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文档简介

1、转基因小鼠筛选一一鼠尾提取基因组DNA方法1 .小鼠分笼后打耳标，剪取小鼠尾尖3mm-5mm左右于1.5mL离心管中，标记耳标号。2 .配置消化液，每管加入消化液0.5mL,55C,3-5h,或放置过夜。（最长可放置3天）。3 .加1倍体积（0.5mL）PCI（F层?体），上下颠倒10余次。（PCI可分装出一些现用，以免操作不慎污染）。4 .室温15000rpm离心，10min。5 .小心取上清约0.4mL入新管，依次标号，加入异丙醇0.4mL,上下倒转10次左右。6 .4，15000rpm离心，5min。7 .弃上清，滤纸吸干，加入70%ZJI0.5mL,将管底沉淀弹起，上下颠倒几次，洗涤。

2、8 .4，15000rpm离心，5-7min。9 .弃上清，瞬时离心，用枪吸干剩余液体，后经空气干燥5-10min。10 .加入1*TE60-170人一般加100人振荡30min溶解，于4c冰箱保存。注意事项：1 .小鼠耳标与管号一一对应，在剪尾或提取DNA过程中如发生混淆，则应重新剪尾。2 .配置消化液时，最后加蛋白酶K,配置完成后混合均匀再分装；分装后依次检查，确认每管的鼠尾都浸入在消化液中。尽量多配一些消化液，以免不够。3 .提取DNA之前，先检查鼠尾消化情况，过夜消化后，一般只能观察到少量骨骼及鼠尾毛发，如观察到鼠尾组织，说明消化不完全，可能是时间不够或消化液配置不正确。4 .由于实验

3、中用到的PCI异丙醇等对身体有害，因此在提取DNA和配置PCI时，应注意防护，戴好口罩和乳胶手套。5 .实验过程中，应轻拿轻放，避免液体洒出，沾湿手套，洗去Marker笔字迹等情况的发生。为了防止耳标号被擦掉，最好连号摆放。6 .吸取上清一步中，应保证上清质量，避免下层杂质的吸入，如不慎吸入，应将样品重新离心。7 .DNA沉淀一般呈白色或半透明胶状，混有杂质时可能带有黑色，提取过程中如观察不到沉淀，应做好标记，重新剪尾。8 .DNA样品保存于4c冰箱，保存时应标明剪尾日期，小鼠品系等各项资料，以便查找。9 .使用离心机时，离心管尽量分散放。10 .吸取挥发有腐蚀性液体时，应用带过滤装置的枪头，

4、以免腐蚀枪。（如酚、强酸、强碱等。）11 各管之间应隔开放，以免加液时混淆。12 .固定一把枪专用于吸取腐蚀性液体，如酚等。消化液配方1管20*SSC0.5MEDTA10%SDSMQH2025区L1 WL2/ 450L415lL0.1mL4L40L0.2mL20lL1磐10L0.1mL0.5mL50lL20r20L0.2mL1.0mL100lL4管1 mL40L0.4mL1.1 mL200lL6管1.5 mL3/ 460M0.6mL3.0mL300区L8管2mL80L0.8mL4.0mL400wL0.25mL0.5mL1MTris-Hcl101.66mL4.15mL8.3mL16.6mL25.8mL33.2mLProteinaseK5LPCI配方：Tris-TE配方

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