脑益康药物血清对D半乳糖致海马神经元凋亡的影响

1、脑益康药物血清对D半乳糖致海马神经元凋亡的影响         10-09-05 16:25:00     编辑：studa20                     作者：朱燕 周爱玲 胡亚娥 茅家慧 施海燕【摘要】  目的 观察脑益康对D半乳糖诱导海马神经元凋亡的

2、影响。方法 制备脑益康药物血清。应用D半乳糖诱导海马神经元损伤，测定细胞存活率及细胞超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活力和丙二醛（MDA）含量，检测海马神经元Bcl2 mRNA的表达。结果 脑益康药物血清可显著提高细胞存活率和SOD及GSHPx活力（均P0.01），降低MDA含量（P0.01），上调Bcl2 mRNA的表达（P0.05）。结论 脑益康可通过提高海马神经元的自由基清除能力，减轻脂质过氧化损伤，上调Bcl2 mRNA的表达来对D半乳糖损伤的海马神经元发挥保护作用，减少细胞凋亡。 【关键词】  脑益康；D半乳糖；海马神经元；Bcl2 &#

3、160;  【Abstract】  Objective  To observe the effect of Naoyikang serum on hippocampal neuron apoptosis induced by Dgalactose (Dgal). Methods  Naoyikang serum was prepared in rats administered with aqueous extract of Naoyikang (6.84 g·kg-1·d-1) . MTT assay was applied to

4、evaluate the viability of hippocampal neuron, biochemical method was used to assay SOD, GSHPx activity and MDA, RTPCR was used to determine the expression of Bcl2. Results  Dgal (100 mol/L) significantly decreased viability of hippocampus neurons 24 h after treatment. The percentage of cell dea

5、th and MDA were reduced and SOD and GSHPx activity and the expression of Bcl2 were increased by the treatment with Naoyikang serum. Conclusions  Naoyikang could prevent hippocampus neurons from Dgal induced cytotoxicity possibly by the mechanism of increasing SOD and GSHPx activity and Bcl2 exp

6、ression, while decreasing MDA content.    【Key words】  Naoyikang; Dgalactose; Hippocampus neuron; Bcl2阿尔茨海默病（AD）是老年人中最常见的神经系统退行性疾病，严重危害老年人的身心健康，并给其家庭和社会带来沉重负担。目前治疗AD的方法仅能缓解症状，不能改变疾病病程，尚无有效预防和治愈措施，因而研究开发有效的药物成为热点。近年来，氧化应激和氧自由基在AD发病中的作用已经被许多体外实验和临床研究所证实1。脑益康（naoyikang，NYK）是由制首乌、知母、

7、巴戟天等组成的中药复方，具有药物多靶位作用24。本实验运用血清药理学方法制备脑益康药物血清，采用D半乳糖（Dgalactose ，Dgal）建立AD细胞模型，观察脑益康药物血清对AD细胞模型的保护作用及其机制，为脑益康的临床应用提供理论依据。1  材料与方法1.1  材料雄性SD大鼠，体重（250±10）g；24 h内SD新生鼠；均由南通大学实验动物中心提供。合格证号：SYXK（苏）20020022。NYK由南通市中医院制剂室制成颗粒剂。Dgal（上海恒信化学试剂有限公司）；维生素E（VitE，南京白敬宇制药厂）；DMEM培养基（美国GIBCO公司）；胎牛血清（杭

8、州四季青生物制品公司）；四甲基偶氮唑盐（MTT，上海实生细胞生物技术有限公司）；考马斯亮蓝法测蛋白试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)试剂盒（南京建成生物医学工程研究所）。PCR引物由上海英骏生物技术服务有限公司合成。754型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；核酸蛋白定量监测仪（德国Biophotometer公司）；PTC1001.2  方法雄性SD大鼠15只，随机分为正常对照组、VitE处理组和NYK处理组，每组5只。所有动物自由饮水，适度光照。正常对照组：喂养基本饲料观察3 d后，用生理盐水10.0 ml/kg

9、灌胃。VitE处理组：将VitE溶于菜油中，配成0.125%的溶液，按10.0 ml/kg灌胃。NYK处理组：将中药颗粒加ddH2O，配成17.1%的水溶液，按10.0 ml/kg灌胃（相当于临床成人用量）。各组大鼠每天灌胃2次，连续3 d5，末次灌药后1 h颈总动脉取血，4过夜，待全血凝固后，2 500 r/min离心20 min，分离血清，经56，30 min灭活，0.22 m滤膜过滤除菌，-70保存备用。取新生24 h的SD大鼠，无菌条件下取脑，分离双侧海马，剔除血管，用冰浴DHanks液洗2次，剪碎，0.125%胰蛋白酶2 ml，37消化30 min，每5 min振荡1次。用等体积含1

10、0%胎牛血清的DMEM终止消化，吹打成细胞悬液，1 000 r/min离心10 min，弃上清，吹打分散细胞，分别经60目和200目的筛网过滤。计数后将细胞悬液稀释至所需密度接种于用0.1 mg/ml多聚赖氨酸处理的培养板。48 h后加入终浓度为10 mol/L阿糖胞苷作用24 h更换新培养液，以后每2天半量换液，培养6 d的海马神经元用于实验。将细胞分为正常对照组、模型组、VitE处理组、NYK处理组。正常对照组：培养6 d的海马神经元，弃培养液，加入无血清DMEM和10%正常大鼠血清培养24 h。模型组：培养6 d的海马神经元，弃培养液，加入无血清DMEM、10%正常大鼠血清和Dgal（Dgal终浓度为100 mmol/L6）培养2