工科分析化学第十讲高效液相色谱法专业级随堂讲义

1、第十章第十章 高效液相色谱法高效液相色谱法 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) 10101 1 概述概述 一、一、高效液相色谱法高效液相色谱法概述概述 高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLCHPLC）吸取了气相色谱与经典液相色谱优吸取了气相色谱与经典液相色谱优点点，并用现代化手段加以改进。，并用现代化手段加以改进。它是在它是在经典液相色谱经典液相色谱基础上，基础上，引入了引入了气相色谱的理论气相色谱的理论，在，在技术上技术上采用了高压泵、高效固定相采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，和高灵敏度检测器，因而具备因而具备速度快、效率高

2、、灵敏度高、操速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的作自动化的特点特点，因此得到迅猛的发展。因此得到迅猛的发展。目前已成为应用极为目前已成为应用极为广泛的化学分离分析重要手段。广泛的化学分离分析重要手段。二进样系统二进样系统 高效液相色谱柱高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多比气相色谱柱短得多（约（约530cm），所），所以柱外展宽（又称柱以柱外展宽（又称柱外效应）较突出。进外效应）较突出。进样系统是引起柱前展样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对高效液相色谱法中对进样技术要求较严。进样技术要求较严。 进样装置进样装置： 注射器进样；注射器进样； 高压定量进样阀高

3、压定量进样阀；三、分离系统三、分离系统色谱柱色谱柱 色谱柱包括柱管与固定相两部分。柱管材料有色谱柱包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜，内衬光滑的聚合材料。玻玻璃、不锈钢、铝、铜，内衬光滑的聚合材料。玻璃管耐压有限，故金属管用得较多。一般色谱柱长璃管耐压有限，故金属管用得较多。一般色谱柱长5 530cm30cm，内径为，内径为4 45mm5mm，凝胶色谱柱内径，凝胶色谱柱内径3 312mm12mm，制备柱内径较大，可达制备柱内径较大，可达25mm 25mm 以上。以上。一般在分离前备一般在分离前备有一个有一个前置柱前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全一样，前置柱内填充物和分离柱

4、完全一样，这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保证分离柱的性能不受影响保证分离柱的性能不受影响。 1 1高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较 高速：高速：在分析速度上比经典液相色谱法在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍快数百倍。由。由于于经典经典色谱是色谱是重力加料重力加料，流出速度极慢；而，流出速度极慢；而高效液相高效液相色谱色谱配备了配备了高压输液高压输液设备，流速最高可达设备，流速最高可达 10103 3cmcmm

5、inmin-1-1. . 例如例如分离氨基酸，用经典色谱法，柱长约分离氨基酸，用经典色谱法，柱长约170cm170cm，柱，柱径径0.9cm0.9cm，流动相速度为，流动相速度为30cm30cm3 3h h-1-1，需用，需用2020多小时才能多小时才能分离出分离出2020种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需lhlh之之内即可完成；内即可完成；高效：高效：其柱效可达其柱效可达3 3万塔板万塔板/ /米以上（气相色谱约米以上（气相色谱约2000 2000 塔板塔板/ /米），分离效率大大提高了。米），分离效率大大提高了。四检测系统四检测系统 在液相色谱中，有两种基

6、本类型的检测器。一类是在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。一类是溶溶质型检测器质型检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有应，属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等紫外、荧光、电化学检测器等。另一类是另一类是总体检测器总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光，电导检示差折光，电导检测测器等。器等。p163（l）紫外检测器）紫外检测器 （2）荧光检测器）荧光检测器 （3）示差折光率检测器）示差折光率检测器（4）电导检测器）电

7、导检测器 2 2高效液相色谱法与气相色谱法的比较高效液相色谱法与气相色谱法的比较 （l l）气相色谱法气相色谱法分析对象只限于气体和沸点较低的化合物，分析对象只限于气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的它们仅占有机物总数的2020。对于占有机物总数近。对于占有机物总数近8080的那的那些高沸点、热稳定性差、离子型化合物及摩尔质量大的物质，些高沸点、热稳定性差、离子型化合物及摩尔质量大的物质，目前主要采用目前主要采用高效液相色谱法高效液相色谱法进行分离和分析；进行分离和分析； (2)(2)气相色谱气相色谱采用流动相是采用流动相是惰性气体惰性气体，它，它与组分不产生相与组分不产生相互作用力，

8、仅起互作用力，仅起运载作用运载作用。而。而高效液相色谱高效液相色谱法中法中流动相对组流动相对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争，分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争，流动相对分离起很大作用，因此，流动相对分离起很大作用，因此，可选用不同极性的液体可选用不同极性的液体，选择余地大，相当于选择余地大，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便；这为选择最佳分离条件提供了极大方便； （3）气相色谱一般都在）气相色谱一般都在较高温度较高温度下进行的，而高效液相色下进行的，而高效液相色谱法则经常可在谱

9、法则经常可在室温条件室温条件下工作；下工作； 高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要的主要缺点缺点。 二、二、 影响液相色谱分离的因素影响液相色谱分离的因素 气相色谱所讨论的气相色谱所讨论的基本概念及基本理论基本概念及基本理论，如：保留，如：保留值，分配系数，分配比，分离度，塔板理论，速率理值，分配系数，分配比，分离度，塔板理论，速率理论等论等与液相色谱一致与液相色谱一致，但液相色谱流动相为液体，其，但液相色谱流动相为液体，其扩散系数，粘度，密度等与气体均有很大的扩散系数，粘度，密度等与气体均有很大的差别差别，都，都将对色谱分

10、析过程产生影响。将对色谱分析过程产生影响。 三、提高液相色谱分离效率的措施三、提高液相色谱分离效率的措施1、采用、采用小而均匀小而均匀的填料（担体），减小的填料（担体），减小dp, 2、减小减小填料填料孔穴深度孔穴深度，且，且孔径大孔径大；3、用、用低粘度低粘度溶剂作流动相；溶剂作流动相；4、适当、适当降低降低流动相流动相流速流速；5、适当、适当提高柱温提高柱温；6、减小减小柱前柱后柱前柱后死体积死体积。10102 2 高效液相色谱仪高效液相色谱仪 高效液相色谱仪一般可分高效液相色谱仪一般可分为为4 4个主要部分个主要部分：高压输液系高压输液系统，进样系统，分离系统和统，进样系统，分离系统和检

11、测系统检测系统, ,另有另有辅助装置：如辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据梯度淋洗，自动进样及数据处理等。处理等。其其工作过程工作过程如下：如下：首先高压泵将贮液器中流动首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱相溶剂经过进样器送入色谱柱，当注入欲分离的样品时，柱，当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。到液相色谱图。 一高压输液系统一高压输液系统 由于

12、高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。一般一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成成，其中，其中高压输液泵是核心部件高压输液泵是核心部件。对于一个好的高压输液泵。对于一个好的高压输液泵应符合应符合密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等等要求要求。 常用的输液泵分为常用的输

13、液泵分为恒流泵恒流泵和和恒压泵恒压泵两种。恒流泵两种。恒流泵特点特点是在是在一定操作条件下，一定操作条件下，输出流量保持恒定输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变而与色谱柱引起阻力变化无关化无关；恒压泵是指能保持输出压力恒定恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色，但其流量则随色谱系统阻力而变化谱系统阻力而变化，故保留时间的重视性差，它们各有优缺，故保留时间的重视性差，它们各有优缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流泵又称机械泵恒流泵又称机械泵，它，它又分又分机械注射泵机械注射泵和和机械往复泵机械往复泵两种，应用最多的是机械往复两种，应用最多的是机械往复泵。泵

14、。四检测系统四检测系统 在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。一类是在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。一类是溶溶质型检测器质型检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有应，属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等紫外、荧光、电化学检测器等。另一类是另一类是总体检测器总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光，电导检示差折光，电导检测测器等。器等。p163（l）紫外检测器）紫外检测器 （2）荧光检测器）荧光检测器 （3）示差折光

15、率检测器）示差折光率检测器（4）电导检测器）电导检测器 五、附属系统五、附属系统 它包括它包括脱气、梯度淋洗、恒温、自动进样、馏分收集脱气、梯度淋洗、恒温、自动进样、馏分收集以及数据处理等以及数据处理等装置。其中装置。其中梯度淋洗装置梯度淋洗装置是高压液相色谱是高压液相色谱仪中尤为重要的附属装置；仪中尤为重要的附属装置；梯度淋洗（梯度洗脱）：是在分离过程中逐渐改变流动相的梯度淋洗（梯度洗脱）：是在分离过程中逐渐改变流动相的组成，增加洗脱能力的一种方法。组成，增加洗脱能力的一种方法。主要是通过梯度装置将主要是通过梯度装置将两种（或更多）极性不同的溶剂在分离过程中按一定程序两种（或更多）极性不同的

16、溶剂在分离过程中按一定程序连续改变流动相中溶剂的的配比和极性。类似于气相色谱连续改变流动相中溶剂的的配比和极性。类似于气相色谱程序升温的作用；程序升温的作用；优点：优点：通过改变极性来改变分离组分的分离因素，以提高分通过改变极性来改变分离组分的分离因素，以提高分离效果，增加分辨能力，改善峰形，同时可缩短分离时间。离效果，增加分辨能力，改善峰形，同时可缩短分离时间。 右图表示用二元梯度来分右图表示用二元梯度来分离几种氨基甲酸酯类杀虫剂，离几种氨基甲酸酯类杀虫剂，采用采用15cm的的C18柱，溶剂组柱，溶剂组成：成：CH3CN-H2O， 15分钟分钟内从内从10%（v/v）随时间改变）随时间改变至

17、至50%10103 3 高效液相色谱法的类型高效液相色谱法的类型 及其分离原理及其分离原理液液分配液液分配色谱色谱 （LLPC）化学键合相化学键合相色谱色谱(CBPC)液固吸附液固吸附色谱色谱(LSAC)离子交换离子交换色谱色谱(IEC)离子对离子对色谱色谱(IPC)离子离子色谱色谱(IC)尺寸排阻尺寸排阻色谱色谱(SEC) (凝胶色谱法凝胶色谱法 Gel C)亲和亲和色谱色谱(AC)高高效效液液相相色色谱谱法法类类型型一、液液分配色谱法（一、液液分配色谱法（LLPC） 及化学键合相色谱及化学键合相色谱(CBPC)1分离原理分离原理 分离原理基本与分离原理基本与液液萃取液液萃取相同相同，都是根

18、据物质在两种互都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。与不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。与气气液色谱液色谱一样一样，固定液，固定液是是涂渍涂渍在担体表面；在担体表面；与与气液色谱气液色谱的的不同不同之处之处在在于，液相色谱的流动相种类对分配系数有较大的影响。于，液相色谱的流动相种类对分配系数有较大的影响。 2、正相分配色谱和反相分配色谱、正相分配色谱和反相分配色谱 为了避免固定液的流失。要求流动相尽可能不与固定相互溶，为了避免固定液的流失。要求流动相尽可能不与固定相互溶，而且两相的极性差别越显著越好。根据所用流动相和固定相的极而且两相的极性差别越显著

19、越好。根据所用流动相和固定相的极性程度，将其分为性程度，将其分为正相分配色谱正相分配色谱和和反相分配色谱反相分配色谱； 正相分配色谱：正相分配色谱：流动相的极性小于固定相的极性。流动相的极性小于固定相的极性。它适用于极它适用于极性化合物的分离。其流出顺序是按极性顺序流出；性化合物的分离。其流出顺序是按极性顺序流出； 反相分配色谱：反相分配色谱：流动相的极性大于固定相的极性。流动相的极性大于固定相的极性。它适用于非它适用于非极性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好相反。极性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好相反。 3、化学键合相色谱、化学键合相色谱 为了更好解决固定液在载体上流失问题。产生

20、了化为了更好解决固定液在载体上流失问题。产生了化学键合固定相。它是将各种不同学键合固定相。它是将各种不同有机基团通过化学反应有机基团通过化学反应键合到载体表面键合到载体表面的一种方法，代替了固定液的机械涂布，的一种方法，代替了固定液的机械涂布，它的它的分离机理：分离机理：一般认为一般认为分配和吸附分配和吸附两种作用兼有；两种作用兼有； 可以认为它的出现是液相色谱法的一个重大突破，可以认为它的出现是液相色谱法的一个重大突破，对液相色谱的迅速发展起着重大作用对液相色谱的迅速发展起着重大作用 。它是目前应用最它是目前应用最广泛的一种固定相。而液液分配色谱已很少采用。广泛的一种固定相。而液液分配色谱已

21、很少采用。二、液固吸附色谱法二、液固吸附色谱法(LSAC)(LSAC)1分离原理分离原理 以以固体吸附剂固体吸附剂作为固定相，吸附剂通常是些多孔的固体作为固定相，吸附剂通常是些多孔的固体颗粒物质，在它们的表面存在吸附中心。当流动相通过固颗粒物质，在它们的表面存在吸附中心。当流动相通过固定相时，吸附剂表面的活性中心就要吸附流动相分子。同定相时，吸附剂表面的活性中心就要吸附流动相分子。同时，当试样分子（时，当试样分子（X）被流动相带入柱内，只要它们在固定）被流动相带入柱内，只要它们在固定相有一定程度的保留就要取代已被吸附的流动相溶剂分子。相有一定程度的保留就要取代已被吸附的流动相溶剂分子。于是，在

22、固定相表面发生于是，在固定相表面发生竞争吸附竞争吸附: X + nSad = Xad + nSnadnadadSXSXK其中其中Kad为吸附平衡常数为吸附平衡常数， Kad值大表示组分在吸附剂上保留值大表示组分在吸附剂上保留强，难于洗脱。强，难于洗脱。Kad值小值小,则保留值弱，易于洗脱。试样中各则保留值弱，易于洗脱。试样中各组分据此得以分离。组分据此得以分离。三、离子交换色谱法（三、离子交换色谱法（IECIEC） 1分离原理分离原理 此法是利用此法是利用离子交换原理离子交换原理和和液相色谱技术液相色谱技术的结合来测定溶的结合来测定溶液中液中阳离子和阴离子阳离子和阴离子的一种分离分析方法。的一

23、种分离分析方法。 离子交换色谱法是利用不同待测离子对固定相亲和力的离子交换色谱法是利用不同待测离子对固定相亲和力的差别来实现分离的。差别来实现分离的。其固定相采用离子交换树脂，树脂上其固定相采用离子交换树脂，树脂上分布有固定的带电荷基团和可交换的离子。待分析物质电分布有固定的带电荷基团和可交换的离子。待分析物质电离后产生的离子与树脂上可游离的平衡离子进行可逆交换，离后产生的离子与树脂上可游离的平衡离子进行可逆交换，其交换反应通式如下：其交换反应通式如下： 阳离子交换：阳离子交换： RSO3-H+M+RSO3-M+ H+一般形式：一般形式： R一一AB RBArrABABABK/K KB/AB/

24、A越大，说明越大，说明B B离子交换能力越大，越易保留而难于洗脱。一般离子交换能力越大，越易保留而难于洗脱。一般说来，说来，B B离子电荷越大，水合离子半径越小，离子电荷越大，水合离子半径越小，K KB/AB/A值就越大。值就越大。四、离子色谱法（四、离子色谱法（IC） 离子色谱法是由离子交换色谱法离子色谱法是由离子交换色谱法派生出来的一种分离方法。派生出来的一种分离方法。离子交换离子交换分离柱分离柱，流动相流动相为电解质洗脱液，电为电解质洗脱液，电导导检测器。检测器。由于被测离子的电导信号由于被测离子的电导信号被强电解质流动相的高背景电导信号被强电解质流动相的高背景电导信号掩没而无法检测。因

25、此，就在离子交掩没而无法检测。因此，就在离子交换分离柱后加一根抑制柱，抑制柱中换分离柱后加一根抑制柱，抑制柱中装填与分离柱电荷相反的离子交换树装填与分离柱电荷相反的离子交换树脂。脂。通过分离柱后的样品再经过抑制通过分离柱后的样品再经过抑制柱，使具有高背景电导的流动相转变柱，使具有高背景电导的流动相转变成低背景电导的流动相，从而用电导成低背景电导的流动相，从而用电导检测器可直接检测各种离子的含量。检测器可直接检测各种离子的含量。例如：例如：样品为样品为阳离子阳离子，用，用无机酸作流动相无机酸作流动相，抑制柱为高容量的强，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换剂。当试样经阳离子交换剂的分离柱后，随流碱性

26、阴离子交换剂。当试样经阳离子交换剂的分离柱后，随流动相进入抑制柱，在抑制柱中发生两个重要反应：动相进入抑制柱，在抑制柱中发生两个重要反应： R R+ +OHOHH H+ +ClCl- - -R-R+ +ClCl十十H H2 2O O 流动相流动相 R R+ +一一OHOH- -M M+ +ClCl- -M-M+ +OHOHR R+ +ClCl- - 试样试样 由反应可见：经抑制柱后，一方面将大量酸转变为电导很由反应可见：经抑制柱后，一方面将大量酸转变为电导很小的水，小的水，消除了流动相本底电导的影响消除了流动相本底电导的影响。同时，又将样品阳离。同时，又将样品阳离子子M+转变成相应的碱转变成相

27、应的碱，由于，由于OH-离子的淌度离子的淌度为为Cl-离子的离子的2.6倍倍，提高了所测阳离子电导的检测灵敏度。对于阴离子样品也有相提高了所测阳离子电导的检测灵敏度。对于阴离子样品也有相似的作用机理，也是水溶液中阴离子分析的最佳方法；似的作用机理，也是水溶液中阴离子分析的最佳方法； 在分离柱后加一个抑制柱的离子色谱亦在分离柱后加一个抑制柱的离子色谱亦称为抑制型离子色称为抑制型离子色谱或称双柱离子色谱谱或称双柱离子色谱。由于抑制柱要定期再生，而且谱带在通。由于抑制柱要定期再生，而且谱带在通过抑制柱后会加宽，降低了分离度。后来，过抑制柱后会加宽，降低了分离度。后来，Frits等人提出采用等人提出采

28、用电导率极低的溶液，例如电导率极低的溶液，例如110-4510-4moldm-3苯甲酸盐苯甲酸盐或邻苯二甲酸盐的稀溶液作流动相，称为或邻苯二甲酸盐的稀溶液作流动相，称为非抑制型离子色谱或非抑制型离子色谱或单柱离子色谱。单柱离子色谱。五、离子对色谱法（五、离子对色谱法（IPC） 1分离原理分离原理 离子对色谱法是将一种（或数种）与溶质离子电荷相离子对色谱法是将一种（或数种）与溶质离子电荷相反的离子（称反的离子（称对离子或反离子对离子或反离子）加到流动相或固定相中，）加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成离子对，从而控制溶质离子保留使其与溶质离子结合形成离子对，从而控制溶质离子保留行为的一种

29、色谱法；行为的一种色谱法； 离子对色谱机理，至今仍不十分明确，已提出三种机离子对色谱机理，至今仍不十分明确，已提出三种机理：理：离子对形成机理离子对形成机理；离子交换机理离子交换机理；离子相互作用机理；离子相互作用机理； 例如例如离子对形成机理：离子对形成机理：假如有一离子对色谱体系，固假如有一离子对色谱体系，固定相为非极性键合相，流动相为水溶液，并在其中加入一定相为非极性键合相，流动相为水溶液，并在其中加入一种电荷与组分离子种电荷与组分离子A-相反的离子相反的离子B+，B+离子由于静电引力离子由于静电引力与带负电的组分离子生成疏水性离子对化合物与带负电的组分离子生成疏水性离子对化合物A-B+

30、。 由于离子对化合物由于离子对化合物A-B+具有疏水性，因而被非极具有疏水性，因而被非极性固定相（有机相）提取。组分离子的性质不同，性固定相（有机相）提取。组分离子的性质不同，与反离子与反离子形成离子对的能力大小不同形成离子对的能力大小不同以及以及形成的形成的离子对疏水性质不同离子对疏水性质不同，导致各组分离子在固定相，导致各组分离子在固定相中滞留时间不同，因而出峰先后不同；中滞留时间不同，因而出峰先后不同； 离子对色谱法是分离分析强极性有机酸和离子对色谱法是分离分析强极性有机酸和有机碱的极好方法。有机碱的极好方法。有机相有机相水相BABA 2键合相反相离子对色谱法键合相反相离子对色谱法 离子

31、对色谱法类型很多，根据流动相和固定相离子对色谱法类型很多，根据流动相和固定相的极性可分为反相离子对和正相离于对色谱法。的极性可分为反相离子对和正相离于对色谱法。其其中以键合相中以键合相反相反相离子对色谱法最重要。离子对色谱法最重要。这种色谱法这种色谱法的固定相采用非极性的疏水键合相如十八烷基键的固定相采用非极性的疏水键合相如十八烷基键合相（合相（ODS）等，流动相为加有平衡离子（反离）等，流动相为加有平衡离子（反离子）的极性溶液（如甲醇一水或乙睛一水）。子）的极性溶液（如甲醇一水或乙睛一水）。 六、尺寸排阻色谱法（六、尺寸排阻色谱法（SECSEC） 尺寸（空间）排阻色谱法又称凝胶色谱法尺寸（空间）排阻色谱法又称凝胶色谱法，主要用于较，主要用于较大分子的分离。与其他液相色谱方法原理不同，它不具有吸大分子的分离。与其他液相色谱方法原理不同，它不具有吸附、分配和离子交换作用机理，而是附、分配和离子交换作用机理，而是基于试样分子的尺寸和基于试