生物药学作业题

1、1.改造鼠源性单克隆抗体的首要目的是C.降低免疫源性2.能用于防治血栓的酶类药物有D.尿激酶3.以下可用于菌种纯化的方法有B.平板划线4.卜列属于多肽激素类生物药物的是D.降钙素5 .由于目的蛋白质和杂蛋白分子量差别较大，拟根据分子量大小分离纯化并获得目的蛋白质，可采用（）C.凝胶过滤6 .获得目的基因最常用的方法是：B.PCR技术7 .促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为：（）D.大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化8 .以下能用重组DNA技术生产的药物为（）B.生长素9 .以大肠杆菌为目的基因的表达体系，下列正确的

2、是：（）C.容易培养，产物提纯简单10 .外源基因在动物细胞与大肠杆菌中表达产物的主要区别是（）A.糖基化|11 .筛选杂交瘤细胞（脾-瘤融合细胞）选用的培养基是：（）B.HAT12 .鼠源性单克隆抗体改造后得到小分子抗体，常用的是（）B.单链抗体13 .能够实现微生物菌种定向改造的方法是（）D.基因工程14 .目前分离的1000多种抗生素，约2/3产自（）B.放线菌15 .基因表达最常用的宿主菌是：（）B.大肠杆菌16 .分离纯化早期，由于提取液中成分复杂，目的物浓度稀，因而易采用（）A.分离量大分辨率低的方法17 .能够用沙土管保存的菌种是（）C.青霉菌18 .人类第一个基因工程药物是：（

3、）A.人胰岛素19 .外源基因的高效表达会影响宿主细胞正常的生长代谢。A.V20 .抗体中结合抗原的部位分布在恒定区B.X21 .质粒不具有自主复制能力。B.X22 .单克隆抗体就是单链抗体B.X23 .单克隆抗体只识别一种表位（抗原决定簇）的高纯度抗体，一般来自单个B淋巴细胞的克隆或一个杂交瘤细胞的克隆。A.V24 .PCR是聚合酶链式反应法的缩写A.V25 .生物药物指包括生物制品在内的生物体的初级和次极代谢产物或生物体的某一组成部分，甚至整个生物体用作诊断和治疗疾病的医药品。A.V26 .细胞因子：由细胞分泌的能调节生物有机体生理功能，参与细胞的增殖、分化和凋亡的小分子多肽物质27 .生

4、物药物：利用生物体、生物组织或其成分，综合应用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学、生物技术和现代药学的原理和方法，进行加工、制造而成的一大类用于预防、治疗和诊断疾病的制品28 .发酵工程制药：采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的药品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。29 .诱变育种：诱变育种是指有意识地将生物体暴露于物理的、化学的或生物的一种或多种诱变因子下，促使生物体发生突变，进而从突变体中筛选具有优良性状的突变株的过程。30 .基因表达：基因表达是指结构基因在生物体中的转录、翻译以及所有加工过程。31 .抗体药物：用于治疗的单克隆抗体、抗

5、体片段、基因工程改造的抗体、免疫偶联物以及融合蛋白均可统称为抗体药物32 .亚单位疫苗：不含病原体核酸，选用能诱发宿主产生中和抗体的微生物蛋白或表面抗原而制成的疫苗。33 .人-鼠嵌合抗体：嵌合抗体是最早制备成功的基因工程抗体。它是由鼠源性抗体的V区基因与人抗体的C区基因拼接为嵌合基因，然后插入载体，转染骨髓瘤组织表达的抗体分子。因其减少了鼠源成分，从而降低了鼠源性抗体引起的不良反应，并有助于提高疗效。34 .基因工程药物：利用DNA重组技术生产出来的药物被称为基因工程药物。35 .疫苗：用于人工主动免疫的生物制品。36 .多肽药物：多肽和蛋白质类药物指用于预防、治疗和诊断的多肽和蛋白质类物质

6、生物药物37 .生物技术制药：生物技术制药是指运用微生物学、生物学、医学、生物化学等的研究成果，从生物体、生物组织、细胞、体液等，综合利用微生物学、化学、生物化学、生物技术、药学等科学的原理和方法进行药物制造的技术。38 .原生质体融合：用脱壁酶处理将微生物细胞壁去除，制成原生质，再用聚乙二醇(PEG)促进原生质体发生融合，从而获得融合子的技术。39 .治疗性酶：传统的药物分子作为受体激动剂或抑制剂也能起到酶治疗的部分效果，但是它们没有催化功能，不能介导级联反应。酶的应用包括溶解血栓以促进灌注水平和加强对癌细胞的毒性40 .核酸药物：具有药理活性的天然结构的核酸类物质和人工合成合成的核酸类物质

7、41 .杂交育种：杂交育种一般指将两个基因型不同的菌株通过接合使遗传物质重新组合，再从中分离和筛选出具有新性状的菌株。杂交后的杂种不仅能克服原有菌种活力衰退的趋势，而且，杂交育种使得遗传物质重新组合，扩大了变异范围，改善了产品的质量和产量。42 .单克隆抗体：利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体及其衍生物，由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体43 .发酵工程产品开发的关键是筛选到高效菌株，一般优良菌种的选育方法主要有自然选育、诱变育种和原生质体融合。自然选育、诱变育种、原生质体融合44 .基因工程药物制造的主要步骤是：；。基因工程药物制造的主要步骤是：目的基因的获得；构建DNA重组体；构

8、建工程菌；目的基因的表达；产物的分离纯化；产品的检验。45 .根据真核基因在原核细胞中表达的特点，表达载体必须具备那些条件？表达载体必须具备下列条件：(1)能够独立的复制；(2)具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选；(3)应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RAN聚合酶所识别；(4)应具有阻遏子(5)应具有很强的终止子(6)所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号。46 .列举两种亚单位疫苗白喉类毒素、破伤风类毒素；流感嗜血杆菌荚膜多糖、脑膜炎球菌荚膜多糖；流感病毒血凝素和神经氨酸酶；乙型肝炎HBsAg(基因工程疫苗)；人乳头瘤病毒47 .简述生物药物的药理学特性答

9、：1、活性强：体内存在的天然活性物质。2、治疗针对性强，基于生理生化机制。3、毒副作用一般较少，营养价值高。4、可能具免疫原性或产生过敏反应。48 .简述发酵工程制药的基本过程答：1.菌种的选育2.培养基的配置3灭菌4.扩大培养和接种5.发酵过程6.分离提纯49基因工程制药过程中阳性克隆的筛选方法有哪些答：1.根据重组子遗传重组表型改变的筛选法，包括利用抗生素抗性基因进行筛选通过a互补使菌产生颜色来筛选，利用报告基因筛选克隆子；2.根据重组子结构特征的筛选法，包括琼脂糖凝胶电泳比较重组DNA的大小，限制性内切酶分析，印迹杂交方法，PCR法和DNA的序歹IJ分析；根据表达产物采用免疫化学方法筛选

10、50 .简述抗体药物的研发历史答；第一阶段以1890年Behring发现白喉抗毒素为代表，其特点是用抗原免疫动物来获得多克隆抗体。第二阶段以1975年Kohler创建杂交瘤技术制备单克隆抗体为代表。1986年，美国FDA批准了世界上第一个单抗治疗性药物一抗CD3单抗OKT3进入市场，用于器官移植时的抗排斥反应，此时单克隆抗体的研制和应用达到了顶点第三阶段以1994年Winter以基因工程方法制备人源化抗体为代表51简述基因工程药物的质量控制要点答：1蛋白质含量的测定。2蛋白质纯度检测。3蛋白质Mr测定。4蛋白质等电点测定。5蛋白质序列分析。6内毒素分析，宿主蛋白液和酸残留分析52简述生物药物的

11、用途答：1）作为治疗药物2）作为预防药物3）作为诊断药物4）用作其他生物医药用品53 .简述单克隆抗体经筛选和克隆化的杂交瘤细胞仅能合成及分泌单一抗原表位的特异性抗体，是单克隆抗体。单抗的制作过程大体分为抗原的制备，动物的免疫，b细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，筛选杂交瘤细胞，筛选能产生某种特异性单抗的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的克隆化，体外大规模培养或动物腹腔培养特异性杂交瘤细胞克隆，单抗的纯化及鉴定。54.简述基因工程制药的主要步骤；。基因工程药物制造的主要步骤是：目的基因的获得；构建DNA重组体；构建工程菌;目的基因的表达；产物的分离纯化；产品的检验。55 .比较蛋白和多肽药物的差异，并

12、分别列举三个多肽和蛋白质药物的名称和功能相对大分子蛋白或抗体类，多肽在常温下却更稳定，用量更少，单位活性也更高；与大分子蛋白相比，多肽化学合成技术成熟，多肽容易与杂质或副产品分离；重组蛋白的质量、纯度和产量都难以保证。重组蛋白也不能引人非天然氨基酸，不能在末端酰胺化，同时生产周期长，成本高；多肽一般比蛋白抗体类药物成本低，但比很多小分子药物的合成成本高。|多肽药物：格拉替雷，用于治疗多发性硬化症；兰瑞肽、伐普肽、巾白瑞肽、somatoprim和司格列肽等，用于治疗胃肠胰内分泌肿瘤、肢端肥大症等多种相关疾病。蛋白药物：重组人胰岛素，用于治疗糖尿病；重组人促红细胞生成素，用于治疗贫血；重组人甲状旁

13、腺激素，用于治疗骨质疏松症。56 .如何控制基因工程药物质量？基因工程药物的质量控制要点如下。1蛋白质含量的测定。2蛋白质纯度检测。3蛋白质Mr测定。4蛋白质等电点测定。5蛋白质序列分析。6内毒素分析，宿主蛋白液和酸残留分析57 .什么是单克隆抗体？简述制备过程。答：经筛选和克隆化的杂交瘤细胞仅能合成及分泌单一抗原表位的特异性抗体，是单克隆抗体。单抗的制彳过程大体分为抗原的制备，动物的免疫，b细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，筛选杂交瘤细胞，筛选能产生某种特异性单抗的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的克隆化，体外大规模培养或动物腹腔培养特异性杂交瘤细胞克隆，单抗的纯化及鉴定。58 .比较基因工程疫苗和

14、传统疫苗。答：基因工程疫苗：1、免疫原性良好、效果持久及交叉免疫防护2、可精细设计、便于操作、制备简便3、能制备联合疫苗4、能重复利用5可用于免疫治疗。虽然基因工程疫苗拥有传统疫苗所没有的优越性，但是目前还存在一下不足与缺点：1、安全性尚不稳定2、免疫效果有待提高3、抗核酸免疫反应。59 .基因工程制药过程中阳性克隆的筛选方法有哪些？1.根据重组子遗传重组表型改变的筛选法，包括利用抗生素抗性基因进行筛选通过a互补使菌产生颜色来筛选，利用报告基因筛选克隆子；2.根据重组子结构特征的筛选法，包括琼脂糖凝胶电泳比较重组DNA的大小，限制性内切酶分析，印迹杂交方法，PCR法和DNA的序列分析；根据表达

15、产物采用免疫化学方法筛选60 .何谓治疗性疫苗。比较治疗性疫苗和预防性疫苗的区别。治疗性疫苗是指在已感染病原微生物或已患有某些疾病的机体中，通过诱导特异性的免疫应答，达到治疗或防止疾病恶化的天然，人工合成或用基因重组技术表达的产品或制品。治疗性疫苗与预防性疫苗的主要区别是，一、预防性疫苗主要作用于未感染机体。而治疗性疫苗的作用对象作为曾经感染的病原体。二、治疗性疫苗能打破机体的免疫耐受状态，预防性疫苗可通过实验室进行监测，结果可靠，而预防性疫苗可能有一定的不良反应伴有不同程度免疫损伤较为复杂且其准确性尚有争议激发免疫应答的类型不同。61 .综合分析生物药物和化学药物的差异，以及这些差异对药物的

16、治疗领域和给药类型的影响小分子化学药通常是化学合成的，而大分子生物药则通常是生物合成的。源头的不同就直接造成两者在结构、成分、生产方法和设备、知识产权、配方、保存方法、剂量、监管方式以及销售方式均有不同。与合成的小分子化学药相比，生物药在分子大小上要大一百至上千倍。比如抗体药分子量高达15万道尔顿，而化学药通常不到1000道尔顿。有报道将小分子化学药的大小比作一辆自行车，而生物药的个头则相当于一架飞机，其实两者的区别不仅仅是分子大小的差别。更重要的是，生物药的分子结构要远比化学药复杂。相似还是仿制？由于生物药具有更大的分子量和复杂的结构，生物药的表征面临很大挑战。但由于上述特点，即使目前全世界

17、最先进的仪器设备全用上，也不可能将生物药的结构等特性完全表征清楚。这些特点也注定生物仿制药不可能完全和原研药一模一样，即使是同一家公司生产的同一种生物药，不同批次也会有差异。即使是同一批次，在储存、流通的过程中，生物药（尤其是蛋白类药物）的结构和活性也不可避免地会有所变化。对于生物仿制药生产商而言，由于知识产权保护等多种原因，原研药公司所采用的生产工艺甚至是所采用的细胞系都会不清楚，这就更导致生物仿制药与原研药不会一样。另外，对于生物药而言，其生产及流通过程更加复杂，要求也更高，有许多步骤，细胞培养的条件（温度和营养）、产品的加工、纯化、储存和包装等各个环节都会影响产品的生产，整个过程中的微小

18、差别都可能会对最终产品的质量、纯度、生物特性以及临床效果产生较大影响。正由于上述种种原因，虽然化学仿制药的英文是genericdrug,但是生物仿制药并非是biogeneric,而是biosimilar,因为生物仿制药只可能与原研药相似"（similar）,绝不可能一样。正是由于这个原因，中国有业内人士认为biosimilar应该被译为生物相似药，而非生物仿制药。而对于传统的小分子化学药而言，一般都有非常确定而且稳定的化学结构，现有的分析方法（比如红外、核磁共振、X-射线衍射、质谱等）足以将其化学结构完全搞清楚。总的来说，生物药的生产对于其生产条件的要求远比化学药苛刻，当然生产成本也

19、更高，而且生物药的临床前和临床阶段的研发成本也更高。监管差别基于此，监管机构(尤其在欧美)要求生物仿制药生产商提供足够的临床数据，这也导致生物仿制药在获批上市前的仿制成本往往比化学药高上百倍。也正是由于生物仿制药高昂的仿制成本和生产成本，一般生物仿制药和原研药相比，只能降价10%30%,而化学仿制药则可高达80%甚至更高。所以，化学原研药一旦专利过期，就会受到仿制药的猛烈冲击，而化学仿制药也会很快抢占市场；生物原研药则在专利过期后，其销量受仿制药的影响较小。生物药和化学药的另外一个重要区别是它们的免疫原性，几乎所有的治疗性蛋白都会在人体内产生抗体。它们会通过中和内源性因子而降低活力甚至诱发严重

20、的副作用。上市后的监管同样有区别。化学仿制药由于和原研药结构相同，且结构简单，欧美监管机构允许自动替换政策(即药剂师可以自主用化学仿制药替换原研药)，无须通知开处方的医生。而对于生物仿制药，欧盟法规明确要求不允许自动替换。尽管美国目前还没有明确要求，但是目前看，以后的政策有可能向欧盟靠近。这对于有志于进军生物仿制药的企业而言，也是一个潜在的风险。所以，相较于化学药，更加复杂并且通常也更加昂贵的生物药推向市场也面临更大的挑战，尤其是对于低收入水平的发展中国家而言。尽管目前在我国，本土生物药(如干扰素、生长因子等)在总的药物市场所占比例较小，而在欧美获批的创新生物药数量近几年基本占获批新药总量的三

21、成以上，由于生物药价格一般更高，生物药的市场份额在全球不断快速上升(2011年约占16%)。62阐述鼠源性单克隆抗体改造后的小分子抗体类型和应用(1) 人-鼠嵌合抗体将鼠MAb的可变区和人抗体的恒定区组成嵌合抗体由于这两部分在空间结构上相对独立，其独特的抗体亲和力保持得很好，但因鼠单抗可变区的存在，应用时仍有较强的排斥反应。(2)改形抗体在嵌合抗体的基础上进一步将鼠MAb可变区中相对保守的FR替换成人的FR,保留与抗原结合的CDR部位(3)Fab抗体Fab段由重链V区及CH1功能区与整个轻链以二硫键形式连接而成，主要发挥抗体的抗原结合功能。Fab抗体只有完整IgG的1/3。(4)单链抗体单链抗

22、体(SinglechainFv,scFv)是由一段弹性连接肽(Linker)把抗体可变区重链(VH)与轻链(VL)相连而成，是具有亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能结构单位。(5)单域抗体只含V区基因片段的小分子抗体，即只有VH或VL一个功能结构域，也能保持原单克隆抗体的特异性。这种小分子的抗体片段就称为单域或单区抗体，其分子量仅为整个Ig分子的1/12。(6)分子识别单位只含有一个CDR多肽的抗体。63、治疗性酶的临床使用范围(1)助消化的治疗酶类(2) 消化酶可以用于补充内源消化酶的不足，促进食物中蛋白质、脂肪、糖类的消化吸收，治疗消化器官疾病和由其他各种原因所致的食欲不振、消化不良。(

23、3) (2)心血管疾病治疗酶类(4) 心血管疾病治疗酶类是能够作用于血液循环系统的酶，临床上具有独特的抗凝、止血、扩展血管等功能。弹性蛋白酶能够降低血脂，用于防治动脉粥样硬化。(5) (3)抗肿痛治疗酶类(6) 抗肿瘤的治疗酶类，如L-门冬酰胺酶，是从大肠杆菌发酵液中提取的，是世界上第一个治疗癌症的酶，是令人瞩目的抗白血病药物，临床上用于治疗淋巴白血病和急性粒细胞白血病。(7) (4)其他治疗酶类(8) 超氧化物歧化酶(SOD)用于治疗类风湿性关节炎和放射病。PEG-腺甘脱氨酶(PEG-AdenaseBovine)用于治疗严重的联合免疫缺陷症。DNA酶和RNA酶可以降低痰液的黏度，用于治疗慢性

24、支气管炎。细胞色素C用于组织缺氧急救，透明质酸酶用于药物扩散剂。青霉素酶可以用于治疗青霉素过敏。64、简述生物技术药物质量控制特点(1)结构确认的不完全性生物技术药物多数为蛋白质或多肽及其修饰物，具有分子量相对较大，结构复杂多样性和可变性等特点，通过现有的理化方法和手段不能完全确认其化学结构特征，如产品的空间构象等。(2)质量控制的过程性生物技术药物的结构特性容易受到各种理化因素的影响，且分离提纯工艺复杂，因此其质量控制体系是针对生产全过程，采用化学、物理和生物学等手段而进行的全程、实时的质量控制。生产过程中每一环节或制备条件的改变均可能影响其非临床安全性评价的合理性。(3)生物活性检测的重要

25、性生物技术药物的生物活性与其药效和毒性有一定或较好的相关性，因此药效学和安全性研究应关注生物活性的测定。鉴于生物技术药物结构确认的不完全性，生物活性检测成为反映生物技术药物天然结构是否遭受破坏、生产各阶段工艺合理性和评价终产品质量控制的重要内容，也成为非临床药理毒理、药代等试验方案中剂量确定的依据。65、基因工程中的载体应满足什么条件1).能自我复制并能带动插入的外源基因一起复制；(2).载体分子的合适位置上必须有外源DNA插入的位点，即克隆位点，这些位点也就是限制性内切酶的切点，在载体上单一的限制性内切酶位点越多越好，这样可以将不同限制性内切酶切割后的外源DNA方便的插入载体。(3).具有合

26、适的筛选标记，如抗药性基因等，以便进行重组体筛选和鉴定。(4).在细胞内稳定性高且多拷贝，这样可以保证重组体稳定且高效传代而不易丢失。66、单克隆抗体的优点与常规抗体相比，单克隆抗体具有以下优点：McAb为高纯度单一抗体，在氨基酸序列以及特异性方面均为一致，检测灵敏度极高；可以通过杂交瘤细胞的大规模培养进行生产；杂交瘤细胞可以用液氮深冻法进行长期保存；可在分子水平上解析存在于病毒表面的抗原或受体；可以用不纯的抗原制备纯的McAb。但McAb也存在一些缺点：McAb特异性太强，有时不能检出微生物突变株；有时不能产生与抗原交联的功能；易受pH、温度及盐浓度的影响，或亲和力较低、半衰期短；McAb制

27、备程序复杂、工作量大。因此，可以采用常规抗体解决的问题就无须制备McAb。67临床前安全性评价的一般原则(1)常规研究的适用性鉴于生物技术药物结构和生物学性质的专一性和多样性，包括种属特异性、免疫原性和无法预料的多种组织亲和性等，常规的药物毒性试验的研究思路，包括研究步骤、考察项目等，可能不一定完全适合生物技术药物。(2)具体品种具体分析应根据具体生物技术药物的立题设计(包括药物设计思路、作用机制、分子结构特点、创新性程度和特点等)、质量控制、非临床安全性和临床特点(临床适应症的性质和用药人群、临床拟用药剂量、是否已有较多人用经验、预期重要临床不良反应等)和注册法规中治疗用生物技术药物注册分类

28、及申报资料项目要求、其它相关技术指导原则等来对上述内容进行具体问题具体分析。对于那些在结构和药理作用上与已有大量临床经验的产品类似的生物技术药物，可酌情减少毒性试验。(3)良好的试验管理规范(GLP)毒性试验条件应符合GLP要求。若不符合GLP条件，应阐明其对于总体安全性评价的影响。68、多肽蛋白药物的优势和缺点肽类药物多数源于内源性肽或其他天然肽，因此，其结构清楚，作用机制明确；与多数一般有机小分子药物相比，肽类药物具有活性高、用药剂量小、毒副作用低、代谢终产物为氨基酸等突出特点；与蛋白类相比，较小的肽几乎没有免疫原性；可化学合成，产品纯度高，质量可控。其缺点在于：易降解、半衰期较短；生物利

29、用度差；大多不能口服，一般为注射剂，需要研发适当的给药方式；大规模合成、分离纯化难度大；大肽具有免疫原性。69、生物技术药物质量标准的研究内容主要包括(1)研究生物技术药物产品的均一性。(2)研究建立生物技术药物产品生物学活性或者免疫学活性测定方法。(3)研究建立生物技术药物产品的国家标准品或参考品。(4)建立生物技术药物目标产品生产相关杂质限量分析方法和标准。(5)在以上研究的基础上制定出保证上述生物技术药物产品安全有效并与WHO标准相一致的质量控制标准和药物分析方法。70、单克隆抗体原理体内不同克隆的B淋巴细胞可合成不同特异性的免疫球蛋白。当机体受到抗原剌激后，抗原表面的抗原决定簇被携带有

30、相应BCR的B细胞克隆识别，在Th细胞的辅助下，该B细胞活化、增殖、分化为浆细胞，分泌针对同一抗原决定族的抗体。由于这一抗体是由来源于同一B细胞克隆产生的，只能识别单一抗原决定簇，因此称为单克隆抗体。两个或两个以上不同特性的细胞借助物理或化学手段融合在一起，形成杂交细胞，杂交细胞同时具有两种亲本细胞的基因和特性。经抗原免疫的小鼠脾细胞(含有大量B细胞)能分泌特定抗体，但在体外不能长期存活；而小鼠骨髓瘤细胞在体外可无限增殖，但不能分泌抗体。用一个骨髓瘤细胞和一个具有分泌抗体能力的B淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞。这种杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞无限增殖的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌抗体的能力。由杂

31、交瘤细胞无性繁殖形成的细胞系分泌的单克隆抗体分子在结构、活性、亲和力等方面均相同，具有高度的均一性。71、基因工程小鼠制备人全抗体的优缺点转基因小鼠：将人抗体生产基因转入小鼠，以替换小鼠的抗体生成基因。转基因小鼠制备人抗体的优点是，其功效优于其它生产抗人体蛋白单抗技术。不足之处：(1)转基因通常有体细胞突变和其它独特的序列，导致不十分完全的人序列；(2)由于抗体是在小鼠体内装配，因而产生的单抗具有鼠糖基化模式，所以这些单抗最终并不是全人的；(3)转基因小鼠表达的人Ig多样性较少，而且在同一小鼠中不能够产生IgG各亚类。72、简述发酵工程中的菌种选育菌种选育是按照生产的要求，以微生物遗传变异理论

32、为依据，采用人工方法使菌种发生变异，再用各种筛选方法筛选出符合要求的目的菌种。菌种选育的目的包括改善菌种的基本特性，以提高产量，改进质量，降低成本，改进工艺等。选育菌种的基本方法包括自然选育，诱变选育，代谢工程育种，基因定向育种，基因组改组等一系列方法。73、生物药物质量控制中的安全性检测项目包括11)无菌试验按照中国药典进行。注射用制品无菌试验有平皿法和滤膜法。口服和外用制剂检查项目还包括需氧菌、厌氧菌、霉菌和支原体。(2)热原试验热原试验一般采用家兔法。每只家兔耳沿静脉注射人用最大量的3倍量药物，判断标准为每只家兔体温升高不得超过0.6C,3只总和不超过1.6C。对生物活性比较高的细胞因子

33、产品可以考虑用内毒素检测替代家兔热原试验。(3)异常毒性试验主要检查生产工艺中是否含有目标产品以外的有毒物质。具体方法参考中国药典。常用动物为小鼠和豚鼠，注射剂量分别是小鼠1ml和豚鼠5mlo由于大多数重组产品本身有很强的生物活性，注射量过大会导致药物本身的生物活性引起毒性反应。因此不同重组产品，剂量选择和注射途径要根据各自的生物学活性来确定。11)无菌试验按照中国药典进行。注射用制品无菌试验有平皿法和滤膜法。口服和外用制剂检查项目还包括需氧菌、厌氧菌、霉菌和支原体。(2)热原试验热原试验一般采用家兔法。每只家兔耳沿静脉注射人用最大量的3倍量药物，判断标准为每只家兔体温升高不得超过0.6C,3

34、只总和不超过1.6C。对生物活性比较高的细胞因子产品可以考虑用内毒素检测替代家兔热原试验。(3)异常毒性试验主要检查生产工艺中是否含有目标产品以外的有毒物质。具体方法参考中国药典。常用动物为小鼠和豚鼠，注射剂量分别是小鼠1ml和豚鼠5mlo由于大多数重组产品本身有很强的生物活性，注射量过大会导致药物本身的生物活性引起毒性反应。因此不同重组产品，剂量选择和注射途径要根据各自的生物学活性来确定。74、目前主要用来制备人源单克隆抗体的两种方法（一）噬菌体抗体库噬菌体抗体库技术是噬菌体表面展示技术在基因工程抗体应用上的一个成功范例，它可以模拟体内B淋巴细胞受到刺激后分化、成熟直至分泌抗体的过程。通过噬

35、菌体表面展示技术，可将目的蛋白或多肽的编码基因与编码M13噬菌体颗粒末端蛋白的基因田构建成融合基因，将含有融合基因的重组M13噬菌体转染大肠杆菌，可以在噬菌体颗粒表面展示目的蛋白。通过基因重组技术，将全套人抗体重链和轻链的V区基因与M13噬菌休基因田构建成融合基因，在噬菌体表面以抗体Fv片段-末端蛋白融合蛋白的形式表达，表达这些融合蛋内的噬菌体群体就构成了噬菌体抗体库（phageantibodylibrary）。通过免疫法筛选，可从中得到针对某一抗原的人抗体Fv编码基因。利用噬菌休抗体库，不需要杂交瘤细胞就可得到目的单克降抗休的编码基因，而且是人源性的。从理论上讲，噬菌体抗体库具有B细胞所编码的全部抗体信息，从抗体库中可筛选到任何一种抗体。出于该抗体库中重、轻链是随机组合的，又称组合文库。迄今已成功制备出多种人源单克隆抗体。（二）人源性抗体转基因小鼠通过构建转基因小鼠，可使小鼠产生人源性单克隆抗体。用人的抗体基因转入小鼠替代小鼠相应基因，产生分泌人抗体的