微生物大肠杆菌实验

1、 实验七、八食品微生物检查总纲实验目的和要求实验原理实验仪器和试剂实验步骤附：附1. MPN检索表.doc实验七、食品菌落总数的检验一、实验目的要求一、实验目的要求l1、了解细菌总数的测定的方法和意义。2、了解食品质量与细菌数量的重要关系3、通过实验,初步掌握食品污染的活细菌计数方法,以判别食品的卫生质量二、实验原理二、实验原理l菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数

2、并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。三、仪器和试剂三、仪器和试剂 l仪器仪器:微量移液器、锥形瓶、量筒、天平、剪刀、玻璃珠、钥匙、研磨钵、平皿、l材料材料:17栋凉皮1份l试剂试剂:无菌水, 营养琼脂培养基四四.实验步骤实验步骤 l (一一).菌落总数的测定菌落总数的测定:l 1. 基本操作过程：基本操作过程： 样品称量样品稀释倒平板培养48小时计数报告。 l 2. 样品的稀释样品的稀释:称样品25g225ml无菌水(带玻璃珠)振荡5-10分钟,即为1:10的样品稀释液l 3. 10倍稀释倍稀释:10-1取1ml放到9ml无菌水稀释管中,即为10-2的稀释液, 10-2

3、取1ml放到9ml无菌水稀释管中,即为10-3的稀释液l 4. 稀释倒平板稀释倒平板:取10-3、10-2、10-1三个稀释液各1ml,分别接入相应标号的平皿,每个稀释度接两个平皿,然后,每个平皿分别倒入约15ml已融化并冷至50度左右的营养琼脂培养基,轻轻摇匀,凝固后即成菌落总数测定的平板用,另外用1ml无菌水作空白对照试验，做1个平皿。l 5. 培养培养: 在361培养箱内倒置培养48h后取出 , 立即计算每个平皿内菌落数目，计算每个梯度平行皿的平均值。l 6. 细菌菌落计数细菌菌落计数l 应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若有两个稀释度，其生长的菌落数均在3

4、0-300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2，则报告其中较小的数字。l若所有稀释度平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。l若所有稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。l 若菌落数有的大于300，有的又小于30，但均不在30300之间，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。l 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。实验八实验八 大肠菌群总数的测定大肠菌群总数的测定l一、实验目的要求一、实验目的要求1、了解大肠菌群的测定的方法和意义。2、了解食品

5、质量与大肠菌群数量的重要关系。3、通过实验,初步掌握食品污染的活细菌计数方法,以判别食品的卫生质量。二、实验原理二、实验原理。l大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中的大肠菌群数系以100g检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示三、仪器和试剂三、仪器和试剂:l仪器:微量移液器、锥形瓶、量筒、天平、玻璃珠、钥匙、平皿、l材料:17栋凉皮l试剂:无菌水,乳糖胆盐发酵培养基、伊红美蓝琼脂平板、革兰氏染色液四、实验步骤四、实验步骤 l 1. 基本操作过程： 样

6、品称量样品稀释倒平板培养48小时计数报告。 l 2. 样品的稀释:称样品25g225ml无菌水(带玻璃珠)振荡5-10分钟,即为10-1的样品稀释液l 3. 10倍稀释:10-1取1ml9ml无菌水稀释管中,即为10-2的稀释液l（1）将待检样品（10-1取10ml双料、10-1取1ml 单料、10-2取1ml 单料）接种于乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3管，置361度温箱内，培养242小时。l（2）如所有乳糖胆盐发酵管都不产气不产酸，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气产酸者，则按下列程序进行，将产气产酸的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置361度温箱内,培养18-24小时，然后取出。l（3）在上述平板上，挑取可疑的大肠菌群（深紫色）1-2个进行革兰氏染色，观察若革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性，根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报