多功能酶标仪SpectraMax i3的操作规程

1、多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作规程Standard Operation of SpectraMax i3部门Department签名/日期Signature/Date起草人：Prepared by樊小川， Xiaochuan FanQC审核人：Reviewed by黄思佳， Sijia HuangQC审核人：Reviewed by褚夫兰， Fulan ChuQA批准人：Approved by张伯彦， Boyan Zhang质量负责人颁发部门Issued by质量保证部-QA执行日期Effective Date替换文件Replaced ForVersion 00复审日期Revi

2、ew Date分发部门Distributed toQA，QC1 目的建立多功能酶标仪SpectraMax i3的标准操作程序，规范SpectraMax i3 多功能酶标仪检测时的操作。2 适用范围 本规程适用于所有对多功能酶标仪SpectraMax i3的操作3 术语或定义多功能酶标仪：指功能较强、精度较高的单体台式酶标仪，可检测吸光度（Abs)、荧光强度(FL)、时间分辨荧光（TRF)、化学发光（Lum)等。4 责任4.1 仪器负责人负责多功能酶标仪的日常及定期维护，出现故障时负责联系厂家维修，保证运行正常。4.2 实验操作人员需严格按照本规程执行，保证仪器正常使用，每次用完后填写仪器使用记

3、录，且使用后及时清理台面，保持仪器洁净。5 EHS要求N/A6 程序6.1 仪器安装仪器与电脑连接完毕并连接电源以后，按仪器背面的按钮可以直接启动仪器，经过几分钟后的仪器自检后就可以开始用于检测。在连有电源的情况下，保持24小时开机，不要罩防尘罩以保持透气，隔1-2月关机重启一次。6.2 SoftMax Pro软件操作基本步骤 6.2.1 打开软件点击“SoftMax Pro 6.3”图标，打开SoftMax Pro 软件，出现 "Plate Setup Helper"对话框。若无则点击图标。6.2.2 连接仪器点击 Choose a diffecient instrume

4、nt，打开Instrument Connection对话框， 在 “Availible Instruments”菜单中选择仪器连接线与电脑所接的串口号(COM)。选择所购买的酶标仪型号SpectraMax i3或添加模块卡盒型号。最后点击“OK”键连接。6.2.3 仪器检测参数设定点击图标后出现 “Settings”对话框，对话框最上方出现Read Mode（读板模式）和Read Type（读板类型）两个选项，读板模式有ABS(光吸收)、FL(荧光强度)、LUM(化学发光)和TRF(时间分辨荧光)，读板类型有终点检测（Endpoint）、动力学（Kinetic）、单孔扫描（Well Scan）

5、和光谱扫描（Spectrum）四种。使用者根据实验需要选择合适的读板模式和读板类型。对话框下方左侧列表有如下选项，从上往下依次用鼠标点中选项，并在右栏中选择对应的参数设定。1）Wavelengths（波长）可以选择检测几种波长，光吸收模式最多为6 种，其他模式均为4 种。a) 对于光吸收模式，可以在 Lm1 后面的框中填入检测所用波长。b) 对于荧光强度，时间分辨荧光和荧光偏振模式，可以在2个框中分别填入激发波长和发射波长。Cutoff 一般选为自动(Auto)。c) 对于化学发光模式，一般使用All。当同时检测不止一色化学发光的时候可填入相应的检测波长。2） Plate Type（板型）对于

6、不同实验可以选择6-384 孔板及其具体的板型。3） Read Area （读板区域）可用鼠标先选中起始孔按住不放，进行拖曳直到选中微孔板上所有需要检测的孔。4） PathCheck（光径校正）仅用于光吸收模式，即将微孔板检测得到的原始光吸收值通过参比校正到1cm 光径长度时的光吸收值。可选择“Water Constant”(以水做参比)和“Cuvette Refence”(在比色皿中加入相应溶液预读一次作为参比)。一般情况下可以不用校正。5） shake选中Before First Read 后可以选择读板之前震板，可选择0-999 秒。一般不选择。6） Speed Read可加速读数速度，

7、为准确所读数值，默认不加速，一般不选择。7） More SettingRead order 可按实验要求选择 按列（Column ）、排（Row ）或者孔（Well）扫描读数。全部设定完后按对话框右下角的“OK”确认，回到"Plate Setup Helper"对话框。6.2.4 检测样品分组设定按键后出现 Template Edite对话框，先用鼠标拖曳选中要进行编辑的孔，被选中的空会变黑，然后点击Groups 栏中的下拉菜单选择所要进行的分组。具体设定步骤如下：1) 设定本底参照(BLANK)进入上述界面后，点击Assignment Option栏中的下拉菜单选中“Pl

8、ate blank”，则其他的数据结果均显示为扣除本底平均值的结果。2) 设定标准样品(Standards) 当有一系列已知浓度梯度的样品做为标准样品时，点击Groups 栏中的“Standards”，再点击“assign”进行标记，继而点击“series”进行设定，新出现的对话框中“Start from”中“Top to Bottom”、“Bottom to Top”、“Left to Right”或“Right to Left”表示该组内样品排列次序，根据实验进行选择；右上方的“pattern of Replicates”会自动显示复孔数目；下方的“Starting value”表示起始样

9、品的浓度，可以在框内填入相应数值，“Step by”表示以什么方式设置浓度梯度，前面下拉框可以选择“+ 、-、*、/”，后面框内可以填入相应的值，比如起始浓度是2，增加2，则选择“+”，输入“2”。设定完毕，点对话框右下角“OK”确认。在上一界面中点右边的“Edit”，新对话框中“Sample Descriptor”下的“Column name”根据实验情况命名，默认是“Concentration”，“Units”后面可以填入适当的浓度单位，设置好后退出“Template Edite”。3）设定未知样品(Unknowns) 对未知样品进行分组设定时，进入“Template Edite”界面，选

10、中微孔，点击“Groups”栏“Unknowns”下的“Unknowns”，若未知样品已知浓度，选“Unk-dilution”，具体设定同标准样品。4) 有多个标准样品或样品时点Groups 栏中的“add”，可以添加新组，其它设置同上。 6.2.5 数据分析设定1) 在“standardCurve”进行数据分析设定，点击图标，进入Plot Edite-standardcurve进行图表设置，在该对话框中，“Grafe Title”中填入该图的名称，即以后在数据计算中要引用的名字。“Plot Name”中填入该条曲线的名称，“X-Axis”和“Y-Axis”可以通过下拉栏选择该曲线横坐标和纵坐

11、标所引用的数据，如选择“Concentration”和“MeanValue”。在“Plot Attributes”中可选择图中每个点的形状和颜色。一张图中可以有多条曲线，按“add”可在该图中增加曲线。2)“Curve Fit”右边的下拉菜单可选择曲线拟合的方式，如四参数方程“4-Parameter”，根据实验要求进行选择。6.2.6 设定温度仪器可以设定温度，可在室温以上加温。当开启温度控制后需使仪器的微孔板插槽置于关闭状态保持所设温度，如果处于打开状态，仪器会发出报警声，然后自动关闭微孔板插槽。6.2.7 参数设置保存实验检测参数都设定完毕后，所有检测条件的设定、样品类型的设定、实验结果、

12、数据分析结果等，可以另存为两种格式：1） *.sda 格式，即数据格式。该文档含有包括参数设定，实验数据，结果分析等所有实验内容。2） *.spr 格式，即模版格式。该文档含有参数设定，分析公式等实验设定内容，可以应用于多次重复实验而使用统一模版。为避免覆盖原有数据，每次使用需新建模板或专属检测模版读数，禁止使用已保存的原始检测数据作为模版。 6.2.8 运行程序1） 按 “open/close”可以控制仪器微孔板插槽的打开和关闭，微孔板插槽打开后，将酶标板水平放置到微孔板插槽，点“open/close” 关闭微孔板插槽。2） 点击开始读数。读数完毕后保存文件即可。软件安装后默认用户在做完实验

13、后自己保存数据。如果用户希望每次实验检测后自动保存可以在“Save Data After Read”前打勾。6.3 结果分析 在实验结束后，自动根据所设参数进行结果分析以及曲线拟合。在结果中包括了所读数值及曲线相关的数据，内容包括样品序号、样品数值（value）、SD （Standard Deviation）值和CV值（coefficient of variation），在曲线图下方，软件还会自动计算出曲线的各种参数如EC50值等。数据分析完后，建议将其属性更改为只读，以防止误删。6.4 其他分析SpectraMax i3还包括相关性分析等分析模块，可根据不同实验需要选用。6.5 仪器保养注意

14、1） 有良好的电源，保持 24 小时开机。2） 保持避光和干净的室内环境，维持一定的湿度(30%-80%)。3） 维持室内比较恒定的温度，以 20-22 度为最适宜。4） 适用 6-384 孔板。96 孔微孔板内每孔可检测100-300ul 溶液，最佳检测体积为200ul。 384孔微孔板内每孔可检测50-100ul 溶液，最佳检测体积为80ul。5） 检测后的微孔板不要长期置于仪器插槽中，检测完后就从仪器中取出，避免溶液蒸发腐蚀或损坏仪器内部光路系统。如果为有腐蚀性或挥发性溶液，请带盖检测。6） 对于可见光吸收检测，使用全透明微孔板；紫外光吸收检测，使用紫外可透全透明微孔板；荧光强度和荧光偏振，使用黑色不透明板，需要检测底读的用黑色底透微孔板；化学发光和时间分辨荧光，使用白色不透明微孔板。7 附件N/A8 参考或引用文件SoftMax® Pro Microplate Data Acquisition and Analy