有关物质分析方法验证方案

1、*制药股份有限公司文件编号：文件编号：题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案第第 1 页页 共共 12 页页8*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案20*年*月*制药股份有限公司文件编号：文件编号：题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案第第 2 页页 共共 12 页页验证方案的起草与审批验证方案的起草与审批验证小组成员验证小组成员部门人员职责验证小组组长验证小组组长部门人员职责负责组织起草验证方案并按批准方案组织实施；督促验证人员做好记录；负责各阶段验证结果汇总及评价、组织起草验证报告；组织相关培训 方案审核方案审核审

2、核签名及日期验证委员会方案批准方案批准批准人批准日期方案实施日期：方案实施日期：*制药股份有限公司文件编号：文件编号：题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案第第 3 页页 共共 12 页页目目 录录1.验证目的验证目的.42.方法简介与确认范围方法简介与确认范围.43.标准品、供试品标准品、供试品.44.风险评估风险评估.45.验证的可接受标准验证的可接受标准.46.验证步骤验证步骤.46.1 系统适应性系统适应性.46.2 专属性专属性.66.3 检测限与定量限检测限与定量限.86.4 线性线性.96.5 准确度准确度.96.6 精密度精密度.106.6 范围范围

3、.106.7 耐用性耐用性.106.8 样品测定样品测定.117.偏差偏差.118.风险的接收与评审风险的接收与评审.119.再验证再验证.1110.确认结果评审和结论确认结果评审和结论.1111.更改历史更改历史.1212. 附录附录.12*制药股份有限公司文件编号：文件编号：题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案第第 4 页页 共共 12 页页1. 验证目的验证目的根据法规的要求，采用非药典或其它法规未收载的分析方法应进行验证，证明采用的方法适合于相应的检测要求。这个验证方案的目的是为验证提供具体方法参数、可接受标准和研究步骤。2. 方法简介与确认范围方法简介与

4、确认范围*原料有关物质检测方法为自行开发的液相室色谱方法。为确保方法的准确性和可行性，为日常检测方法提供依据，现对该方法进行验证。方法验证必须按照验证方案进行，此次验证方案提供*原料含量分析方法验证验证，包括：专属性、精密度、线性、范围、准确度、检测限&定量限、耐用性。3. 标准品、供试品标准品、供试品3.1 标准品 名称批号来源3.2 供试品 名称批号来源4. 风险评估风险评估按照质量风险管理规程 ，质量控制部和质量管理部共同对分析方法进行了风险评估，确定了需进行方法确认的项目。具体见下表：风险因素风险可能影响效应现有控制措施SPDRPN风险级别建议采取措施专属性不具有专属性分离度不

5、好，影响杂质定量每次试验测试分离度33327中首次使用前，对专属性进行验证定量限 定量限 小的杂质不能无33327中对该方法的定*制药股份有限公司文件编号：文件编号：题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案第第 5 页页 共共 12 页页与检测限高被检出量限进行验证。精密度精密度差不同时间或人员测定的结果不一致每次测试前进行系统适用性测试33327中首次使用前，对精密度进行验证准确度回收率低杂质结果不准确无33327中首次使用前，对准确度进行验证线性线性不好杂质结果不准确无33327中首次使用前，对线性进行验证范围范围窄浓度超过范围后结果不准确无33327中首次使用前

6、，对范围进行验证耐用性耐用性差参数微小变化对结果影响很大无33327中首次使用前，对耐用性进行验证风险评估人：评估日期：5. 验证的可接受标准验证的可接受标准项目可接受标准专属性空白无干扰，主峰与相邻峰之间的分离度不小于1.5，峰纯度应不小于 0.990.检测限与定量限0.05%线性R0.999准确度回收率在 0.05%质量指标的 140%范围内精密度重复性 RSD%10.0%中间精密度 RSD%10.0%精密度：两组数据平均检测结果的相对偏差20.0%*制药股份有限公司文件编号：文件编号：题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案第第 6 页页 共共 12 页页范围应

7、至少为指标的 80%120%耐用性评估柱温、流速、色谱柱、缓冲盐 pH、有机相比例、流动相比例、溶液放置时间对检测结果的影响6. 验证步骤验证步骤6.1 系统适应性系统适应性分离度测试液：取*产品分离度标准品 5mg，置于一比色管中，加稀释液 10ml 溶解，在 95下水浴加热 30 分钟，放冷。标准液：取*产品标准品25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度；精密移取1ml，置于一100ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度。取分离度测试液进样，记录色谱图，*产品与*-3异构体之间的分离度应不小于2.0。取标准液进样，记录色谱图，*产品主峰拖尾因子应不大

8、于 2.0，理论塔板数应不低于 3000；标准液连续进样 6 次，主峰面积的相对标准偏差应不大于 5.0%，保留时间的相对标准偏差应不大于 1.0%。6.2 专属性专属性a) 溶剂空白：取空白进样，记录色谱图，溶剂对测定应无干扰。b) 样品液：取本品25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。c)杂质1定位溶液：取杂质1约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度

9、。主峰峰纯度应不小于0.990。d)杂质2定位溶液：取杂质2约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度。主峰峰纯度应不小于0.990。e)杂质3定位溶液：取杂质3约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度。主峰峰纯度应不小于0.990。*制药股份有限公司文件编号：文件编号：题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案第第 7 页页 共共 12 页页f)杂质4定

10、位溶液：取杂质4约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度。主峰峰纯度应不小于0.990。i)杂质5定位溶液：取杂质5约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度。主峰峰纯度应不小于0.990。j)杂质6定位溶液：取杂质6约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度。主峰峰纯度应

11、不小于0.990。k)杂质7定位溶液：取杂质7约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度。主峰峰纯度应不小于0.990。l)杂质8定位溶液：取杂质8约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度。主峰峰纯度应不小于0.990。m)杂质9定位溶液：取杂质9约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液

12、溶解并稀释至刻度。主峰峰纯度应不小于0.990。n)杂质 10 定位溶液：取杂质 10 约 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度。主峰峰纯度应不小于 0.990。o) 高温破坏试验：取在 60加热 10 天的样品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度，即得高温破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于 1.5，主峰峰纯度应不小于 0.990,记录各杂质的变化。p) 高湿破坏实验：取在相对湿度为

13、90%5%的条件下放置 10 天的样品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度，即得高湿破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于 1.5，主峰峰纯度应不小于 0.990,记录各杂质的变化。q) 强光破坏试验：取经取经总照度不低于1.2106Lux.hr 强白光,近紫外能量不低于200w.hr/m2破坏的的样品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后*制药股份有限公司文件编号：文件编号：题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案第第 8 页页 共共 12 页页用稀

14、释液溶解并稀释至刻度，即得强光破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于 1.5，主峰峰纯度应不小于 0.990,记录各杂质的变化。r) 酸破坏试验：取样品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 0.1mol/L 盐酸溶液1.00ml，25下放置 24 小时，然后用 0.1mol/L 氢氧化钠溶液 1.00ml 中和，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度，即得酸破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于 1.5，主峰峰纯度应不小于 0.990,记录各杂质的变化。s) 碱破坏试验：取样品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 0.1mol/L 氢

15、氧化钠溶液1.00ml，25下放置 24 小时，然后用 0.1mol/L 盐酸溶液 1.00ml 中和，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度，即得碱破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于 1.5，主峰峰纯度应不小于 0.990,记录各杂质的变化。t) 氧化破坏试验：取样品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 10%过氧化氢溶液 1ml，25下放置 24 小时，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度，即得氧化破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于 1.5，主峰峰纯度应不小于0.990,记录各杂质的变化。i)根据杂质 110 的

16、定位溶液和*标准品溶液的主峰峰面积，计算响应因子，以*标准品为 1.0 计，计算各杂质的相对响应因子。6.3 检测限与定量限检测限与定量限a) 定量限：取*产品标准品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度；用稀释液分步稀释成一定浓度的溶液，进样，获得的色谱图中，信噪比(S/N)为(1020):1 时，相应的浓度即为定量限浓度。定量限精密度：配制 6 个相同浓度的定量限溶液进样，主峰保留时间的相对标准偏差应不大于 2.0%，峰面积的相对标准偏差应不大于 5.0%。定量限应不大于 0.05%。定量限准确度：LOQ 储备溶液：根据 LOQ

17、测试结果配制 LOQ 储备溶液，浓度为 LOQ 浓度的 5 倍。LOQ 浓度杂质标准溶液：移取杂质标准储备溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻度。计算杂质的单位浓度峰面积。同法配制 3 个。供试液：取*产品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。同法配制 3 个。LOQ 回收率测试液：取*产品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入 LOQ储备液 5.0ml，用稀释液稀释至刻度(相当于杂质的 LOQ 浓度)。同法配制 3 个。分别取 LOQ 浓度杂质标准溶液、供试液进样，计算杂质标准的单位浓度峰面

18、积和供*制药股份有限公司文件编号：文件编号：题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案第第 9 页页 共共 12 页页试液中所含杂质的单位浓度峰面积。LOQ 回收率测试液各进样 3 针，计算回收率，每个回收率及平均回收率应为 80120%，各回收率的相对标准偏差应不大于 15%。回收率(%)=计算浓度100%/实际浓度。b) 检测限：取*产品标准品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度；用稀释液分步稀释成一定浓度的溶液，进样，获得的色谱图中，信噪比(S/N)为(35):1 时，相应的浓度即为检测限浓度。6.4

19、线性线性a)杂质标准储备溶液：取杂质 1 约 10mg，杂质 2 约 50mg,杂质 3 约 15mg, 杂质 4 约75mg，杂质 5 约 10mg,杂质 6 约 50mg, 杂质 7 约 15mg，杂质 8 约 10mg,杂质 9 约 50mg, 杂质 10 约 50mg 至 100ml 容量瓶中，精密称定，加乙腈 5ml 溶解后用流动相稀释至刻度，再移取 2.0ml 至 20ml 容量瓶中，流动相稀释至刻度。b)线性 L1 溶液：取检测限与定量限项下的 LOQ 浓度杂质标准溶液。c)线性 L2 溶液：移取杂质标准储备溶液 3.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻度。计算杂质的

20、单位浓度峰面积。 （相当于 60%杂质限度，也可以不做，但至少保证有5 个点）d)线性 L3 溶液：移取杂质标准储备溶液 4.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻度。计算杂质的单位浓度峰面积。 （相当于 80%杂质限度）e)线性 L4 溶液：移取杂质标准储备溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻度。计算杂质的单位浓度峰面积。 （相当于 100%杂质限度）f)线性 L5 溶液：移取杂质标准储备溶液 6.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻度。计算杂质的单位浓度峰面积。 （相当于 120%杂质限度）g)线性 L6 溶液：移取杂质标准储备溶液 7.0ml

21、至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻度。计算杂质的单位浓度峰面积。 （相当于 140%杂质限度）进样，记录色谱图，以样品浓度(g/ml)为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性回归计算，得出线性回归方程及相关系数。线性范围为杂质的定量限浓度至约 1.4 倍最大允许杂质限度浓度，相关系数 R 应不小于 0.990，Y 轴截距应在 100%响应值的 25%以内，响应因子的相对标准偏差应不大于 10%。6.5 准确度准确度a)杂质标准储备溶液：取杂质 1 约 10mg，杂质 2 约 50mg,杂质 3 约 15mg, 杂质 4 约75mg，杂质 5 约 10mg,杂质 6 约 50mg, 杂质 7 约

22、 15mg，杂质 8 约 10mg,杂质 9 约 50mg, *制药股份有限公司文件编号：文件编号：题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案第第 10 页页 共共 12 页页杂质 10 约 50mg 至 100ml 容量瓶中，精密称定，加乙腈 5ml 溶解后用流动相稀释至刻度，再移取 2.0ml 至 20ml 容量瓶中，流动相稀释至刻度。b)LOQ 储备溶液：根据 LOQ 测试结果配制 LOQ 储备溶液，浓度为 LOQ 浓度的 5 倍。c)杂质标准溶液：移取杂质标准储备溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻度。同法配制 3 个。计算杂质的单位浓度峰

23、面积。 （相当于杂质限度溶液）d)供试液：取*产品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。同法配制 3 个。计算样品中各杂质的单位浓度峰面积，用于扣除回收率测试中扣除空白的依据。e)回收率测试液 1：取*产品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入上述杂质标准液储备液 5.0ml，用稀释液稀释至刻度(相当于杂质的限度)。f)回收率测试液 2：取*产品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入上述杂质标准液储备液 7.0ml，用稀释液稀释至刻度(相当于杂质的限度的 1.4 倍)。i)回收率测试液 3：取*产

24、品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入 LOQ储备液 5.0ml，用稀释液稀释至刻度(相当于杂质的 LOQ 浓度)。(也可以配制相当于杂质限度的 0.8 倍的溶液，但是为了减少工作量，还是最好做 LOQ 点的回收率)。分别取杂质标准溶液、供试液、回收率测试液 1、回收率测试液 2、回收率测试液 3各连续进样 3 次，按外标法以峰面积计算*产品的量，并计算回收率，每个回收率及平均回收率应为 80120%，各回收率的相对标准偏差应不大于 15%。回收率(%)=计算浓度100%/实际浓度。6.6 精密度精密度a)重复性：称取*产品样品适量，照有关物质检查方法配制样品溶液，同法配制

25、 6份样品溶液，进样测试，各杂质测定结果的相对标准偏差均应不大于 10%。b) 中间精密度：不同仪器(Agilent 1200)、不同检验人员(另一位化验员)、新配制的流动相、新配制的样品液及标准液，与重复性测试测同一批样品，各杂质测定结果的相对标准偏差均应不大于 10%。c) 精密度测试结果：重复性测定结果的平均值与中间精密度测定结果的平均值之间的相对偏差不大于 20%。6.6 范围范围 根据线性、精密度和准确度确定方法的范围，在该浓度范围内，方法具有良好的精*制药股份有限公司文件编号：文件编号：题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案第第 11 页页 共共 12

26、页页密度、线性和准确度。范围至少在 0.05%质量指标的 140%范围内。6.7 耐用性耐用性a) 色谱条件的影响：在其他条件不变情况下，单独改变柱温、流速、色谱柱、缓冲液 pH 值、有机相比例、流动相比例等其中一个色谱条件，取分离度测试液分别进样，*产品与*杂质之间的分离度应不小于 2.0。改变项目柱温流速(ml/分钟)色谱柱缓冲液pH 值甲醇、乙腈比例A、B 相初始比例设定值20300.851.05另一支2.803.2055:4545:5580:2070:30b) 溶液稳定性：按本方法配制标准溶液、供试品溶液和分离度溶液，供试品溶液分别放置 0h，4h，8h，24h，48h，36h 后进样

27、测定，考察溶液的稳定性。要求标准品溶液的峰面积相对 0h 的增长率在5%范围内，供试品中各杂质的增长相对 0h 不超过20%，且无新的杂质产生，分离度溶液分离度不小于 2.0。则表明溶液在这段时间内稳定，否则说明溶液不稳定，需根据溶液稳定性结果考虑配制和进样时间。6.8 样品测定样品测定应用本方法，对 3 批样品进行测定，样品各杂质均应能够符合限度要求。7.偏差偏差验证过程中如果出现偏差应及时进行调查和上报，并且采取适当的措施进行处理，并及时记录。如经调查确定偏差的性质会对验证结果产生实质影响，应确定原因并采取必要措施后重新进行验证。8.风险的接收与评审风险的接收与评审经分析，对上一步判断的风

28、险采取的控制措施，若经检查确认符合要求，则其相应的风险可降至为可接受风险。否则，需采取进一步的措施降低风险。9.再验证再验证发生下列情形之一时，需进行再验证。（1）生产工艺发生改变。 （2）检验方法发生改变。10.确认结果评审和结论确认结果评审和结论验证小组负责收集各项验证、试验结果记录，根据验证、试验结果起草验证报告，*制药股份有限公司文件编号：文件编号：题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案第第 12 页页 共共 12 页页报验证委员会。验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，确认再验证周期。对验证结果的评审应包括：确认试验是否有遗漏？确认试验过程中对验证方案有无修改，修改原因、依据以及是否经过批准？确认记录是否完整？确认试验结果是否符合标准要求？偏差及对偏差说明是否合理？是否需要进一步补充试验？11.更改历史更改历史12. 附录附录附录 1 *原料有关物质分析方法guideline on the limits of genotoxic impurities版本号生效日期主要变更描述第 1 版本文档为新订*制药股份有限公司附录附录 1 *原料有关物质分析方法原料有关物质分析方法1 仪器：LC-2010AHT高效液相色谱仪（日本岛津公司） ，紫外检测器。2 标准品及试剂 *标准品 来源:U