实验核医学(第四章)

1、第四章 放射性核素标记化合物第一节 基本概念1.放射性浓度放射性浓度单位体积溶液中含有的放射性活单位体积溶液中含有的放射性活度，度，Bq/L、Bq/ml。2.放射化学纯度放射化学纯度放射性标记化合物的放射性活放射性标记化合物的放射性活度占该样品的总放射性活度的百分比。度占该样品的总放射性活度的百分比。3.放射性比活度放射性比活度单位质量放射性物质的放射性单位质量放射性物质的放射性比活度。重要参数，根据实验设计要求。比活度。重要参数，根据实验设计要求。4.同位素标记同位素标记各种化合物上的元素被该种元各种化合物上的元素被该种元素的放射性同位素所取代的标记。素的放射性同位素所取代的标记。5.非同位

2、素标记非同位素标记利用性质接近的放射性核素利用性质接近的放射性核素代替需标记化合物上的元素的标记。代替需标记化合物上的元素的标记。6.定位标记定位标记把放射性核素标记到化合物指定把放射性核素标记到化合物指定位置上的标记。位置上的标记。7.非定位标记非定位标记无法确定放射性核素标记到化无法确定放射性核素标记到化合合物上的某部位的标记。物上的某部位的标记。 全标记（一般标记）全标记（一般标记）标记化合物上原子被标记化合物上原子被取代的机会均等的标记。取代的机会均等的标记。 准定位标记准定位标记在定位标记时，由于中间过程，在定位标记时，由于中间过程，可能也标记在其它位置上的标记。可能也标记在其它位置

3、上的标记。第二节 标记化合物的制备一、放射性核素的选择一、放射性核素的选择1.基本不改变原有化合物的物理化学性质；基本不改变原有化合物的物理化学性质；2.标记核素与化合物的结合牢固、稳定性好；标记核素与化合物的结合牢固、稳定性好；3.合适的半衰期；合适的半衰期；4.射线容易测量；射线容易测量；5.其它，标记难易、价格、防护等。其它，标记难易、价格、防护等。二、考虑因素二、考虑因素1.原材料及其价格；原材料及其价格；2.标记物的稳定性；标记物的稳定性；3.微量操作技术；微量操作技术；4.冷试验；冷试验；5.防护措施及防污染、废物处理方案。防护措施及防污染、废物处理方案。三、基本方法三、基本方法1

4、.同位素交换法：某一放射性核素或其化合物与待标同位素交换法：某一放射性核素或其化合物与待标记化合物中相同元素的非放射性核素进行交换反应。记化合物中相同元素的非放射性核素进行交换反应。2.化学合成法：应用放射性核素的原原料，通过各种化学合成法：应用放射性核素的原原料，通过各种化学反应，将放射性核素合成到待标记化合物的特定化学反应，将放射性核素合成到待标记化合物的特定位置上。位置上。3.生物合成法：全生物合成生物合成法：全生物合成利用生物的生理代谢利用生物的生理代谢作用，将简单的放射性原料转化成所需的标记物；作用，将简单的放射性原料转化成所需的标记物； 酶促合成酶促合成利用酶的生物活性，将利用酶的

5、生物活性，将放射性前体转变为所需的标记物。放射性前体转变为所需的标记物。4.4.络合物络合物/ /鳌合物生成法：将放射性金属离子和具有鳌合物生成法：将放射性金属离子和具有特定功能的化合物进行络合或鳌合反应。利用了金属特定功能的化合物进行络合或鳌合反应。利用了金属离子易生成络合物或鳌合物的原理。离子易生成络合物或鳌合物的原理。第三节 常用标记化合物的制备C、H生命物质的主要组分，生命科学生命物质的主要组分，生命科学中常用中常用14C、3H来标记所需化合物。来标记所需化合物。125I 性质活泼，易与蛋白质和多肽发生性质活泼，易与蛋白质和多肽发生取代反应，且发射的取代反应，且发射的射线易测量。射线易

6、测量。P、S核酸、蛋白质的组成元素，核酸、蛋白质的组成元素， 32P、33P、35S在在DNA测序等测序等分子生物学中广泛应用。分子生物学中广泛应用。一、一、14C标记化合物的制备标记化合物的制备C的主要同位素的主要同位素14C的特点：的特点：1.半衰期长；半衰期长；2.发射的发射的-射线能量低，可用液闪测量，易防护；射线能量低，可用液闪测量，易防护；3.用于自显影，影像清晰；用于自显影，影像清晰；4.14C的化合物较稳定，辐射自分解速度慢。的化合物较稳定，辐射自分解速度慢。核素半衰期衰变方式 射线能量(MeV) 天然丰度生产核反应11C20.38分+0.960811B(p,n)12C稳定98

7、.89213C稳定1.10814C5730年-0.15514N(n,p)（一）（一）14C标记化合物的化学合成标记化合物的化学合成起始原料：起始原料：Ba14CO3或或14CO2中间体：由原料经一步或两步反应制得简单中间体：由原料经一步或两步反应制得简单14C标记物标记物Ba14C214CO2K14CN14CH14CHR14CO O HH14CO O HBa14CO2例1：制备14C标记的维生素K2ICHOHCHCO314HI314ROH,LiAlH2144Li14CH314CH3I0CrO2OO14CH3例2：1-14C-乙酸的制备方法1：方法2：COOHCHCNCHCNNaCOBaOHSO

8、CHNaN143143)(1431424233 COOHCHCOOMgICHMgICHICHOHCHOHCOMgHI1431433332214 核素标记的位置一般根据实验目的而选择。核素标记的位置一般根据实验目的而选择。例例3：例例4：-14C-丝氨酸丝氨酸 14C-甲酸甲酸 甘氨酸甘氨酸COOHCHCNCHICHOHKCN3143143142 COOHNHCHCOOHHCOOHNHCHOHCHO)()()(2214)(2142化学合成法的优点：化学合成法的优点： 能定位标记；能定位标记； 纯化较容易；纯化较容易； 放射性比活度高。放射性比活度高。缺点：缺点： 需特定的原料或中间体；需特定的原

9、料或中间体； 需特殊的微量操作和射线防护技术；需特殊的微量操作和射线防护技术； 合成步骤较多，对复杂化合物的标记有困难。合成步骤较多，对复杂化合物的标记有困难。（二）（二）14C标记化合物的生物合成标记化合物的生物合成1.全生物合成全生物合成 采用一些低等生物，如细菌、绿藻、酵母等，利采用一些低等生物，如细菌、绿藻、酵母等，利用它们的代谢活泼，繁殖迅速，可把简单的放射性原用它们的代谢活泼，繁殖迅速，可把简单的放射性原料（如料（如14CO2）掺入到细胞内，再进一步处理得到所）掺入到细胞内，再进一步处理得到所需标记物。需标记物。核苷酸核酸酶解CC1414氨基酸蛋白质水解CC1414葡萄糖和甘露糖多

10、糖水解CC1414水解小球藻C14特点：特点：方法简单；方法简单；可制得结构复杂化合物；可制得结构复杂化合物；保留化合物天然生物活性和天然构型。保留化合物天然生物活性和天然构型。缺点：缺点：无法控制定位；无法控制定位；分离纯化较难；分离纯化较难；标记率较低标记率较低。2.酶促合成酶促合成 利用特定的酶，通过一步或几步反应，将标记前利用特定的酶，通过一步或几步反应，将标记前身物转化为所需的标记产物。身物转化为所需的标记产物。2-14C-胸腺嘧啶胸腺嘧啶 尿嘧啶核苷尿嘧啶核苷 2-14C-胸腺嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷 尿嘧啶尿嘧啶特点：特点：定位标记，可得生物活性、光学构型的标记物定位标记，可得生物活

11、性、光学构型的标记物缺点：缺点：需有相应的前体和合适的酶需有相应的前体和合适的酶NONC14OCH3+NONOdR脱氧 核糖转移 酶NC14NOCH3OdR+NOON二、氚标记化合物的制备二、氚标记化合物的制备氢的同位素氢的同位素优点：优点： 1.来源丰富，测量简便；来源丰富，测量简便； 2.能量弱，射程短，无需特别防护；能量弱，射程短，无需特别防护； 3.可获高分辨率自显影效果，可观察亚细胞形态；可获高分辨率自显影效果，可观察亚细胞形态； 4.制备较简单，可获高比活度产物，灵敏度高；制备较简单，可获高比活度产物，灵敏度高； 5.半衰期长，易运输、贮存、安排实验。半衰期长，易运输、贮存、安排实

12、验。核素半衰期射线及能量(keV)天然丰度生产核反应1H(H)氕稳定99.98522H(D)氘稳定0.01483H(T)氚12.33年-，18.614N(n,p)缺点缺点： 1.3H在分子中易丢失；在分子中易丢失； 2.高比活度产物易发生辐射自分解；高比活度产物易发生辐射自分解； 3.标记物与非标记物质量相差大，标记位置可能标记物与非标记物质量相差大，标记位置可能会影响反应速率。会影响反应速率。 同位素效应：因同位素的原子质量不同而引起反同位素效应：因同位素的原子质量不同而引起反应速率改变的现象。应速率改变的现象。 标记位置远离反应部位，可减少同位素效应。标记位置远离反应部位，可减少同位素效应

13、。常用标记方法：常用标记方法： 同位素交换法同位素交换法 化学合成法化学合成法 生物合成法生物合成法（一）同位素交换法一）同位素交换法 RH+T2RT+HT 操作简单，但氚常标在不稳定位置，难于定位，操作简单，但氚常标在不稳定位置，难于定位，产品比活度低，较难纯化。产品比活度低，较难纯化。1.氚气曝射交换法：氚气曝射交换法： 将待标记物均匀途布在反应容器中，减压真空，将待标记物均匀途布在反应容器中，减压真空，通入纯氚气，密闭反应数日数周，回收氚气，纯化通入纯氚气，密闭反应数日数周，回收氚气，纯化标记物。一般适用于结构复杂化合物（中药有效成分）标记物。一般适用于结构复杂化合物（中药有效成分）的标

14、记。的标记。 提高比活度，缩短反应时间：提高比活度，缩短反应时间：活化氚气，将氚分子解离为氚原子或氚离子；活化氚气，将氚分子解离为氚原子或氚离子；尽可能分散待标记样品，扩大反应接触面；尽可能分散待标记样品，扩大反应接触面；加入催化剂，如钯黑或铂黑。加入催化剂，如钯黑或铂黑。缺点：缺点：不定位；不定位； 氚的利用率低；氚的利用率低； 易导致待标记物化学键断裂；易导致待标记物化学键断裂； 分离纯化较难。分离纯化较难。2.2.溶液中的催化交换法溶液中的催化交换法（1）均相催化交换法均相催化交换法氚化溶液：氚水、氚化溶液：氚水、3 3H-H-醋酸醋酸催化剂：多为酸性试剂催化剂：多为酸性试剂乙酸、三氯乙

15、酸、硫酸、乙酸、三氯乙酸、硫酸、磷酸、过氯酸、氯化铝等；磷酸、过氯酸、氯化铝等；一般需加热数小时数十小时。一般需加热数小时数十小时。所需标记物待标记物氚化溶液催化剂 （2）非均相催化交换法）非均相催化交换法快速、简便快速、简便氚化溶液中的非均相交换氚化溶液中的非均相交换 操作简便，反应时间短，杂质少，不饱和键一般操作简便，反应时间短，杂质少，不饱和键一般不发生加氚反应；但标记位置难以预定，不适用热不不发生加氚反应；但标记位置难以预定，不适用热不稳定化合物。稳定化合物。氚气在溶液中的非均相催化交换法氚气在溶液中的非均相催化交换法标记物反应产物氚化溶液待标记物一系列处理，催化剂，真空，溶解h241

16、标记物反应系统待标记物溶液催化剂一系列处理数小时，室温，真空，混合min20T2 可获得高纯度、高比活度标记物，适用于苄基化可获得高纯度、高比活度标记物，适用于苄基化合物、雌激素、嘌呤核苷、嘌呤核苷酸及糖的标记，合物、雌激素、嘌呤核苷、嘌呤核苷酸及糖的标记，不适用于不饱和键化合物、卤代化合物的标记，标记不适用于不饱和键化合物、卤代化合物的标记，标记位置不确定。位置不确定。（二）化学合成法（二）化学合成法 是目前制备高比活度的定位标记的最成熟、最重是目前制备高比活度的定位标记的最成熟、最重要的方法。要的方法。 合适的前体：烯烃、炔烃、有机卤化物、腈、羧合适的前体：烯烃、炔烃、有机卤化物、腈、羧基

17、化合物。基化合物。 还原剂：氚气，氚化金属（还原剂：氚气，氚化金属（NaBT4、LiBT4、KBT4、LiAlT4） 方法：催化加氚法、催化卤氚置换法、氚化金属方法：催化加氚法、催化卤氚置换法、氚化金属还原法。还原法。1.催化加氚法催化加氚法 适用于含不饱和键前体的标记，及嘌呤类核苷酸、适用于含不饱和键前体的标记，及嘌呤类核苷酸、核苷酸、激素等标记，对还原糖可定位标记在醛基上，核苷酸、激素等标记，对还原糖可定位标记在醛基上，对含苄基的化合物，可定位在亚甲基上。对含苄基的化合物，可定位在亚甲基上。2.催化卤素置换法催化卤素置换法 一般还在反应中加入有机胺类的添加剂，可中和一般还在反应中加入有机胺

18、类的添加剂，可中和反应产物卤化氢反应产物卤化氢（3HX），），利于反应进行。利于反应进行。 简便，可定位标记，产物比活度较高，但需合适简便，可定位标记，产物比活度较高，但需合适的卤化物前体。的卤化物前体。CHTRCTCHTRCTCHRCT，催化剂222HXHRHRX3323 催化剂注意事项：注意事项：催化剂的使用：铂、钯及其氧化物。钯更好。提高催化剂的使用：铂、钯及其氧化物。钯更好。提高催化效率，可加用活性炭、催化效率，可加用活性炭、BaSO4、CaCO3等载体，等载体，增加有效表面活性，增加有效表面活性，5、10 Pd/C。若氚水浓度高，辐射自分解重，需稀释；氚气无此若氚水浓度高，辐射自分解

19、重，需稀释；氚气无此问题，需专门真空系统中操作。问题，需专门真空系统中操作。一般会产生放射化学杂质，需纯化处理。一般会产生放射化学杂质，需纯化处理。3.氚化金属还原法氚化金属还原法 用氚化金属用氚化金属(NaB3H4、LiB3H4、KB3H4、LiAl3H4)选择性地将羧酸、酯、酮、醛、腈类化合物还原成选择性地将羧酸、酯、酮、醛、腈类化合物还原成相应的醇类、胺类。定位标记。把氚加成到不饱和相应的醇类、胺类。定位标记。把氚加成到不饱和键的碳原子上。键的碳原子上。（三）生物合成法（三）生物合成法 以氚的标记物为底物，利用专一性很强的酶为催以氚的标记物为底物，利用专一性很强的酶为催化剂，将该标记物转

20、化为另一所需的标记物。化剂，将该标记物转化为另一所需的标记物。 标记物一般可定位标记，且保留生物活性。标记物一般可定位标记，且保留生物活性。2RCHTNHNRCCTOHRRCORRRCHTOHRCHORCOORRCOOH氚化金属氚化金属氚化金属如3H-TdR的制备：甲基甲基-3H胸腺嘧啶胸腺嘧啶 尿嘧啶核苷尿嘧啶核苷 甲基甲基-3H胸腺嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷 尿嘧尿嘧啶啶NONOCT3+NONOdR脱氧 核糖转移 酶NNOCT3OdR+NOON37，1h三、放射性碘标记物的制备常用的放射性碘同位素核素半衰期射线及能量(MeV)(%)主要生产方式123I13.06hEC：E0.159，85121S

21、b(，2n) E0.564，18 125I60dEC：E0.0335，6.7124Xe(n,) 125Xe(EC) E0.027，119 E0.031，26127I稳定无辐射天然丰度100131I8.04d-：E 0.336，13130Te(n,) 131Te(-) E 0.607，86EC：E0.364，81 E0.637，7.2特点：特点：化学性质活泼，标记技术易掌握；化学性质活泼，标记技术易掌握；所需设备简单所需设备简单特别适用于蛋白质、多肽的碘标记；特别适用于蛋白质、多肽的碘标记；半衰期适中，易于商品化、贮存、废物处理；半衰期适中，易于商品化、贮存、废物处理；发射低能发射低能射线，易测

22、量；射线，易测量；辐射自分解较小，标记物较稳定；辐射自分解较小，标记物较稳定；比活度较高，灵敏度高。比活度较高，灵敏度高。（一）同位素交换法（一）同位素交换法 RI+Na*IR*I+NaI 方法简单，产物易纯化，可得较高比活度的标记方法简单，产物易纯化，可得较高比活度的标记物，但须合适的前体，及特定的条件（温度、压力、物，但须合适的前体，及特定的条件（温度、压力、酸碱度）。酸碱度）。 碘碘-溴交换法，可得高比活度、高纯度产物。溴交换法，可得高比活度、高纯度产物。CH2NHCNH2INH+Na131I(NH4)2SO4140 ,30minI131CH2NHCNHNH+NaIH2SO412（二）蛋

23、白质、多肽的碘标记技术（二）蛋白质、多肽的碘标记技术前提：前提：1.待标记物要有易被碘原子结合或取代的基团（酪氨待标记物要有易被碘原子结合或取代的基团（酪氨酸、组氨酸、色氨酸）；酸、组氨酸、色氨酸）；2.必须先把必须先把125I-氧化成氧化成125I2。酪氨酸酪氨酸 组氨酸组氨酸 色氨酸色氨酸OHCH2CHCOOH*INCH2CHCOOH*INCH2CHCOOHNH2NH2NH2*I影响碘化反应因素影响碘化反应因素：1.可结合基团数量，及暴露程度；可结合基团数量，及暴露程度；2.氧化剂性质、反应条件氧化剂性质、反应条件(pH、浓度、温度、反应时间、浓度、温度、反应时间)。 一般来说，在保证一定

24、标记率得前提下，尽可能减一般来说，在保证一定标记率得前提下，尽可能减少氧化物得用量，以保证标记物得生物活性和免疫活性。少氧化物得用量，以保证标记物得生物活性和免疫活性。碘化反应种类碘化反应种类：1.氯胺氯胺-T法：法： 方法简便，标记率高，重复性好，试剂易得，是迄方法简便，标记率高，重复性好，试剂易得，是迄今最常用方法之一。今最常用方法之一。 Cl-T（N-氯代对甲苯磺酰胺钠盐）：性质温和，在氯代对甲苯磺酰胺钠盐）：性质温和，在水溶液中水解产生次氯酸，次氯酸氧化碘离子成碘分子。水溶液中水解产生次氯酸，次氯酸氧化碘离子成碘分子。注意事项：注意事项：氧化剂氧化剂Cl-TCl-T不稳定，临用时配置；

25、不稳定，临用时配置；用量适当；用量适当；反应完需用等量的还原剂偏重亚硫酸钠（反应完需用等量的还原剂偏重亚硫酸钠（NaNa2 2S S2 2O O5 5) )中和中和, ,临用时配置；临用时配置；pHpH在在7 78 8，常用，常用0.20.20.5M0.5M磷酸缓冲液；磷酸缓冲液；反应体积适当，反应体积适当，5050300300l；温度和时间，室温温度和时间，室温1 13min3min，若，若4 4，增加时间；，增加时间；不适用于生物活性不稳定物质，如一些补体、某些不适用于生物活性不稳定物质，如一些补体、某些激素、酶、受体等。激素、酶、受体等。2.乳过氧化物酶法（乳过氧化物酶法（LPO）：）：

26、 过氧化物酶作用于过氧化物酶作用于H2O2，放出新生态氧，氧化，放出新生态氧，氧化125I-为碘分子。常用乳过氧化物酶。为碘分子。常用乳过氧化物酶。注意事项：注意事项：用量少，为待标记蛋白的用量少，为待标记蛋白的1 1；pHpH范围较宽，范围较宽，4 48.58.5；H2O2用量少；用量少；反应时间反应时间303060min60min也能用于各种脂肪、细胞、细胞膜的标记；也能用于各种脂肪、细胞、细胞膜的标记；过氧化物酶来源困难，标记率低；过氧化物酶来源困难，标记率低；酶本身也可能被标记而产生杂质。酶本身也可能被标记而产生杂质。3.固相氧化法：固相氧化法： 将氧化物或过氧化物酶以固体的形式，或制

27、成固将氧化物或过氧化物酶以固体的形式，或制成固体颗粒，进行液体颗粒，进行液-固氧化反应。固氧化反应。 目前常用目前常用Iodogen法。法。 Iodogen：1,3,4,6-四氯四氯3,6-二苯二苯-甘脲，氧化剂，甘脲，氧化剂，与与Cl-T同属氯酰胺类。同属氯酰胺类。注意事项：注意事项：Iodogen不溶于水，可用二氯甲烷溶解；不溶于水，可用二氯甲烷溶解；制备制备Iodogen涂管（涂管（525 g/管），封口冷藏；管），封口冷藏；无需配置氧化剂、还原剂无需配置氧化剂、还原剂将反应液倒出或稀释，即终止反应；将反应液倒出或稀释，即终止反应；对标记物损伤程度小，标记率较高。对标记物损伤程度小，标记

28、率较高。4.联接标记法： 间接标记法。先将放射性碘标记到较活泼试剂上，间接标记法。先将放射性碘标记到较活泼试剂上，再联接到待标记化合物上。再联接到待标记化合物上。 常用常用Bolton-Hunter试剂，试剂，3-(对对-羟基苯羟基苯)丙酸丙酸-N-琥珀亚胺酯（琥珀亚胺酯（HPNS）。）。 步骤：步骤：125125I I标记标记HPNSHPNS；125125I-HPNSI-HPNS上的酰基与上的酰基与蛋白质或多肽上的游离氨基发生缩合反应。蛋白质或多肽上的游离氨基发生缩合反应。 可避免蛋白质与氧化剂直接接触，防止生物活性可避免蛋白质与氧化剂直接接触，防止生物活性损伤；对于在体内不稳定的酪氨酸残基

29、碘标记物，提损伤；对于在体内不稳定的酪氨酸残基碘标记物，提供一种选择。供一种选择。 较麻烦，引入一较大基团会影响示踪性质。较麻烦，引入一较大基团会影响示踪性质。四、四、32P、33P和和35S标记化合物的制备标记化合物的制备 32P：射线能量较强（：射线能量较强（1.7MeV），易检测，但辐射），易检测，但辐射危害大，半衰期短（危害大，半衰期短（14d），自显影条带有扩散，分），自显影条带有扩散，分辨率低；辨率低； 35S：能量较低（：能量较低（0.167MeV），半衰期较长），半衰期较长(87d)，自显影条带清晰，分辨率高，无需特殊防护，自显影自显影条带清晰，分辨率高，无需特殊防护，自显影前

30、需制成凝胶干胶板；前需制成凝胶干胶板； 33P：能量适中（：能量适中（0.25MeV），半衰期为），半衰期为25d，自显，自显影清晰度、分辨率适中，无需特殊防护。影清晰度、分辨率适中，无需特殊防护。 制备方法：化学合成、生物合成、酶促法、同位制备方法：化学合成、生物合成、酶促法、同位素交换法。现一般均有商品供应。素交换法。现一般均有商品供应。第四节 纯化与鉴定 放射性核素检测的灵敏性，应用时的微量，都必放射性核素检测的灵敏性，应用时的微量，都必需要求标记化合物的放射化学纯度达到一定的高度需要求标记化合物的放射化学纯度达到一定的高度（至少大于（至少大于95），这样才能达到实验目的，结果才），这样

31、才能达到实验目的，结果才可靠。可靠。 杂质来源：杂质来源：未标记上的游离放射性核素；未标记上的游离放射性核素；待标记物的不纯物被标记上放射性核素；待标记物的不纯物被标记上放射性核素；贮存时，由于标记物的不稳定，或发生辐射自分解，贮存时，由于标记物的不稳定，或发生辐射自分解，产品性质、结构发生变化。产品性质、结构发生变化。一、标记率的测定一、标记率的测定 常用纸层析、常用纸层析、TLC法测定分析。法测定分析。（一）原理：（一）原理： 样品中各组分性质不同，在固定相上的吸附能力样品中各组分性质不同，在固定相上的吸附能力和在流动相中的溶解度不同，随流动相的移动速度也和在流动相中的溶解度不同，随流动相

32、的移动速度也就不同。就不同。 一般随固定相的不同，而有不同的分离效果。一般随固定相的不同，而有不同的分离效果。投入的总放射性标记物的放射性标记率100(%)（二）基本操作（二）基本操作1.固定相的选择固定相的选择 根据实验要求或标记物的性质。根据实验要求或标记物的性质。2.展开剂的选择展开剂的选择 重要因素，直接影响分离效果。根据标记物的性重要因素，直接影响分离效果。根据标记物的性质差异，通过各种极性不同的溶液配伍组成展开剂，质差异，通过各种极性不同的溶液配伍组成展开剂，以有效分离。以有效分离。3.点样与展开点样与展开 样品、参考样，展开距离。样品、参考样，展开距离。（三）结果测量（三）结果测

33、量1.放射自显影放射自显影 一般不用。一般不用。2.分段测量分段测量 常用手段。常用手段。3.放射性扫描放射性扫描 快速、简便、直观，但要求一定的活度。快速、简便、直观，但要求一定的活度。（四）注意事项（四）注意事项1.分离条件要确保各组分有效分离。分离条件要确保各组分有效分离。2.高比活度样品需加适量载体，防止吸附。高比活度样品需加适量载体，防止吸附。3.放射性浓度低时，可重复点样。放射性浓度低时，可重复点样。二、分离纯化二、分离纯化 层析法层析法纸层析、薄板层析、柱层析纸层析、薄板层析、柱层析 透析法、电泳法透析法、电泳法 一般与标记率测定的分离方法一样，根据标记物一般与标记率测定的分离方法一样，根据标记物性质选择固定相、流动相。性质选择固定相、流动相。三、标记物的鉴定三、标记物的鉴定1.放射化学纯度鉴定放射化学纯度鉴定2.放射性浓度放射性浓度3.放射性比活度的测定放射性比活度的测定4.生物活性和免疫活性的测定生物活性和免疫活性的测定第五节 放射性标记化合物的辐射