有机物的分离和结构鉴定

1、第二章有机物提取收集方法2.1 溶剂提取法一.溶剂提取法：1 .溶剂提取法：利用相似相溶原理选择合适的溶剂将有机物从待分离和结构鉴定的样品中提取出来。2 .原理：利用有机物在溶剂和样品中的溶解度的差异。（关键：选用合适的溶剂）二.溶剂的选择：水；有机溶剂。1 .极性：指溶剂对电荷的亲和能力，常用介电常数来比较溶剂的极性大小。2 .水：适用于无机盐、单和低聚糖、糅质、氨基酸、蛋白质及多肽、有机酸、生物碱和甘类（适当时可用稀酸或稀碱水溶液提取）。3 .有机溶剂：4 .溶剂选择原则：极性物质易溶于极性溶剂；非极性物质易溶于非极性溶剂；碱性物质易溶于酸性溶剂；酸性物质易溶于碱溶剂。溶剂的惰性：（针对性

2、）化学惰性：指溶剂本身不能和有机物发生化学反应而导致有机物结构变化。溶剂的混合：溶剂的去除：尽可能选用低沸点易挥发的溶剂。样品的形态：提取温度和时间等。3 .提取方法：1 .液一气提取法：选择合适的溶剂，将气态样品通过溶剂（将有机物溶解并吸收）C装置：导气管、溶剂池、动力泵和气体流量计等。<要点：尽可能使气体与溶剂有较大的接触面积。溶剂：水、亲水或亲脂有机溶剂。I例：用5%甲醇溶液收集有机磷农药；用10%乙醇溶液收集硝基苯。2 .液一周提取法：原理方法：将固体样品放入溶剂中浸泡（必要时进行振荡和加热处理），一定的时间后通过离心或过滤操作将溶剂和固体分开。间接：I连续：saxhlet提取器

3、分配系数E=C有/C水.（水相一有机相）（可用分液漏斗）JE大，有机物易从水相转移到有机相，LE小，相反。（可用连续液一液萃取）分液漏斗操作注意点：分液漏斗容量应比液体体积大1倍以上，加入溶剂的体积约为样品体积的1/3左右；防止有机蒸气冲开活塞；萃取振荡应间歇进行，并将分液漏豆下部分出口朝上并面对通风柜打开活塞放气；下层液由下部出口放出，长层液由上部出口倒出；各次萃取液合并。连续逆流萃取（countercurrentdistribution）：适用于E很小的强亲水有机物的萃取。乳化：可通过静止，加盐或其它有机溶剂，过滤和离心等方法破乳（细金属丝与容器壁摩擦）。无机盐：NaCl、Na2SO4等。

4、1有机溶剂：甲醇等。离心：2000rmin-1,2min。4 .常见有机物的溶剂提取通法：1 .溶剂梯度和极性溶剂直接提取方法：溶剂梯度提取方法：低极性溶剂提取（石油醴、正己烷）一脂溶性物质一叶绿素、油脂、蜡等杂质;中极性溶剂提取（氯仿、乙醴）一中性物质一杂质较少；高极性溶剂提取（乙酸乙酯、甲醇）一高极性物质一树脂、蛋白质、糖等杂质。极性溶剂梯度法：2 .提取通法：生物碱类物质：用甲醇浸提样品，浸提液除去甲醇后加5mL2啕HCl溶液溶解残渣。酸水加23滴Dragendoff或Wagner试剂。如有黄棕色或红棕色沉淀，表明样品中含有生物碱物质。Dragendoff试齐1J（碘化钿钾试剂）：取次硝

5、酸钿8g,溶于17mL30的HNO§液中,搅拌下缓慢滴加到含有27.2gKI的20mL*溶液中，静谿过夜，上层清液加水稀释至100mL即成。或直接将16g碘化钿，30gKI和3mLHC蛀溶于100mLzK中。Wagner试剂（碘一碘化钾试剂）：将1g碘和10gKI共溶于50mLK中，加热条件下加入2mL乙酸，用水稀释至100mL酸水提取方法：先用1%左右稀酸水溶液浸提样品，酸水浸提液再加有机溶剂并用稀碱碱化，分离出有机相并浓缩可得到生物碱粗品（室温下进行）。亲水溶剂提取法：用甲醇和乙酸等亲水溶剂直接提取样品，一般在加热回流的条件下进行（提取效率不如酸水提取法）。亲脂溶剂提取方法：用1

6、0%R水或碳酸钠水溶液使样品中生物碱全部转为游离状态，然后用苯、氯仿和乙醴等溶剂提取（选择性高、杂质少、效率低）。酚类物质：可用1%E氯化铁或三氯化铁一铁氟化钾水或醇溶液鉴别酚类物质（蓝色、绿色或紫色配合物）。提取：可用稀碱水溶液提取（可以加热），提取液冷却和浓缩可以直接得到酚盐。稀酸中和碱性水提取液再用乙酸乙酯等溶剂萃取。黄酮类物质：鉴别：（镁粉盐酸反应）将样品用钾醇浸提后取1mL浸提液并加少许镁粉，再添加34滴浓盐酸（必要时加热），黄酮：橙色和微红色；黄酮醇、二氢黄酮醇分别呈红、紫、绿和蓝色。提取：水提取，6070c水提取液浓缩后，加入34倍量的乙醇至水提浓缩液中，使蛋白质和糖类物质沉淀析

7、出，过滤浓缩醇水溶液可得到黄酮。醇提取：将样品在70猿醇中加热回流，提取液趁热过滤，滤渣反复洗涤，合并滤液和洗液，用乙酸乙酯萃取可得到黄酮类物质。慈酿类物质（天然的色素）：检验：碱试验（Borntrager反应）：1mL样品的醇浸提液，先加12滴10%勺NaOH溶液，试验呈深红色，再加NaOK加热，深红不褪，但加10%勺HCl溶液则褪色，冉加碱，试验又呈深红色。提取：先将样品在20%酸水中水解，然后用苯萃取酸水液可得到慈酿类物质。糖甘：用90%乙醇加热提取，提取液浓缩后，分别用苯或氯仿、水萃取，有机相可得到游离的慈酿物质，水相可得糖甘葱酿。香豆素及内酯化合物：鉴别：样品的95%的乙醇溶液浸提液

8、加入数滴饱和盐酸羟胺和氢氧化钾乙醇溶液，加热数分钟后冷却，试样用5%的HCl溶液调至酸性，再加10%三氯化铁水溶液12滴，若试样呈紫色则表明样品中含有香豆素及内酯物质。提取：（梯度溶剂法）先用石油醴等低极性溶剂将大多数亲脂性的香豆素及内酯提取出来，然后继续用乙醴等中极性溶剂提取相应极性的香豆素及内酯（若还有较强极性香豆素及内酯可继续用甲醇、乙醇甚至水为溶剂进行提取）。强心甘类物质：鉴别（三氯化铁一冰乙酸试剂KellerKiliani反应）：将生物样品研碎后用甲醇提取，醇浸提液在试管中浓缩后加0.5%的三氯化铁一冰乙酸溶液12mL,然后沿试管壁小心加入等体积浓硫酸，若硫酸和冰乙酸界面会很快出现红

9、棕色环，上层冰乙酸逐渐变为蓝色，则表明试样中含有强心甘。提取：70%以上乙醇破坏酶的活性，再用有机溶剂提取，也可用混合溶剂（氯仿一甲醇一水）提取。皂甘类物质：鉴别：将样品的水提液在试管中用力振摇数分钟，若产生泡沫并在10min以后不消失，则可肯定样品中含有皂甘。乙酸酊一浓硫酸反应（LiebermanrBurchard反应）：取样品水提液3mL并蒸干，残渣用0.5mL乙酸酊溶解放入试管或比色盘中，从边沿小心加浓硫酸1滴，试样出现颜色变化，一般由黄色变为红色、紫色、蓝色或绿色，如果是番体皂甘，颜色变化较快，最后呈污绿色，如果是三菇皂昔则最终呈蓝色。提取：可用6070%甲醇或乙醇为溶剂提取（热醇中溶

10、解，冷醇中的溶解度降低），提取液冷却，过滤，滤液浓缩后加入适量乙醴或丙酮，可以析出其它皂甘。水提取：将样品放入热水中并加热，水提取液浓缩后，加入二倍量95%乙醇溶液，使蛋白质和糖类沉淀并滤去，滤液中加入适量乙醴可析出皂昔。第三章.有机物常规分离方法§ 3.1 蒸储法一.简单蒸储（组份少且各组份间沸点相差较大30C以上的混合液体有机物的分离。）1 .操作装置：蒸储瓶、蒸储头、温度计、冷凝管、接受瓶等组成。2 .操作要点：2 .分储（精储）：沸点相差30c以上不用分储柱，相差20c左右时选用简单的分储柱，相差约10c时选用精细的分储柱，相差10c以下时选复杂精细的分储柱。3 .减压蒸储：

11、§ 3.2 结晶和沉淀法一.基本原理和基本操作：1 .溶剂的选择：所选溶剂应不与固体有机物发生化学反应，尤其在加热条件下，溶剂沸点不易太高（以便结晶后除去），且毒性小，价格便宜等。溶剂应能使一种固体有机物在其中的溶解度随温度变化越大越好，而使另一种固体有机物要么在高低温溶解度都大，要么在高低温溶解度都很小。混合溶剂的选用：一般由两种溶剂组成，一种溶剂对固体有机物有很好的溶解性能，另一种则难以溶解固体有机物，且两种溶剂必须是任意混溶的（如水一甲醇、石油醴一苯、乙醴一丙酮和氯仿一甲醇等）。使用混合溶剂重结晶时，可将不同的溶剂按比例预先混合好，但经常采用的操作是将固体有机固体放在溶解性能好

12、的溶剂中，加热回流后滤去不溶物后，滤液趁热滴加另一种溶解性能差的溶剂，使滤液至浑浊为止，再加热回流或滴加溶剂性能好的溶剂使滤液再变清后放置冷却（若冷却放置没有固体析出或析出油状物，则需调整两溶剂的比例）。预实验：取100mg固体有机混合物放入试管中，滴加1mL溶剂，振荡观察试样溶解情况，若很快溶解，表明溶剂对试样溶解性太好，不适合选用，若试样不溶解，且加热至沸腾并补加34倍溶剂，仍难溶解，表明该溶剂溶解性能太差，也不能选用，只有在加热条件下，使用14mL就能溶解100mg试样，并能在冷却情况下析出固体的溶剂才能选作结晶的溶剂。2 .结晶或重结晶的操作：使用回流装置3 .沉淀法：沉淀剂：乙酸铅中

13、性I碱性中性乙酸铅：有机酸、酸性皂甘、部分黄酮、蛋白质、氨基酸、糅质、树脂等酸性和酚性物质生成沉淀。:碱性乙酸铅：能沉淀中性乙酸铅的物质外，还能沉淀醇、酮、醛、异黄酮、部分生物碱和糖类有机物。乙酸沉淀法分离植物体有机物：脱铅：硫化氢、硫酸、强酸性阳离子交换树脂等。二.应用实例：1.小集碱（berberine及相关生物碱的提取分离：药用价值（“黄连素”的主要成份）与其伴生的有：药根碱（jatrorrhizine）、巴马亭（palmatime）、小聚胺（berbamine污。§3.3固相萃取和膜分离技术一.周相萃取技术(SolidPhaseExtractionSPE)：1 .原理：2 .分离模式：正相：吸附剂的极性大于洗脱液极性，吸附剂中有机物依洗脱剂的极性从小到大顺序被洗脱出来。反相：吸附剂极性小于洗脱液极性，有机物依洗脱溶剂极性从大到小顺序被洗脱出来。3 .分离模式的