福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉ppt课件

1、 实验四实验四 白细胞计数、网织红细胞计数及血沉测定白细胞计数、网织红细胞计数及血沉测定目的目的 1掌握显微镜白细胞计数的方法。掌握显微镜白细胞计数的方法。 2掌握网织红细胞手工计数的方法。掌握网织红细胞手工计数的方法。 3血沉测定示教。血沉测定示教。一、显微镜白细胞计数临检指点一、显微镜白细胞计数临检指点P32 1. 概述 人外周血白细胞 单核细胞 白细胞 淋巴细胞 中性分叶核粒细胞 粒细胞 中性杆状核粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞一、显微镜白细胞计数一、显微镜白细胞计数2原理原理 用白细胞计数稀释液用白细胞计数稀释液2%冰醋酸参与冰醋酸参与1%美美蓝或结晶紫数滴蓝或结晶紫数滴0.38m

2、l，将血液，将血液20l稀释稀释20倍，在破坏成熟红细胞的同时固定白细胞，后充入倍，在破坏成熟红细胞的同时固定白细胞，后充入改良牛鲍计数板，在低倍镜下计数四角改良牛鲍计数板，在低倍镜下计数四角4个大方格个大方格内的白细胞数，经换算求得每升血液中白细胞数。内的白细胞数，经换算求得每升血液中白细胞数。一、显微镜白细胞计数一、显微镜白细胞计数 3.操作步骤 1加稀释液 ：白细胞稀释液0.38ml2稀释血液：末梢采血20l，参与稀释液中混匀3溶血 ：混匀后静置，待液体变为棕褐色4充池：同红细胞计数 5计数：低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数。 一、显微镜白细胞计数一、显微镜白细胞计数4.计算计算W

3、BC=N/41020106=N/20109/L5.参考值参考值 成人：成人： 410109/L 初生儿：初生儿： 1520109/L 6月月2岁：岁： 1112109/L 6.本卷须知本卷须知 1器材：微量吸管及牛鲍计数板的校正器材：微量吸管及牛鲍计数板的校正2标本采集和稀释应准确标本采集和稀释应准确3加盖玻片方式：加盖玻片方式： WHO引荐引荐“推式法推式法 4充液的影响：同红细胞计数充液的影响：同红细胞计数 5计数原那么计数原那么 一、显微镜白细胞计数一、显微镜白细胞计数6计数室内的细胞分布要均匀：各大方格间细胞计数室内的细胞分布要均匀：各大方格间细胞 数相差不超越数相差不超越10%，否那

4、么应重新重池。，否那么应重新重池。7调整计数白细胞的数量或稀释倍数调整计数白细胞的数量或稀释倍数:细胞数量过细胞数量过 少，可扩展计数域少，可扩展计数域(计计8或或9个大方格个大方格)或加大取或加大取 血量；细胞数量过多，可添加稀释液至血量；细胞数量过多，可添加稀释液至0.79ml 或仅加血或仅加血10l。8去除有核红细胞的影响去除有核红细胞的影响 ： 实践白细胞数实践白细胞数/L=100校正前白细胞数校正前白细胞数/ 100+有核红细胞有核红细胞 7.方法学评价方法学评价 显微镜计数法是传统的白细胞计数法，并可用显微镜计数法是传统的白细胞计数法，并可用 于校准血细胞分析仪，但其精细度和反复性

5、欠佳。于校准血细胞分析仪，但其精细度和反复性欠佳。 用于校准血液分析仪时应在严厉规范的条件下进展。用于校准血液分析仪时应在严厉规范的条件下进展。 而校准的血液分析仪在严厉规范的条件下，精细度和而校准的血液分析仪在严厉规范的条件下，精细度和 准确性较高。准确性较高。一、显微镜白细胞计数一、显微镜白细胞计数 血液分析仪检测速度快，适宜大规模安血液分析仪检测速度快，适宜大规模安康人群普查，但需特殊仪器，当某些人为或康人群普查，但需特殊仪器，当某些人为或病理情况如外周血有核红细胞、宏大血小病理情况如外周血有核红细胞、宏大血小板和血小板凝集等可干扰白细胞计数。板和血小板凝集等可干扰白细胞计数。一、显微镜

6、白细胞计数一、显微镜白细胞计数8.临床意义临床意义 白细胞在生理或病理情况下均可有差别。多数白细胞在生理或病理情况下均可有差别。多数与中性粒细胞数量变化一致。与中性粒细胞数量变化一致。二、网织红细胞计数临检指点二、网织红细胞计数临检指点P261.原理原理 网织红细胞网织红细胞Ret是晚幼红细胞脱核后到完全是晚幼红细胞脱核后到完全成熟的成熟的红细胞间的过渡细胞。其胞质中残存核糖核酸等嗜红细胞间的过渡细胞。其胞质中残存核糖核酸等嗜碱性物碱性物质，故经煌焦油蓝质，故经煌焦油蓝/新亚甲蓝染液活体染色后，可新亚甲蓝染液活体染色后，可见有蓝绿见有蓝绿色点状、线状、颗粒状或网状构造，故名网织红细色点状、线状

7、、颗粒状或网状构造，故名网织红细胞。胞。 二、网织红细胞计数二、网织红细胞计数 2. 2.操作步骤玻片法操作步骤玻片法1 1加染液：于载玻片的中央滴加煌焦油蓝乙醇溶液，自加染液：于载玻片的中央滴加煌焦油蓝乙醇溶液，自 然枯燥后备用。然枯燥后备用。2 2加血液：取血加血液：取血1 1滴，滴在染料上，用推片角悄然将血滴，滴在染料上，用推片角悄然将血 滴与染料混匀，然后用另一载玻片垂直盖在此滴与染料混匀，然后用另一载玻片垂直盖在此玻片上玻片上 尽量不留气泡，室温下静置尽量不留气泡，室温下静置1520min1520min。3 3制备涂片。制备涂片。4 4油镜下计数油镜下计数10001000个红细胞中的

8、网织红细胞数普通个红细胞中的网织红细胞数普通 延续计数延续计数3 3个视野即可。个视野即可。5 5也可用米勒氏窥盘也可用米勒氏窥盘Miller oculordiscMiller oculordisc置入接目镜内置入接目镜内 进展计数如以下图。进展计数如以下图。 详细方法是以窥盘的详细方法是以窥盘的A A区计数红细胞，区计数红细胞，B B区计数网织区计数网织 红细胞，由于红细胞，由于B B区的面积为区的面积为A A区的区的9 9倍，故计算如下：倍，故计算如下： 网织红细胞网织红细胞% %=B=B区网织红细胞数区网织红细胞数/ A/ A区红细胞数区红细胞数 9 9 100%100%二、网织红细胞计

9、数二、网织红细胞计数 3.计算计算 网织红细胞分数数网织红细胞分数数=计数的网织红细胞数计数的网织红细胞数/1000 网织红细胞绝对数网织红细胞绝对数=红细胞数红细胞数/L网织红细胞分数网织红细胞分数数数 4.参考值参考值 正常成人：正常成人： 0.5%1.5% 新生儿：新生儿： 2%6% 成人网织红细胞绝对值：成人网织红细胞绝对值： 2484109/L5.本卷须知本卷须知1只需活体染色后才干看到网织红细胞，故必只需活体染色后才干看到网织红细胞，故必需将新颖需将新颖 血滴与染液相混合，染液与血液之比普通约血滴与染液相混合，染液与血液之比普通约为为1：1， 但假设贫血严重也可按但假设贫血严重也可

10、按1：2关系处置。留意关系处置。留意混匀，否那么混匀，否那么 有时凝固。有时凝固。2染色时间不得短于染色时间不得短于10min，否那么能够着色，否那么能够着色不佳。计数不佳。计数 前留意多部位察看，可与涂片的体尾交界处前留意多部位察看，可与涂片的体尾交界处选染色选染色 好，红细胞分布既不分散又不重叠的区域进好，红细胞分布既不分散又不重叠的区域进展计数。展计数。 经此种染色后红细胞呈明晰的蓝绿色，凡胞经此种染色后红细胞呈明晰的蓝绿色，凡胞质中含有质中含有 蓝绿色点状、短线状构造者为网织红细胞。蓝绿色点状、短线状构造者为网织红细胞。二、网织红细胞计数二、网织红细胞计数网织红细胞网织红细胞3计数时需

11、留意与异物或假象相区别。如有异物残渣，计数时需留意与异物或假象相区别。如有异物残渣， 多呈黑色，转动微螺旋时可见其折光性。接目镜中粉尖多呈黑色，转动微螺旋时可见其折光性。接目镜中粉尖 重叠于红细胞上所致的假象，那么随接目镜转动而移位。重叠于红细胞上所致的假象，那么随接目镜转动而移位。 勿将伸展红细胞较深染的伸展点勿以为网织构造，伸展勿将伸展红细胞较深染的伸展点勿以为网织构造，伸展 红细胞其边缘处均匀的锯齿状可供作鉴别。红细胞其边缘处均匀的锯齿状可供作鉴别。4染色后的涂片应尽快察看计数，否那么其网织构造可染色后的涂片应尽快察看计数，否那么其网织构造可因因 久置而溶解消逝尤其在夏天湿度大的季节。久

12、置而溶解消逝尤其在夏天湿度大的季节。 6.方法学评价方法学评价 玻片法取血量少，且易于使混合血液中的水分蒸玻片法取血量少，且易于使混合血液中的水分蒸发，造发，造 成染色结果偏低，但携带方便，适宜床边采血检查。成染色结果偏低，但携带方便，适宜床边采血检查。二、网织红细胞计数二、网织红细胞计数二、网织红细胞计数二、网织红细胞计数7.质量控制质量控制1.显微镜法显微镜法 网织红细胞目视计数误差较大，影响要素主要有：网织红细胞目视计数误差较大，影响要素主要有：操作人员对网织红细胞认识不同；血涂片质量好坏，操作人员对网织红细胞认识不同；血涂片质量好坏，计数红细胞数量的多少和计数方法等。计数红细胞数量的多

13、少和计数方法等。2.仪器法仪器法 虽可计数红细胞虽可计数红细胞10 00050 000个，但遭到个，但遭到H-J小体、小体、有核红细胞、巨血小板等影响，可出现假阳性。有核红细胞、巨血小板等影响，可出现假阳性。三、血沉测定示教临检指点三、血沉测定示教临检指点P291原理原理(魏氏法魏氏法) 将一定量的抗凝全血灌注于特制的血沉管中，垂将一定量的抗凝全血灌注于特制的血沉管中，垂直立直立 于血沉架上于血沉架上1h后读取红细胞下沉后所暴显露的血浆后读取红细胞下沉后所暴显露的血浆段高段高 度度mm/h。三、血沉测定三、血沉测定2方法方法 1取静脉血取静脉血1.6ml，参与含，参与含109mmol/L枸橼酸钠枸橼酸钠0.4ml 的抗凝管中混匀。的抗凝管中混匀。2吸血入血沉管中至刻度吸血入血沉管中至刻度“0处，将血沉管直处，将血沉管直立于血立于血 沉架上。沉架上。1h后察看结果。后察看结果。 三、血沉测定三、血沉测定3.参考值参考值 50岁：男性岁：男性015mm/h 女性