加入不同浓度的肌肽及过氧化氢，以过氧化氢和红细胞为对照组，于415 nm处测定吸光度，以对照组为100溶血，计算抑制率。 清除02-能力测定 超氧阴离子自由基是生命活动代谢过程中产生的一种重要的自由基，具有很强的氧化能力。测定中采用硝基四氮唑盐(NBT)还原法，还可采用邻苯三酚自氧化法。 清除1，1一二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的能力 1，1一二苯基苦基苯肼自由基是一种很稳定的以氮为中心的自由基，通过检测生物试剂对DPPH自由基的清除能力就可反映出其抗氧化能力的强弱。DPPH自由基有个单电子，在330 nm和525nm处具有强吸收性

9、，其乙醇水溶液呈深紫色，也可以用电子自旋共振(ESP)法来检测，其原理与清除羟自由基的原理相同。 脂质过氧化检测方法 在自由基的作用下。生物膜上的多不饱和脂肪酸(PUFA)易发生脂质过氧化反应，其检测方法主要有硫代巴比妥(TBA)法和硫酸氰铁法。4、抗氧化多肽的发展前景及存在的问题 在功能性食品中的应用 食品在贮运过程中，很容易与空气中的氧发生氧化反应，特别是油脂的酸败，食品色泽的改变，维生素和不饱和物质的破坏，而导致食品营养价值的下降和品质的劣化，食用这种食品可引起食物中毒，长期食用可加速人体衰老。而抗氧化肽能够阻止或延缓食品氧化，可以直接添加到食品中,用于改善食品品质、延长食品的保质期。在

10、化妆品和医药工业中的应用 随着现代化的发展，生存环境的恶化已经威胁到人们的健康。手机、电脑、微波炉等释放出的电滋波，吸烟过程中产生的焦油和烟气，汽车的尾气，烧烤食品等都可产生大量的自由基，即环境中的辐射、高温、光解和化学物质等可诱导共价键的断裂而产生大量的自由基。这些过剩的自由基会引发很多疾病，导致人体皮肤和器官的衰老。而抗氧化肽具有抑制紫外线引起的线粒体损伤和清除身内过剩自由基的功能，可将其用于化妆品和医药的工业生产中，起到预防和治疗自由基诱发的各种疾病，延缓人体衰老的作用。 随着生活水平的提高，人们已逐渐将食品消费的注意力转向保健和延年益寿等方面上。而抗氧化肽具有消除自由基、抑制或减缓氧化

11、反应的特点，可用于改善食品品质、延长食品的保质期，在生物体内它可减轻自由基对机体的损伤等，故抗氧化肽的应用前景非常广阔。 我国抗氧化活性肽的应用仍处于初级开发应用阶段,对其研究还仅仅停留在实验室的生产和提取阶段。抗氧化能力的测定方法很多,但是能让学者们通用的方法很少,使得各自实验相对缺乏可比性。 目前国外用来制备抗氧化肽的水解酶纯度高,酶活性高，而国内商业酶纯度和活性都有待提高。从已分离的抗氧化肽来看,国外酶解后的肽含量很高,达50%以上,肽分子量却很小,基本上集中在几百道尔顿,而国内肽含量比较低,肽分子量比较大,导致抗氧化能力下降。 肽的氨基酸序列间同源性较差,增加了分离提取新抗氧化肽的难度。此外,生产分子量较小的抗氧化肽是必然趋势,但其对分析制备技术提出高要求。 虽然越来越多的研究证实，肽对自由基有清除作用，但