磷酸川芎嗪微透析体内回收率的研究

1、磷酸川芎嗪微透析体内回收率的研究(1)                     作者：叶勇， 周莉玲， 晏亦林，黄秋洁【摘要】  目的测定磷酸川芎嗪微透析体内回收率并对其稳定性进行考察。方法采用反透析法测定回收率，考察流速、浓度对回收率的影响。结果反透析法测定的体内回收率与媒介中磷酸川芎嗪的浓度无关，稳定性良好。结论微透析取样技术可用于磷酸川芎嗪的药动学研究，体内研究的反透析法可作为微透析研究中磷

2、酸川芎嗪回收率的测定方法。 【关键词】  磷酸川芎嗪 微透析 体内回收率Abstract:ObjectiveTo determine the in vivo recovery of tetramethylpyrazine phosphate(TMPP) in microdialysis probes and to study its stabilityMethods The recovery of TMPP was detected by retrodialysis methodThe effect of flow rates and concentrations on recove

3、ry was studiedResultsTMPP recovery was independent of TMPP concentration in the external medium by using retrodialysis methodTMPP recovery had good stabilityConclusionMicrodialysis sampling can be used for the pharmacokinetic study of TMPP and retrodialysis method can be used for the determination o

4、f TMPP recovery in vivoKey words:Tetramethylpyrazine phosphate(TMPP)；  Microdialysis；  In vivo recovery    微透析(Microdialysis，MD)技术是以透析原理作为基础的在体取样技术，是在非平衡条件(即流出的透析液中待测化合物的浓度低于它在探针膜周围样品基质中浓度)下，灌注埋在组织中微透析探针，组织中待测化合物沿浓度梯度逆向扩散进入透析液，被连续不断地带出，从而达到从活体组织中取样的目的,它是一种动态连续的取样方法1。近年来，它在药代

5、动力学研究领域，尤其是在药物分布及代谢研究中有重要应用，发展速度极快。川芎嗪(Tetramethylpyrazine，TMP)是中药川芎中的主要活性生物碱，磷酸川芎嗪(Tetramethylpyrazinephosphate，TMPP)为其磷酸盐，临床上广泛用于缺血性脑血管病的治疗。作者拟采用微透析技术研究磷酸川芎嗪在体内的药动学行为，因此有必要测定TMPP体内回收率来评价其体内微透析采样的可行性，本试验采用微透析技术对磷酸川芎嗪在大鼠体内的回收率进行了相关研究，为进一步采用微透析技术探讨磷酸川芎嗪在体内的药动学行为提供实验依据。1  仪器与试药   

6、高效液相色谱仪:Dionex Summit P680 (DIONEX公司)，微透析设备(Sweden CMA公司)：微透析探针CMA/12 Microdialysis Probe:膜外径0.5 mm，活性透析膜长度4 mm，分子量截留值为20kD；CMA/20 Microdialysis Probe：膜直径0.5 mm,活性透析膜长度为10 mm,分子量截留值为20kD;灌注器推进泵(CMA 402 Syringe Pump),灌注器(CMA 1.0 ml Exmire Microsyringe，MS-GAN100)。磷酸川芎嗪对照品购于中国药品生物制品检定所(批号：100845-200501

7、)。SD大鼠（广州中医药大学实验动物中心，许可证号SCXK粤2006-003）。色谱甲醇(DIMA公司)，水为纯水，其他试剂为分析纯。2  方法2.1  色谱条件色谱柱为Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm,5 m);流动相为甲醇水（32,V/V）;流速为1.0 ml·min-1;检测波长：295 nm;柱温室温；进样量20 l。2.5  体内微透析试验    结果表明，随着流速的增加，TMPP体内回收率呈降低趋势，这为反透析法测定TMPP体内回收率提供了实验依据。本篇论文由网友投稿，

8、读书人只给大家提供一个交流平台，请大家参考，如有版权问题请联系我们尽快处理。4  讨论    微透析取样技术可以在许多活体组织及细胞外液中在体取样，在药物动力学及药效学研究中具有独特的优势。相对于其他生物取样技术，微透析技术具有以下几个方面的显著特点：时间分辨性，可连续跟踪体内多种化合物量随时间的变化；空间分辨性，取样无需匀浆过程，可真实代表取样位点目标化合物的浓度，同时在体内不同部位插入探针可研究目标化合物的体内分布;提供不含蛋白质等大分子物质的游离态小分子化合物，对药物研究具有重要意义；样品因不含蛋白质、酶等大分子物质，可不经预处理直接用于测定。此外

9、，应用MD技术研究药动学勿需采血即可从同一动物收集大量样本而不损失体液量，避免了传统研究方法中因采血后血容量减少所造成对药物分布及消除的影响，其时间分辨性可使药动学资料更准确1,2。    在微透析取样方法中，探针回收率是将微透析技术应用于药动学研究的一个关键问题，其大小受探针的性质(如有效膜的长度、膜孔大小等)、待测物的性质(脂溶性、蛋白结合率、分子大小等)、灌流液的组成(亲脂性、pH值等)、流速等诸多因素的影响3。探针回收率的测定主要有零净流量法、反向透析法、外推至零流速法等1，应用反向透析法校正微透析探针回收率的原理是探针的回收率和释放率相等，在两者相等的条

10、件下，用药物自身的释放率校正相对回收率可以减少实验误差，是一种准确的校正方法。但是探针对药物的相对回收率和释放率是否相等取决于药物本身的性质，并非所有药物都可以应用，作者所在课题组已经对TMPP的体外回收率进行了相关研究4，结果证明探针对TMPP的体外回收率和释放率相等，因此，体内试验测定的微透析探针对TMPP的释放率即为探针的体内回收率。    由于TMPP在体内的半衰期较短，在回收率满足要求的前提下、应尽可能的提高时间分辨性，故本研究在体内试验中最终选择2.5 l·min-1的流速，本文的研究结果为微透析技术用于TMPP的体内药动学研究提供了实验依据和方法支持。【参考文献】  1N. Plock,C. Kloft. Microdialysis theoretical background and recent implementation in applied life-sciencesJ.Eur. J. Pharm. Sci,2005,25:12Tsai THAssaying protein unbound dru