伯乐 cfx3.0操作指南

1、CFX Real-Time PCR Detection System CFX快速梯度荧光定量PCR仪主要包含但不局限与以下领域的应用： 基因的表达量检测水平（仪器具有相对定量功能） 基因分型鉴定水平（仪器具有基因分型功能） 核酸（包括微生物）含量检测水平（仪器具有绝对定量功能） 微生物鉴定水平（仪器具有终点法分析，熔解曲线分析功能） 核酸突变(如SNP)检测及扫描水平（仪器具有基因分型功能） 蛋白构象分析水平（仪器具有专门的FRET通道）CFX 开启仪器开启仪器仪器自检后，开启软件。仪器自检后，开启软件。开启或关闭开启或关闭Lid新建实验，开启新建实验，开启数据进行分析等数据进行分析等Prot

2、ocol-实验反应程序设置实验反应程序设置从从Express Load下拉菜单直接加载所需程序。下拉菜单直接加载所需程序。主要分为主要分为2步法步法-2stepAmp及及3步法步法-3stepAmp。带有带有+Melt为为SYBR等染料法使用的。等染料法使用的。带有带有Gradient的为温度梯度预设程序。的为温度梯度预设程序。点击点击Edit进入编辑界面。进入编辑界面。根据实际反应体系，更改根据实际反应体系，更改sample volume。根据预混液条件更改预变性温度、时间及延伸时间。根据预混液条件更改预变性温度、时间及延伸时间。Protocol-实验反应程序设置实验反应程序设置Plate设

3、置设置在在Express Loading下拉菜单中直接加载全板扫描下拉菜单中直接加载全板扫描Quick Plate_96_wells_SYBR Only适用于一个反应管中仅有适用于一个反应管中仅有SYBR或或FAM探针探针Quick Plate_96_wells_All Channels适用于一个反应管中含有多条探针适用于一个反应管中含有多条探针运行实验运行实验点击点击Start Run运行实验。运行实验。Run Status查看仪器热循环体运行情况查看仪器热循环体运行情况运行实验运行实验Real-Time Status可显示实时监测的荧光信号变化情况可显示实时监测的荧光信号变化情况运行实验运

4、行实验编辑编辑Plate实验结束后。仪器会自动生成实验结束后。仪器会自动生成Data文件。点击文件。点击Data文件的文件的View/Edit Plate进进行行Plate的编辑。的编辑。选中所有的孔，点击选中所有的孔，点击Clear Wells。清除所用孔信息。清除所用孔信息。编辑编辑Plate样品放置样品放置位置位置设置样品设置样品类型类型加载荧光信加载荧光信号名称，输号名称，输入基因名字入基因名字选择正确的荧选择正确的荧光信号名称光信号名称输入样品处输入样品处理信息理信息设置平行重复设置平行重复设置标准品设置标准品的起始浓度的起始浓度设置相对设置相对定量信息定量信息编辑编辑Plate确定

5、内参基因确定内参基因确定样品处理组对照确定样品处理组对照实验结果分析实验结果分析-标准曲线标准曲线在在Quantification下可查看扩增曲线，标准曲线下可查看扩增曲线，标准曲线鼠标右击图片区域可鼠标右击图片区域可Copy或保存为图片格式。或保存为图片格式。扩增曲线扩增曲线标准曲线标准曲线E值，值，R2值值Cq值值实验结果分析实验结果分析-标准曲线标准曲线在在Quantification Data下查看下查看Cq值。鼠标右击可将数据输出到值。鼠标右击可将数据输出到Excel表。表。实验结果分析实验结果分析-熔解曲线熔解曲线在在Melt Curve下查看熔解曲线下查看熔解曲线鼠标右击图片区域

6、可鼠标右击图片区域可Copy或保存为图片格式。或保存为图片格式。熔解曲线熔解曲线原始图原始图熔解曲线熔解曲线负导图负导图Tm值值实验结果分析实验结果分析-标准曲线标准曲线在在Melt Curve Data下查看下查看Tm值。鼠标右击可将数据输出到值。鼠标右击可将数据输出到Excel表。表。实验结果分析实验结果分析-相对定量相对定量在在Gene Expreesion里查看相对定量结果里查看相对定量结果鼠标右击相对定量数据区域可将数据输出至鼠标右击相对定量数据区域可将数据输出至Excel表表相对定量相对定量柱形图柱形图相对定量相对定量数据数据2-Ct实验结果分析实验结果分析-基因分型基因分型基因分型基因分型散点图散点图基因分型基因分型Data在在Allice Discrimination下查看基因分型结果。下查