维生素c含量测定方法

1、维生素维生素C含量测定含量测定方法综述方法综述目前研究维生素C测定方法的报道较多，如滴定法、光度分析法、高效液相色谱法等，各种方法各有特点。特别是高效液相色谱法是近年来发展较快的一种方法。维生素维生素C是可溶于水的无色结晶，是一种分子结是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构最简单的维生素。维生素构最简单的维生素。维生素C有防治坏血病的功有防治坏血病的功能，所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。维生素能，所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。维生素C能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒作用等。其广泛存在于植物组织中，新鲜起解毒作用等。其广泛存在于植物组织中，新

2、鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。准确测定猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。准确测定维生素维生素C的含量，对饮食健康、医疗保健都具有的含量，对饮食健康、医疗保健都具有十分重要的意义。十分重要的意义。 测定维生素测定维生素C常用的方法有常用的方法有2,6-二氯靛酚滴定法、二氯靛酚滴定法、苯肼比色法、荧光法及高效液相色谱法等。苯肼比色法、荧光法及高效液相色谱法等。2,6-二氯靛酚滴定法测定的是还原型抗坏血酸，该法二氯靛酚滴定法测定的是还原型抗坏血酸，该法简便，也较灵敏，但特异性差，样品中的其他还简便，也较灵敏

3、，但特异性差，样品中的其他还原性物质会干扰测定，使测定值偏高，且对深色原性物质会干扰测定，使测定值偏高，且对深色样液滴定终点不易辨别。苯肼比色法和荧光法测样液滴定终点不易辨别。苯肼比色法和荧光法测得的都是抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。高效得的都是抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。高效液相色谱法可以同时测得抗坏血酸和脱氢抗坏血液相色谱法可以同时测得抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的含量，具有干扰少、准确度高、重现性好、酸的含量，具有干扰少、准确度高、重现性好、灵敏、简便、快速等优点，是上述几种方法中最灵敏、简便、快速等优点，是上述几种方法中最先进、最可靠的方法。先进、最可靠的方法。维生素维生素C的结构式的结构

4、式 维生素C：六碳的多羟基内酯CCCHOHOCHOOCHHOCH2OH滴定法测定滴定法测定维生素维生素C C高效液相色谱法高效液相色谱法测定维生素测定维生素C C 原理原理染料2,6-二氯靛酚在酸性溶液中呈粉红色（在中性或碱性溶液中呈蓝色），被还原型抗坏血酸还原后颜色消失。还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中还原型抗坏血酸含量成正比。 2，6一二氯靛酚法2，6一二氯靛酚法n试剂试剂 1%的乙二酸溶液，2%的乙二酸溶液，1%淀粉溶液，6%碘化钾溶液。 抗坏血酸标准溶液：准确称取20mg抗坏血酸，溶于1%的乙二酸中，并

5、稀释至100mL，置冰箱中保存。用时取出5mL，置于50mL容量瓶中，用1%乙二酸溶液定容，配成0.02mg/mL的标准溶液。 标定：吸取此标准液5mL于三角瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5mL，1%淀粉溶液3滴，以0.001mol/L碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色。2，6一二氯靛酚法120.088VcV计算：式中： c抗坏血酸标准溶液的浓度mg/mL； V1滴定时消耗0.001mol/L碘酸钾标准溶液的体积，mL； V2滴定时所取抗坏血酸的体积，mL； 0.0881mL0.001mol/L碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量，mg/mL。 2，6一二氯靛酚法n试剂试剂 0.000167mol/L

6、碘酸钾标准溶液：精确称取干燥的碘酸钾0.3567g，用水稀释至100mL，取出1mL，用水稀至100mL，此溶液1mL相当于抗坏血酸0.088mg。 2,6-二氯靛酚溶液：称取2,6-二氯靛酚50mg，溶于200mL含有52mg碳酸氢钠的热水中，待冷，置于冰箱中过夜。次日过滤于250mL棕色容量瓶中，定容，在冰箱中保存。每周标定1次。 标定：取5mL已知浓度的抗坏血酸标准溶液，加入1%乙二酸溶液5mL，摇匀，用2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色，在15s内不褪色即为终点。 2，6一二氯靛酚法计算：式中：T每毫升染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数，mg/mL； c抗坏血酸的浓度，mg/mL； V

7、1抗坏血酸标准溶液的体积，mL； V2消耗2,6-二氯靛酚的体积，mL。12c VTV2，6一二氯靛酚法n测定步骤测定步骤提取n鲜样制备：称100g鲜样，加等量的2%乙二酸溶液，倒入组织捣碎机中打成匀浆。取1040g匀浆（含抗坏血酸12mg）于100mL容量瓶中，用1%乙二酸稀释至刻度，混合均匀。n干样制备：称14g干样（含12mg抗坏血酸）放入研钵内，加1%乙二酸溶液磨成匀浆，倒入100mL容量瓶中，用1%乙二酸稀释至刻度。过滤上述样液，不易过滤的可用离心机沉淀后，倾出上清液，过滤备用。 2，6一二氯靛酚法n测定步骤测定步骤滴定 吸取510mL滤液，置于50mL三角瓶中，快速用2，6-二氯靛

8、酚溶液滴定，直到红色不能立即消失，而后再尽快地一滴一滴地加入（样品中可能存在其他还原性杂质，但一般杂质还原染料的速度均比抗坏血酸慢），以呈现的粉红色在15s内不消失为终点。同时做空白实验。 2，6一二氯靛酚法n结果计算结果计算0()100VVTXm式中：X样品中抗坏血酸含量，mg/100g； m滴定时所取溶液中含有样品的质量，g； T1mL染料溶液相当于抗坏血酸标准溶液的量，mg/mL； V滴定样液时消耗染料的体积，mL； V0滴定空白时消耗染料的体积，mL。2，6一二氯靛酚法n注意事项注意事项（1）所有试剂最好用重蒸馏水配制。（2）样品采取后，应浸泡在已知量的2%乙二酸溶液中，以防止维生素C

9、氧化损失。测定时整个操作过程要迅速，防止抗坏血酸被氧化。（3）若测动物性样品，需用10%三氯乙酸代替2%乙二酸溶液提取维生素C。（4）若样品滤液颜色较深，影响滴定终点观察，可加入白陶土脱色后再过滤。白陶土使用前应测定回收率。2，6一二氯靛酚法n注意事项注意事项（5）若样品中含有Fe2+、Sn2+、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等还原性杂质时，会使结果偏高；Cu2+可与抗坏血酸反应，也干扰测定。有无这些干扰离子可用以下方法检验：取样品提取液、偏磷酸-乙酸溶液各5mL混合均匀，加入0.05%亚甲基蓝水溶液2滴。如亚甲基蓝颜色在510s消失，即证明有干扰物存在；此检验对Sn2+无反应，可在另一份10mL的样品

10、溶液中加入1：3盐酸溶液10mL，加0.05%靛胭脂红水溶液5滴，若颜色在510s消失；证明有Sn2+或其他干扰性物质存在。为消除上述杂质带来的误差，可采取以下测定方法：取10mL提取液两份，各加入0.1mL10%硫酸铜溶液，在110加热10min，冷却后在用染料滴定。有铜存在时，抗坏血酸完全被破坏，从样品滴定值中扣除校正值，即得抗坏血酸含量。CCCHOHOCHOOCHHOCH2OHOClClNOHOHClClNOHCCOCHCOOOCHCH2OHHO 维生素C 2,6-二氯酚靛酚 维生素C 2,6-二氯酚靛酚（还原型） （氧化型，粉红色） （氧化型） （还原型） + + = v2,6-二氯酚

11、靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。2高效液相色谱法测定维生素高效液相色谱法测定维生素C原理原理样品中的维生素C经乙二酸溶液（1g/L）迅速提取后，在反相色谱柱上分离测定。 主要仪器及试剂主要仪器及试剂高效液相色谱仪，紫外检测器等。乙二酸溶液（1g/L）。维生素C标准溶液：准确称取维生素C样本2mg与50ml容量瓶中，用乙二醇溶液（1g/L）溶解、定容，摇匀备用，用前配制。2高效液相色谱法测定维生素高效液相色谱法测定维生素Cn样品处理样品处理液体样品：取原液5mL与25mL容量瓶中，用乙二醇溶液（1g/L）定容，摇匀后经0.45m滤膜过滤后待测。固体样本：称1

12、g样品于研钵中，用5mL乙二醇溶液（1g/L） 迅速研磨，过滤，残渣用乙二醇溶液（1g/L）洗涤，合并提取液于25mL容量瓶中，蒸馏水定容，摇匀后经0.45m滤膜过滤后待测。2高效液相色谱法测定维生素高效液相色谱法测定维生素Cn测定测定 取5m标准溶液进行色谱分析，重复进样3次，取标样峰面积的平均值。然后在相同条件下，取5L样品液进行分析，以相应峰面积计算含量。 n色谱条件色谱条件 色谱柱，-Bondapak C18（直径3.9mm*300mm）；流动相，H2C2O4（1g/L）；流速，1.0mL/min；检测器，紫外245nm；进样量，5L。 2高效液相色谱法测定维生素高效液相色谱法测定维生素Cn计算结果计算结果122211100m A VXm AV式中： X样品中维生素C的含量，mg/100g或mg/100mL； m1标样进样体积中维生素C含量，g； m2样品质量（或体积），g或mL； A1标