细胞生物学研究方法部分总结

1、合肥学院2012届细胞生物学阶段性总结题目第三章细胞生物学研究方法部分总结姓名：崔俏俏专业：生物工程班级：12级生物工程（1）班学号：1202011027指导教师：李老师精品文档2013年10月22日第三章细胞生物学研究方法学习细胞生物学研究方法，了解实验原理，掌握基本实验方法，对于学习细胞生物学基础知识，加深对理论学说的理解，以及进行创新性研究，推动本学科和相关学科的不断发展都具有重要的意义。细胞生物学的研究方法和实验技术很多，根据研究方法的性质、特点、应用范畴和实验技术原理、类型及条件的相关性和类同性，可以将其主要的研究方法和实验技术分为以生物有机体组织细胞结构自然状态为主体的形态学研究方

2、法、细胞化学研究方法和模拟体内环境、以实验性设计为特色的综合性研究方法和分子生物学技术等。第一节细胞形态结构的观察方法光学显微技术根据光学原理不同，目前光学显微镜已发展成多种类型，教学研究领域中常见的主要有以下几种：一. 暗视野显微镜暗视野显微镜又称超显微镜或限外显微镜。它是根据“丁达尔效应”光学原理，设计出来的一种特殊显微镜，比普通光学显微镜的分辨率高50咅。它通过暗视野聚光器，把直射光照明变为斜射光照明，使通过样品进入物镜成像的光只有衍射光。所以，整个观察视野背景是黑暗的，而观察的样品在黑暗的背景反衬下显示出清晰的衍射光结构轮廓。二. 相差显微镜相差显微镜能够把相差变成振幅差，主要依赖于它

3、的特殊结构。首先用环状光阑代替可变光阑，环状光阑是由大小不同的环状孔形成的光阑，它们的直径和孔宽是与不同的物镜相匹配的，其作用是将直射光所成的像从一些衍射旁缘分出来。其次是用带相板的相差物镜代替普通物镜，相板分为共轭区和补偿区，可选择性地镀上吸收光线的吸收膜和推迟相位的相位膜，从而使相板具有既能推迟直射光线或衍射光的相位，又有吸收光调整亮度、突出叠加效果的作用。三. 荧光显微镜荧光显微镜是能够利用细胞内某些化学成分或细胞经特殊染色后，受到特定波长的光激发后，产生特征性波长的荧光，来检测细胞内某些化学组成的一种仪器。荧光显微镜是依靠一个高发光效率的点光源（高压汞灯），释放出含有较多数量的紫外光和

4、蓝紫光的复合光，经过滤色系统后，形成激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜（石英玻璃制成）的放大进行观察。应用荧光显微镜具有三个优点：敏感性高：只要细胞内某种物质的含量达到10-16克就能检测出来。特异性强：特定性质的化学物质，在一定激发光的激发下，产生荧光的光谱性质不变。测定快速：细胞受激发后，就可进行观察，5-10分钟即可获得对细胞的特定物质进行定性、定位研究的结果。第二节细胞培养细胞工程与显微技术操作细胞培养技术细胞培养是在无菌条件下，把动、植物组织细胞（微生物细胞），自有机体分离出来放在玻璃器皿内，加入人工配制的培养基，使细胞继续生存和生长，以直接观察

5、活细胞的形态、活动、分化及发育过程的一种技术。细胞培养的突出特点是在离体的条件下观察和研究细胞生命活动的规律。根据研究目的不同，可选用不同的培养方式。观察细胞形态变化，可用盖片微室悬滴培养、平板培养或液体悬浮培养，后用倒置相差显微镜进行活体观察；检查细胞繁殖速度，用细胞悬浮培养为宜。动物细胞一般接种于有培养液或半固体培养基的器皿中，于37C，5%C0295%空气，95%100%湿度的CO培养箱中培养。植物细胞或原生质体则采用固体、悬滴、液体等多种培养方法，温度为2530C,有时需光照，对液体培养需通风。细胞的生长需要有充分营养物质的培养基和适宜的环境条件。培养基不仅要具备正常机体中可以从外环境

6、中摄取的必需氨基酸，还要提供一些非必需氨基酸、多种维生素，这是细胞代谢过程中必不可少的成分，而离体的动植物细胞、原生质体自身不能合成；培养基中还需含Ca2+Mg2等无机离子与缓冲成分，以组成一定离子强度和稳定pH(pH7.27.4)的细胞生长条件；还应提供适量的葡萄糖，以维持细胞代谢及产能；动物细胞培养时，尚需加入适量的血清，而植物细胞及原生质体培养时，需加入生长素、激动素等植物激素。目前常见的细胞培养类型主要有：原核生物培养，动物细胞培养和植物细胞培养。一. 原生物细胞培养细菌细胞培养简便，生长繁殖快，不仅能直接利用细菌本身进行污水处理等工业化生产，而且目前的生物工程技术中，利用细菌表达一些人工构建的基因产物也成了现实，细菌细胞在基因工程研究中发挥着越来越重大的作用。细菌的培养关键是防止其它菌的污染，它可在液体培养基中生长也可在固体培养基上生长。二. 动物细胞培养体外培养的动物细胞可分为原代细胞与传代细胞。原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。三. 植物细胞培养植物细胞培养主要有单倍体细胞培养和原生质体培养。单倍体细胞培养主要用花药在人工培养基上进行培养。可以从小抱子（雄性生殖细胞）直接发育成胚状体，然后长成单倍体植株；或者通过愈伤组织诱导分化出芽