![脑缺血病人血小板肌球蛋白轻链激酶和Ca2+、Mg2+-ATP酶活性及其与Ca2+i关系的研究_第1页](http://file3.renrendoc.com/fileroot_temp3/2022-1/30/55b8bca0-a652-4399-9a96-5afcff52050a/55b8bca0-a652-4399-9a96-5afcff52050a1.gif)
![脑缺血病人血小板肌球蛋白轻链激酶和Ca2+、Mg2+-ATP酶活性及其与Ca2+i关系的研究_第2页](http://file3.renrendoc.com/fileroot_temp3/2022-1/30/55b8bca0-a652-4399-9a96-5afcff52050a/55b8bca0-a652-4399-9a96-5afcff52050a2.gif)
![脑缺血病人血小板肌球蛋白轻链激酶和Ca2+、Mg2+-ATP酶活性及其与Ca2+i关系的研究_第3页](http://file3.renrendoc.com/fileroot_temp3/2022-1/30/55b8bca0-a652-4399-9a96-5afcff52050a/55b8bca0-a652-4399-9a96-5afcff52050a3.gif)
![脑缺血病人血小板肌球蛋白轻链激酶和Ca2+、Mg2+-ATP酶活性及其与Ca2+i关系的研究_第4页](http://file3.renrendoc.com/fileroot_temp3/2022-1/30/55b8bca0-a652-4399-9a96-5afcff52050a/55b8bca0-a652-4399-9a96-5afcff52050a4.gif)
下载本文档
版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
1、 脑缺血病人血小板肌球蛋白轻链激酶和Ca2+、Mg2+-ATP酶活性及其与Ca2+i关系的研究 摘要目的探讨急性缺血性脑血管病血小板肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和Ca2+、Mg2+-ATP酶活性的变化及与血小板胞浆游离钙浓度Ca2+i的关系。方法用32P同位素掺入法和比色法分别测定58例脑缺血病人,及35名健康对照者血小板MLCK和Ca2+、Mg2+-ATP酶活性。用荧光钙指示剂Fura-2负载血小板扫描的方法,测定脑缺血病人血小板Ca2+i浓度。结果TI
2、A组和脑梗死组MLCK活性与对照组相比均有明显增加(P<0.01),而Ca2+、Mg2+-ATP酶活性均低于对照组(P<0.05,P<0.01)。TIA组和脑梗死组血小板静息Ca2+i;均高于对照组;血小板静息Ca2+i与血小板MLCK活性呈显著正相关(P<0.01),而与血小板Ca2+、Mg2+-ATP酶活性呈负相关(P<0.05)。结论血小板MLCK和Ca2+、Mg2+-ATP酶活性与急性缺血性脑血管病的发生有密切关系,MLCK活性的变化可能是脑缺血病人血小板活化的分子基础。关键词血小板钙离子Ca2+、Mg2+-ATP酶肌球蛋白轻链激酶脑缺血 在急性缺血性脑血
3、管病的发病过程中,血小板功能亢进是一极其重要的因素1。血小板细胞内Ca2+i的变化,在介导血小板对各种外部刺激的反应过程中起着重要作用,而血小板膜上的钙泵,即Ca2+、Mg2+-ATP酶是调节胞内Ca2+i的关键因素。血小板活化的分子基础是胞内骨架蛋白的变化,其中肌球蛋白轻链激酶(MLCK)磷酸化肌球蛋白轻链,促使肌球蛋白与肌动蛋白结合在血小板活化过程中起重要作用2。由于该酶活性不稳定,且测定需同位素,较为复杂,故至今尚未见有关血小板MLCK测定的国内文献报道。本研究通过测定急性缺血性脑血管病患者血小板静息态Ca2+i、MLCK和Ca2+、Mg2+-ATP酶活性,以探讨它们与脑缺血的关系以及C
4、a2+i与这两种酶活性的相关性。1资料与方法1.1急性缺血性脑血管病患者58例,诊断均符合全国脑血管病制定的诊断标准,并全部经头颅CT或MR证实。其中男性39例,女性19例。平均年龄57.8±10.3岁。58例中,有23例为短暂性脑缺血发作TIA患者,其余35例为脑梗死患者。正常对照组35例,为正常体检者及志愿献血者。其中男性22例,女性13例。平均年龄52.6±12.2岁。1.2方法病人入院后48h内,清晨空腹取静脉血810ml,缓慢注入含3.28%枸橼酸钠的塑料试管中,混匀抗凝,按常规方法,立即分离血小板。1.2.1血小板MLCK的制备按文献3的方法。1.2.2血小板M
5、LCK活性测定基本按Harada等4的方法,但略有改动。反应总体积为50l。含有0.2g/LLC20,50mg/LMLCK,50mmol/L ATP(300cpm/pmol ATP)等。1.2.3血小板膜Ca2+、Mg2+-ATP酶测定血小板膜制备按Dean5法但略有简化。Ca2+、Mg2+-ATP酶活性测定按改良Gulati6法进行。1.2.4血小板Ca2+i测定采用荧光指示剂Fura-2Am法7,用岛津荧光光度计测定血小板静息态Ca2+i,按如下公式计算:Ca2+i(nmol/L)=224×(F-Fmin)/(Fmax-F)蛋白质浓度的测定按Bradford法,以牛血清蛋白为标准
6、。统计学处理用成组设计的t检验和直线相关分析,数据以平均数加减标准差表示(±s)。2结果2.1对照组和脑缺血组血小板MLCK活性的比较TIA组和脑梗死组患者MLCK活性(90.36±28.60和102.25±27.62)与对照组(64.68±22.48)比较显著性升高(P<0.01),但TIA组和脑梗死组之间MLCK活性无明显差异(P>0.05)。2.2对照组和脑缺血组血小板Ca2+、Mg2+-ATP酶活性的比较TIA组和脑梗死组患者Ca2+、Mg2+-ATP酶活性(1.20±0.28和1.16±0.26)比对照组(1.3
7、8±0.33)降低(P<0.05,P<0.01),但TIA组和脑梗死组之间该酶活性无明显差异(P>0.05)。2.3对照组和脑缺血组血小板静息态Ca2+i的比较TIA组和脑梗死组患者血小板静息态Ca2+i(147.05±42.26和179.95±46.02)均比对照组(99.78±28.04)显著升高(P<0.01),脑梗死组Ca2+i比TIA组Ca2+i也升高(P<0.05)。2.4血小板静息态Ca2+i与MLCK和Ca2+、Mg2+-ATP酶活性的相关分析健康对照组血小板静息态Ca2+i与MLCK活性呈正相关(r=0.5
8、8,P<0.01),与Ca2+、Mg2+-ATP酶活性呈负相关(r=-0.38,P<0.05),TIA组和脑梗死组血小板静息态Ca2+i与MLCK活性均呈正相关(r分别为0.67和0.61, P<0.01),与Ca2+、Mg2+-ATP酶活性均呈负相关(r分别为-0.41和-0.58, P<0.05和0.01)。3讨论近年来研究认为,血小板与缺血性脑血管病有密切关系。在急性脑梗死病人,出现血小板粘附和聚集性增高,释放反应和代谢产物增多,更迭率增加等血小板功能亢进表现1。Harrison报道8使用抗血小板药物可明显减少脑缺血的发病率,降低缺血病人的死亡率。血小板的功能受多
9、种因素的影响,其中血小板胞浆内的钙离子,作为一种第二信使,在介导血小板对各种外部刺激的反应过程中起着极为重要的作用。为了维持血小板的正常功能,血小板内有一系列机制稳定细胞内Ca2+浓度,而存在于血小板内膜和浆膜上的Ca2+、Mg2+-ATPase在调节Ca2+平衡方面是非常重要的9。肌动蛋白和肌球蛋白是血小板胞浆中主要的收缩蛋白,在细胞活化过程中起重要作用。其中肌球蛋白头部分子量为2万的轻链(LC20)磷酸化是血小板活化的关键步骤。血小板胞浆中Ca2+浓度增高,与CaM结合成Ca2+-CaM复合物,激活肌球蛋白轻链,使LC20磷酸化,从而引起血小板的活化并产生收缩反应10。因此,在正常状态下,
10、Ca2+、Mg2+-ATP酶和MLCK等几种蛋白激酶协同作用,可调节血小板的变形和收缩能力,维持血小板正常的形态和功能。而在脑缺血时,血小板Ca2+持续升高,形态和功能都有变化,包括血小板粘附、聚集增加,释放反应增多,其原因很可能与Ca2+、Mg2+-ATP酶和MLCK活性异常有关。本实验结果表明,在急性缺血性脑血管病人的血小板,MLCK活性明显增加,并且其活性的增高与胞浆Ca2+i的增加呈正相关,其原因很可能是由于胞浆中Ca2+浓度增高,通过钙调素的调节作用,使MLCK异常活化,而胞浆中Ca2+浓度的增加与Ca2+泵的活性下降有直接的关系。本实验的结果亦证明了Ca2+、Mg2+-ATP酶活性
11、的降低。总之,本研究提示,急性缺血性脑血管病患者血小板Ca2+代谢异常可能是血小板活化的分子基础。由于Ca2+、Mg2+-ATP酶的活性降低,导致胞内Ca2+浓度的增加,从而使MLCK异常活化,引起血小板一系列形态和功能的变化,加重脑缺血的发生。由于MLCK活性在脑缺血时变化较为明显,且能直接反映血小板的功能状态,因此我们认为MLCK活性的测定对判断血小板的功能状态,指导临床诊断治疗缺血性脑血管病都具有重要的意义。基金项目:本文为江苏省卫生厅科研基金课题作者单位:唐放鸣王然张光毅221002徐州医学院生物化学和分子生物学研究中心;耿德勤附属医院神经内科参考文献1 Joseph R,Andrea
12、 GD,Oster SB,et al.Whole blood platelet function in acute ischemic stroke.Stroke,1989,20:38.2 Daniel JL,Molish IR,Rigmaiden M,et al.Evidence for a role of myosin phosphorylation in the initiation of the platelet shape change response.J Biol Chem,1984,259(15):9826.3 唐放呜,王然,耿德勤,等.人血小板肌球蛋白轻链激酶的研究.徐州医学院
13、学报,1995,15(4):364.4 Harada T,Seto M,Sasaki T,et al.The time course of myosin light-chain phosphorylation blood-induced vasospasm.Neurosurgery,1995,36(6):1178.5 Dean WL,Sullivan DM.Distribution of plasma membrane Ca2+-ATPase and inositol 1,4,5-trisphosphate receptor in human platelet membranes.Cell C
14、alcium,1995,17(10):65.6 Gulati S,Dons MG,Berger G,et al.Platelet calcium pump activity in essential hypertensive and their first-degree relatives.Mol Cell Biochem,1996,156(1):37.7 Grynkiewicz PM,Tsien RY.A new generation of calcium indicators with greatly improved fluorescence properties.J Biol Chem,1985,260:3440.8 Harrison MJ.Role platelet and antiplatelet agent in cerebrovascular disease.Circulation,1990,81(Suppl 1):110.9 Brass LF.Ca2+homeostasis in unstimulated pla
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 2024年九年级化学上册 2.1 空气教案(pdf)(新版)新人教版
- 3-3-4 盐类水解的应用1 教学设计 2023-2024学年高二上学期化学人教版(2019)选择性必修1
- 《水文水利数据采集监测预警一体设备》征求意见稿
- PDCA提高便秘患者肠镜检查肠道准备合格率
- 生态恢复治理工程施工方案
- 产科腹部四步触诊要点
- 2023年广西来宾职业教育中心学校招聘教师考试真题
- 2023年佛山市佛冈县龙山镇招聘考试真题
- 永康市芝英镇工作人员招聘笔试真题2023
- 2023年安康白河县纪委监委选调考试真题
- OVATION系统学习心得总结
- 2023年中国北方工业有限公司招聘笔试题库及答案解析
- MT/T 198-1996煤矿用液压凿岩机通用技术条件
- GB/T 12729.1-2008香辛料和调味品名称
- GB/T 11060.8-2012天然气含硫化合物的测定第8部分:用紫外荧光光度法测定总硫含量
- 二年级上册美术课件-3《装饰自己的名字 》 人教新课标 (共13张PPT)
- 标准物质期间核查记录表
- 新版北师大版数学六年级上册全册课件(新版)
- 眼科医疗质量控制指标(2020年版)
- 初中班会主题序列化建构的实践研究
- “双减”背景下家校协同育人机制的构建与探索
评论
0/150
提交评论