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1、实验实验9 9 纸层析纸层析 实验目的实验目的 实验原理实验原理 实验仪器和试剂实验仪器和试剂 实验步骤实验步骤 注意事项注意事项 实验结果实验结果 思考题思考题 实验目的实验目的了解纸层析的基本原理了解纸层析的基本原理掌握纸层析的基本操作技术掌握纸层析的基本操作技术实验原理实验原理纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维吸附水作为固定相,有机溶剂为流动相。滤纸纤维吸附水作为固定相,有机溶剂为流动相。当流动相流经固定相时,物质在两相间不断分配而得到分离。当流动相流经固定相时,物质在两相间不断分配而得到分离。由于它们的分配系数不同,不同氨基酸随流动相移
2、动的速率就不由于它们的分配系数不同,不同氨基酸随流动相移动的速率就不同,于是就将这些氨基酸分离开来,形成距原点不等的层析点。同,于是就将这些氨基酸分离开来,形成距原点不等的层析点。 溶质在滤纸上的移动速度用溶质在滤纸上的移动速度用R Rf f 值表示:值表示: 一定的物质在两相间有固定的分配系数,在恒定条件下,各物一定的物质在两相间有固定的分配系数,在恒定条件下,各物质有固定的质有固定的R Rf f 据此可达到分析鉴定的目的。据此可达到分析鉴定的目的。原点至展开剂前沿的原点至展开剂前沿的距离距离原点至层析斑点中心的距离原点至层析斑点中心的距离= =Rf lmnABA+BlnRAf=,lmRBf
3、=,R Rf f值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。仪器:仪器:层析缸层析缸层析滤纸层析滤纸直尺直尺铅笔铅笔毛细管毛细管电吹风电吹风试剂:试剂:展开剂:展开剂: 正丁醇正丁醇: :醋酸醋酸: :乙醇乙醇: :水水 = 4:1:1:2= 4:1:1:2显色剂显色剂: : 1% 1%茚三酮丙酮溶液茚三酮丙酮溶液样品样品: : A: A:丙氨酸丙氨酸(2%)(2%)乙醇溶液乙醇溶液 B:B:丙氨酸丙氨酸(2%)(2%)和亮氨酸和亮氨酸(2%)(2%)混合溶液混合溶液H2NCOOHCH3HH
4、2NCOOHCH2HCHCH3H3C丙氨酸:丙氨酸:亮氨酸:亮氨酸:实验仪器与试剂实验仪器与试剂实验步骤实验步骤1 1 准备准备2cm2cmA B手不要接触手不要接触滤纸中部滤纸中部A A丙氨酸丙氨酸B B丙氨酸丙氨酸+ +亮氨酸亮氨酸2 2 点样点样点样干后再点一次点样干后再点一次点样直径不超过点样直径不超过3mm3mm3 3 展开展开滤纸滤纸不要淹没滤纸起点线不要淹没滤纸起点线不要跟层析缸壁接触不要跟层析缸壁接触层析缸封闭层析缸封闭20 min20 min划出展开剂前沿位置划出展开剂前沿位置电吹风吹干电吹风吹干4 4 显色显色喷茚三酮溶液喷茚三酮溶液电吹风吹干溶剂电吹风吹干溶剂直至紫红色斑
5、点出现直至紫红色斑点出现划出斑点的轮廓划出斑点的轮廓标出斑点的中心标出斑点的中心nml5 5 计算计算注意事项注意事项实验过程中手不要接触滤纸中部实验过程中手不要接触滤纸中部实验成败决定于点样的好坏,要求点的样直径不超过实验成败决定于点样的好坏,要求点的样直径不超过3mm3mm展开剂不要淹没滤纸上起点线;起点线应与展开剂液面展开剂不要淹没滤纸上起点线;起点线应与展开剂液面平行;滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触;展开时层析缸封平行;滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触;展开时层析缸封闭闭分别计算丙氨酸和亮氨酸的分别计算丙氨酸和亮氨酸的R Rf f值值每人单独操作,样品层析滤纸附在实验报告上每人单独操作,样品层析滤纸附在实验报告上实验结果实验结果R Rf f值的意义
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