[医药卫生]HAV余ppt课件

1、甲型肝炎与甲肝减毒活疫苗甲型肝炎与甲肝减毒活疫苗 浙江普康生物技术股份浙江普康生物技术股份 重庆智飞生物制品重庆智飞生物制品 浙江普康生物技术股份位于美丽的西子湖畔，是以浙江省医学科学院为技术依托建立起来的高科技企业。公司创建于1991年。消费甲型肝炎减毒活疫苗(H2减毒株)冻干粉针剂。甲型肝炎减毒活疫苗甲型肝炎减毒活疫苗H2毒株毒株)发明者、发明者、中科院院士、公司董事长毛江森研讨员中科院院士、公司董事长毛江森研讨员国际先进程度的消费、检验设备一一 概述：概述：.甲型肝炎是由甲型肝炎病毒甲型肝炎是由甲型肝炎病毒HAVhepatitis A virus引起的引起的急性传染性疾病。急性传染性疾病

2、。 甲型肝炎世界各地都有发病，年发病数甲型肝炎世界各地都有发病，年发病数200万。万。经济欠兴隆国家，特别是热带、亚热带地域，幼儿期普遍受经济欠兴隆国家，特别是热带、亚热带地域，幼儿期普遍受感染。感染。 我国是甲肝高发的国家，不少地域甲肝年发病率我国是甲肝高发的国家，不少地域甲肝年发病率100/10万万。90年代以前全国年发病年代以前全国年发病60 100万例。万例。 青少年青少年 及儿童是主要的发病对象。近几年，成年人的发病及儿童是主要的发病对象。近几年，成年人的发病率也呈上升趋势。率也呈上升趋势。流行特征流行特征1：甲肝每甲肝每5-10年为一个流行周期，冬春季是高发季节年为一个流行周期，冬

3、春季是高发季节。甲肝的流行与社会经济的兴隆和环境卫生程度。甲肝的流行与社会经济的兴隆和环境卫生程度亲密相关。亲密相关。甲肝病毒感染率，开展中国家高，兴隆国家低。甲肝病毒感染率，开展中国家高，兴隆国家低。我国沿海地域、北方地域高，南方地域低。我国沿海地域、北方地域高，南方地域低。免疫程度低者，当水、食物等被病毒污染时，就免疫程度低者，当水、食物等被病毒污染时，就比较容易引起流行。比较容易引起流行。流行特征流行特征2：埋伏期和发病后几天内的粪便和血液有传染性埋伏期和发病后几天内的粪便和血液有传染性。甲肝病毒从粪便中排出起始于发病前。甲肝病毒从粪便中排出起始于发病前1-2周，周，发病时达顶峰。发病时

4、达顶峰。甲肝的流行通常发生在人口密集的群体。如幼甲肝的流行通常发生在人口密集的群体。如幼托机构，学校，部队，厂矿等。托机构，学校，部队，厂矿等。病毒可经过人直接接触或经过被病毒污染的食病毒可经过人直接接触或经过被病毒污染的食物、饮水和饮料等传播；多次发现生吃贝壳类物、饮水和饮料等传播；多次发现生吃贝壳类食物而引发流行。食物而引发流行。全球最严重的一次甲肝迸发流行：全球最严重的一次甲肝迸发流行： 1988年上海甲肝迸发，集中发病年上海甲肝迸发，集中发病32万例，发病率万例，发病率4082.6/10万。万。涉及江苏、浙江等省。涉及江苏、浙江等省。 20-39岁年龄占发病总数的岁年龄占发病总数的83

5、.5%。 生食被生食被HAV污染的毛蚶所传播。污染的毛蚶所传播。二、甲肝疫苗的种类二、甲肝疫苗的种类1.甲肝灭活疫苗：甲肝灭活疫苗：Merck默沙东的默沙东的Vaqta；GSK葛兰素史克的葛兰素史克的Havrix；Baster巴斯德的巴斯德的Bavition。甲醛灭活有效的灭活方法；可诱导产生高程度甲醛灭活有效的灭活方法；可诱导产生高程度的血清抗体和阳转率；但无法阻止的血清抗体和阳转率；但无法阻止HAV在消化道内在消化道内的一级繁衍；添加的一级繁衍；添加HAV的阴性感染。的阴性感染。2.甲肝减毒活疫苗：普康的甲肝减毒活疫苗：普康的H2 strain(H2毒株毒株,长春长春的的 L-A1 str

6、ainL-A1毒株。毒株。平安性好，无毒力返祖；免疫反响全面，维护作用平安性好，无毒力返祖；免疫反响全面，维护作用耐久；可阻止耐久；可阻止HAV在消化道内的一级繁衍。在消化道内的一级繁衍。二、甲肝疫苗的种类二、甲肝疫苗的种类 3.结合疫苗：结合疫苗：HA-Hb疫苗；疫苗； HA-Typhoid甲甲肝肝-伤寒疫苗；毒粒伤寒疫苗；毒粒HA疫苗。疫苗。 4.研制中的研制中的HA分子疫苗：分子疫苗： 亚单位疫苗：重组亚单位疫苗：重组DNA技术，技术，Vp1, Vp3的载体的载体表达表达 合成肽疫苗：合成肽疫苗：Vp1, Vp2, Vp3 存在构象依赖性存在构象依赖性 HAV空壳疫苗：用重组痘苗病毒表达

7、的核壳多空壳疫苗：用重组痘苗病毒表达的核壳多聚蛋白量较少。聚蛋白量较少。甲肝减毒活疫苗的研讨Produced By （生产商）HAV strain（甲肝病毒毒株）Culture Cell Line（细胞生产工艺）Pukang Biotech CO. (China)（中国普康）H2 Strain（H2菌株）NMK, 15 passages; 5pKMB17 5passages；Ref: Mao J.S., et al. “ Primary Study of Attenuated Live Hepatitis A Vaccine (H2 strain) in Humans”. The Journa

8、l of Infectious Diseases, 159(4):621-624, 1989.摘自：毛江森，“人用甲肝减毒活疫苗（H2菌株）的基础研究”.传染病杂志， 159(4):621-624, 1989Merck Co., （默沙东）(USA)Not success to marketing（市场运营失败）CR 326-FFehk-6, 15 passages; MRC-5 16 passagesRef: Provost P.J. at al. “Studies in Chilpamzees of live, attenuated hepatitis A vaccine candidat

9、e”. Proc Soc Exp Biol Med., 1983, 172:357-363.甲肝灭活疫苗的研讨Produced By （生产商）HAV strain（甲肝病毒毒株）Culture Cell Line（细胞生产工艺）Smith-Kline-Beeech Co., Havrix (Belgium)（史克）HM-175AGMK passages, MRC-5 propagation(MRC-5繁殖）Ref: Ralf Clemen, et al.”Clinical Experience with an inactivated hepatitis A vaccine”. JID, 19

10、95, 171 (Supl 1)Merck Co., Vapta(USA)CR326-FFehk-6, 15 passages;MRC-5, 16 passages.Ref: Brian L., et al. “Duration of protection from clinical hepatitis A disease after vaccination with VAQTA”. J of Med Virology; 1996, 49: 235-241.Paster Co., Avaxim(France)GBMHuman Fetal Kidney Cell passages（人类胎儿肾细胞

11、传代）, MRC-5 propag.Ref: Daniel G., et al. “Good immunogencity of GBM strain inactivated hepatitis A vaccine in health man adults”. Vaccine 1996, 13(2): 220-224.甲肝减毒活疫苗的优点 活病毒增殖与死抗原刺激的综协作用 活疫苗不但能产生体液免疫抗体，还能诱导产生细胞免疫. 活疫苗有很强的免疫回想反响。 活疫苗维护作用耐久。实践察看已达15年以上三、甲肝活疫苗的平安性 基因序列的改动 H2株与野毒株的生物学特征不同 疫苗株口服感染才干的减弱与丧

12、失 无毒力返祖。 部分接种反响细微，无明显不良反响 无疫苗接种相关病例，已察看15年以上 甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒Hepatitis A Virus ) 颗粒颗粒由由60个衣壳蛋白组成个衣壳蛋白组成20面立体对称构造面立体对称构造60个衣壳蛋白小核糖核酸病毒无细胞壁二十面体单个衣壳蛋白构造单股RNA1、H2疫苗株的减毒基因表现 2、疫苗病毒的遗传稳定性 -核苷酸序列测定病毒样品来源核苷酸序列测定部位与疫苗株同性百分比疫苗接种者排出P1和P2连接区(2930 3272)99.7 100%(氨基酸无改变)KMB17细胞传代370C 8代5 VP2(54 1232)99.8%(氨基酸无改变)VP1

13、2A(2447 3164)100%KMB17细胞传代350C 11代5 VP2(54 1232)99.3%(1个氨基酸改变)VP1 2A(2447 3164)99.9%(氨基酸无改变)3、 甲肝病毒野毒株与H2疫苗株的特性比较特性野毒株H2疫苗株细胞培养不敏感敏感免疫电镜呈27-28nm球型颗粒呈27-28nm球型颗粒接种猴或人: 免疫反应有有 临床症状严重无或极轻微 肝功能异常正常 肝脏病理变化有无 排毒量大小 口服感染力大小核苷酸序列和氨基酸同源性: 5端非编码区(101-201)68% 2a (3011-3110) 2c (3986-4085)92% , 97%88% , 97%接种H2

14、株疫苗感染途径改动，口服感染才干减弱或消逝疫苗批号年龄口服疫苗皮下接种观察人数抗体阳转数观察人数抗体阳转数920492043-48-9162200ND22ND22930193027-87-810100010ND9ND930393047-87-8101000101089930593067-8ND6ND0-10161016940194027-87-8980010101010总计3-910109894（95.9%）4、疫苗株毒力返祖实验 在人二倍体细胞中于36 0C传5代; 37 0C传8代; 35 0C传11代; 猴体内传3代; 疫苗接种者排出病毒; 疫苗接触者排出病毒疫苗株毒力返祖实验样品来源

15、接种猴体毒力测定 病症 血清肝功能 肝脏病理改动疫苗接种者排出- -KMB17细胞传代:- - 36 0C传5代- - 37 0C传8代- - 35 0C传11代- -猴体内传3代 - -疫苗株毒力返祖实验结果: 无发病和明显肝功能改动 无肝脏病理变化 无毒力返祖景象结论: 疫苗对人对环境无害 H2株甲肝活疫苗在中国运用15年，接种人群大于1亿，没有发现任何类甲肝病例，流行病学证明，没有因接种甲肝活疫苗而发生甲肝病例。举例如下：1、大规模人体平安性察看(九五研讨) 接种察看26万人，未有全身及部分副反响2、接种一亿人份，无明显不良反响3、浙江省嵊泗县、椒江市约14万人，接种15年追踪察看，没有

16、发现甲肝疫苗接种相关病例。四、甲肝减毒活疫苗先进的消费工艺 人二倍体细胞消费KMB17 Cell Line) 提取和纯化，纯化的活疫苗 疫苗维护剂不含人血白蛋白国家专利，防止来自血液制品的平安风险甲肝活疫苗后处置工艺 纯化的必要性：细胞内增殖。 纯化的方法：物理+化学。 纯化的结果：牛血洁白蛋白低于规程规范； 杂蛋白大幅减少； 灭活能够存在的其它病原体。甲肝活疫苗H2株2002 2003年牛血清蛋白含量(本结果为中国生物制品检定所抽检结果疫苗批号物理性状无菌试验异常毒性试验感染性滴度Log CCID50/ml(6.50)残余牛血清蛋白含量（50 ng/ml)热稳定性试验鉴别试验水分含量2001

17、年5批合格7.00 7.336 - 6合格2002年6批合格6.50 6.706 - 6合格2003年6批合格6.50 7.503 3.13合格合计17批合格7.10 4.96合格五、甲肝减毒活疫苗的有效性 抗体阳转率 免疫效果 疫苗接种率与甲肝发病率的关系 免疫回想反响甲肝疫苗甲肝疫苗H2株接种后抗株接种后抗HAV-IgG阳转率阳转率地区地区年龄年龄接种人数接种人数阳转人数阳转人数阳转率阳转率%椒江区椒江区1-1521920593.61武汉市武汉市7-12142142100.0天津市天津市10-113131100.0龙岩地区龙岩地区1-30615285.25绍兴县绍兴县7-122131878

18、3.11福建省站福建省站4-711811698.31合计合计1-3078473393.49浙江省绍兴县前瞻性研讨4年察看结果1991-19944 年累计年累计组别组别人年数人年数 甲肝病例数甲肝病例数发病率发病率( 1/100,000 )疫苗组疫苗组18,10200对照组对照组 166,154135204.07对照组对照组 2176,014360204.53合计合计260,270495190.19 注注: 1. 疫苗接种组与对照组疫苗接种组与对照组 1 选择绍兴县选择绍兴县 11 所小学，按随机原则班级间对照。所小学，按随机原则班级间对照。2. 对照组对照组 2 选择选择 25 所小学作为外对

19、照。所小学作为外对照。* Vaccine. 1997, 15 (9): 944-947大规模人群考核大规模人群考核 国家九五攻关课题国家九五攻关课题 疫苗：疫苗：H2株，浙医科院普康，滴度株，浙医科院普康，滴度10 7.0 TCID50 研讨现场：上海、河北省八个县、石家庄市等研讨现场：上海、河北省八个县、石家庄市等地地方法：个体随机分组研讨：方法：个体随机分组研讨： 非挑选研讨非挑选研讨13.5万人；万人； 挑选易感者研讨挑选易感者研讨1.6万人。万人。 整群随机分组研讨：整群随机分组研讨： 接种组接种组19.1万人；对照组万人；对照组16.8万人。万人。 共约共约50万人的大现场流行病学考

20、核。万人的大现场流行病学考核。甲肝活疫苗维护效果甲肝活疫苗维护效果疫苗接种组疫苗接种组对照组对照组组别组别人数人数甲肝病例数甲肝病例数人数人数甲肝病例数甲肝病例数个体随机个体随机2766815889222整群随机整群随机84412016366622合计合计112080122255844 Jjj j保护率: 97.7%, CI 95% : Low limit: 92.6%, p0.001*观察 3 年. 九五课题总结甲肝疫苗接种率与发病率之间的相关性甲肝疫苗接种率与发病率之间的相关性 ( 浙江省，嵊泗县，浙江省，嵊泗县， 1-15岁儿童组岁儿童组 )0 020204040606080801001

21、0012012083-8983-891990199019911991199219921993199319941994199519951996199619971997199819981999199920002000V-coverageV-coverageHA casesHA cases 嵊泗县嵊泗县1983 - 2000年甲肝发病率统计年甲肝发病率统计 全人口全人口 1-15 岁儿童组岁儿童组 疫苗接种前/后 年份年份 年均年均 人口人口 甲肝甲肝 病例数病例数 发病率发病率 （1/10 万）万） 组人组人口数口数 病例病例数数 发病率发病率 (1/10 万万) 1983 81780 239 2

22、92.25 22004 191 868.02 1984 81622 245 300.16 21078 196 929.84 接种前 1985 82310 147 178.59 19907 116 582.71 1986 82750 234 282.78 19458 185 950.77 1987 83320 244 292.85 18745 195 1040.78 1988 83579 789 944.02 16902 563 3330.96 1989 84214 187 222.06 18109 150 828.32 1990 84652 42 49.61 18139 14 77.18 19

23、91 85209 44 51.64 18279 15 82.29 接种后 1992 85603 20 23.36 18446 11 59.63 1993 85850 17 19.80 18473 7 37.89 1994 85890 9 10.48 18450 3 16.26 1995 86207 10 11.60 18837 7 37.16 1996 86314 7 8.11 19030 1 5.25 1997 86041 1 1.16 17285 0 0.00 1998 85550 1 1.17 16631 1 6.01 1999 85550 1 1.17 16415 0 0.00 200

24、0 86670 0 0.00 17120 0 0.00 甲肝发病率从甲肝发病率从359.7/10万下降到万下降到19.7/10万。万。 所有疫苗接种者未发生一例甲肝。所有疫苗接种者未发生一例甲肝。近十年期间没有发生甲肝流行。近十年期间没有发生甲肝流行。 甲肝疫苗接种率与甲肝发病率的相关性甲肝疫苗接种率与甲肝发病率的相关性-1 -15岁儿童，椒江区岁儿童，椒江区0 010102020303040405050606070708080909010010083-8983-891990199019911991199219921993199319941994199519951996199619971997

25、199819981999199920002000接种率接种率甲肝病例数甲肝病例数甲肝活疫苗免疫回想反响甲肝活疫苗免疫回想反响组别免前筛选人数免后 1 月 GMT(mIu/ml)T-Test免前 IgG 阴性*78278.43.866 年前初免，再免前 IgG 阴性*381337.33.030.016 年前初免，再免前GMT20mIu/ml*23721.92.400.01* ELISA 法 * Abbott EIA, Imx免疫回想反响对于免疫维护的耐久性和免疫回想反响对于免疫维护的耐久性和有效性来说是非常重要的，记忆性有效性来说是非常重要的，记忆性B细细胞的存在和胞的存在和IgG抗体的特异性，

26、确保了抗体的特异性，确保了再次暴露于同一种抗原的二次反响比第再次暴露于同一种抗原的二次反响比第一次反响更快速和有效。一次反响更快速和有效。七、关于活疫苗的免疫耐久性 在免疫学机理上，接种活疫苗可耐久免疫 甲肝活疫苗实践察看免疫维护作用15年以上。 甲肝活疫苗与灭活疫苗的对比研讨中，更具优越性甲肝活疫苗与灭活疫苗的对比研讨 活疫苗与灭活疫苗均有较好的免疫效果, 二者几何平均滴度(GMT) 程度相当 甲肝活疫苗免后2周抗体阳转率及GMT显著高于灭活疫苗 甲肝活疫苗远期维护效果好, 免后24月抗体滴度无明显下降. 活疫苗细胞免疫功能耐久而明显 (免后2月淋巴细胞转化率高, 下降缓慢) 在甲肝流行期间

27、, 活疫苗具有更好的应急维护效果 *文献北京CDC):甲肝灭活疫苗与减毒活疫苗对不同人群免疫效果的研讨. 中国方案免疫, 2002, 8(5):254-257.)甲肝减毒活疫苗加强免疫能诱导很好的免疫回想反响甲肝减毒活疫苗加强免疫能诱导很好的免疫回想反响, 其免其免疫学效果与史克灭活疫苗相当疫学效果与史克灭活疫苗相当. 中华医学杂志中华医学杂志, 2000, Vol.80, No.6.冻干甲肝疫苗的运用 冻干甲肝减毒活疫苗是在液体甲肝减毒冻干甲肝减毒活疫苗是在液体甲肝减毒活疫苗根底研讨活疫苗根底研讨, , 临床考核及大规模流临床考核及大规模流行病学考核获得显著的免疫维护效果的行病学考核获得显著

28、的免疫维护效果的根底上根底上, , 研制胜利的新剂型疫苗研制胜利的新剂型疫苗. .冻干甲肝减毒活疫苗冻干甲肝减毒活疫苗H2株株消费工艺获国家专利消费工艺获国家专利, 到达国际先进程度到达国际先进程度进口的疫苗消费线进口的疫苗消费线国内第一个向世界卫生组织申报的甲肝疫国内第一个向世界卫生组织申报的甲肝疫苗苗第一个在国外印度完成注册，胜利出第一个在国外印度完成注册，胜利出口口 的疫苗的疫苗冻干疫苗的优点冻干疫苗的优点 提高了疫苗的稳定性 血清阳转率可达100% GMT 程度: 从 127-212 mIU/ml 到 280-1607 mIU/ml 坚持有效期: 从5个月提高到18个月 减少反复冻融对

29、活疫苗感染性滴度的影响. 利于储运,便于大规模推行运用. 运用方便，只需注射一针就可获得耐久维护。冻干疫苗的平安性冻干疫苗的平安性基因构造的稳定性基因构造的稳定性: 基因组稳定基因组稳定,同源性高达同源性高达99.5% 抗原决议簇不变抗原决议簇不变, 只需基因亚型的改动只需基因亚型的改动基因序列分析：基因发生变异，不同于野毒株基因序列分析：基因发生变异，不同于野毒株.运用经过纯化运用经过纯化,传代的二倍体细胞传代的二倍体细胞, 符合符合WHO的要求的要求 稳定剂不含任何污染因子稳定剂不含任何污染因子 动物及猴体实验：无肝细胞损伤。动物及猴体实验：无肝细胞损伤。 人体接种察看阐明，无明显不良副反

30、响人体接种察看阐明，无明显不良副反响, 未有全身及部分副反响。未有全身及部分副反响。冻干甲肝活疫苗冻干甲肝活疫苗 (H2株株)人体接种反响察看人体接种反响察看结果阐明：冻干甲肝减毒活疫苗H2株不引起人体接种部位部分反响和其他不良的全身反响。 * 2例为一过性体温37.7C0, 随后正常.疫苗疫苗批号批号接种接种人数人数疫苗疫苗剂量剂量CCID50/ml 部分反响部分反响 红、肿红、肿 热、痛热、痛全身反响全身反响弱弱48724872小时小时96A246.50000000096A2 796.5000002*00G99022566.6700000000107021146.500000000冻干甲肝

31、减毒活疫苗冻干甲肝减毒活疫苗(H2株株 人体接种反响察看人体接种反响察看结果阐明：冻干甲肝减毒活疫苗结果阐明：冻干甲肝减毒活疫苗H2株免后二个月株免后二个月 血清血清ALT无异无异常，抗体反响良好。常，抗体反响良好。疫苗疫苗批号批号 接种量接种量CCID50/ml接种人数接种人数ALTHAV-IgG(+)总数总数男男女女异常异常2月月10月月96A2 6.507947/7932/790/7973/7992.4%74/7993.7%0107026.5011461/11453/1140/114113/11499.12%待检待检冻干疫苗接种后肝功能SGPT检测 0 月月 1 月月 2 月月 分组分组

32、 Examine objects (n) Abnormal objects (n) Examine objects (n) Abnormal objects (n) Examine objects (n) Abnormal objects (n) 冻干苗冻干苗 164 0 161 0 158 0 液体苗液体苗 138 0 136 0 132 0 Examine objects:检测对象；Abnormal objects:出现不正常者免疫原性强冻干甲型肝炎减毒活疫苗H2株具有高度免疫原性，注射一针血清阳转率为100%。冻干甲肝减毒活疫苗冻干甲肝减毒活疫苗H2株株免后抗体程度测定免后抗体程度测定注

33、: (1) * 示数据引自中检所对批号G990225冻干苗H2株临床研讨报告。 (2) *血清标本同时由中检所和浙江医科院病毒所同时检测 。 疫苗疫苗批号批号疫苗疫苗剂量剂量免后免后月月检测检测人数人数抗体程度抗体程度mIU/ml10000平均平均010702冻干冻干6.5021142154361530G990225冻干冻干.6.771*50172490521 2*471862301607 13*72113026516099912-01液体液体 6.501*40241150372 2*50331520244 13*793234112513结果阐明结果阐明1. 冻干苗一针免疫程序，免后二个月抗体

34、反冻干苗一针免疫程序，免后二个月抗体反 应到达顶峰值，免后应到达顶峰值，免后13个月该顶峰值依然个月该顶峰值依然 保保 持不变。持不变。2. 与液体剂型苗对照组相比，冻干剂型苗抗与液体剂型苗对照组相比，冻干剂型苗抗 体滴度高于液体剂型苗数倍。体滴度高于液体剂型苗数倍。几种甲肝疫苗免后抗体程度的比较几种甲肝疫苗免后抗体程度的比较组别组别检测检测数数阳性数阳性数阳性率阳性率（%）GMT（mIU/ml）GMT95%可信区间可信区间资料来源资料来源普康苗普康苗1针，免针，免后后1年年837995.181200上海医大上海医大检测资料检测资料巴维信巴维信（AVAXIM）0，6二针免后二针免后1年年22922698.691673中华流行中华流行病学杂志病学杂志2000,21(4)灭活苗灭活苗（Havrix）0，6二针免后二针免后1年年46461001027772-1367中华医学中华医学杂志杂志2000,80(6)稳定性好稳定性好冻