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文档简介

1、实验6 细胞冻存与复苏1- 细胞冻存操作步骤n准备q冻存液（完全培养基配制的10%DMSO 溶液）配制q对数生长期细胞的吹打（消化）、收集、离心和计数（或估算）n1000rpm6min，去上清q用冻存液悬浮细胞使密度在106/ml 左右n分装到冻存管q用记号笔在冻存管上加写标识（细胞株号+日期+操作者）q无菌分装到1.8ml 冻存管，装量0.51.0ml/支n冻存q直接放入超低温冰箱（-76 ），记录放置的具体位置q一般需要放入液氮内（-196 ）内冻存超低温冰箱n制冷系统q基本采用复叠式制冷的工作原理，选用两台全封闭压缩机作为高、低温级压缩机使用n外观q卧式，立式n-86超低温冰箱使用q使用

2、9095%能力，以延长机器寿命；设置使用温度为-76q影响保温的因素：门霜和冰块q使用过程中，温度升高到-60时必须关闭箱门2- 细胞复苏操作步骤n准备q超净工作台消毒灭菌，无菌器材准备q准备37水浴q明确冻存细胞所在冻存管的存放位置，确认冻存1824h以上n融化q在水浴中充分搅拌使在1min 融化彻底n离心去除冻存液q无菌操作，10体积的培养基稀释，1000rpm6min，去上清，分散沉淀n重新悬浮q用5体积的完全培养基悬浮细胞，铺放培养孔或培养瓶内，镜检n培养与观察q用记号笔加写标识，镜检观察q置CO2 培养箱内，培养1824h后镜检细胞活性3- 工作总结与评价n细胞冻存操作中影响细胞活性的因素分析n细胞

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