妊高征患者绒毛合体滋养细胞一氧化氮合酶含量及活性相关性的研究

1、    妊高征患者绒毛合体滋养细胞一氧化氮合酶 含量及活性相关性的研究        【摘要】目的探讨妊高征患者绒毛合体滋养细胞一氧化氮合酶含量与活性的相关性。方法采用免疫组织化学ABC法和酶组织化学法(四唑盐法)，检测32例妊高征患者(妊高征组)和32例正常足月妊娠妇女(正常组)绒毛合体滋养细胞一氧化氮合酶(NOS)含量及活性的改变。结果两组绒毛均存在eNOS、iNOS抗原及NOS活性的阳性表达，且部位相同。两组绒毛血管内皮细胞中eNOS、iNOS抗原及NOS活性

2、的表达强度基本一致；而合体滋养细胞中的表达，则妊高征组低于正常组。两组合体滋养细胞中，NOS活性表达强度的例数分布与eNOS含量表达强度的例数分布呈正相关，而与iNOS含量无相关性。中、重度妊高征患者合体滋养细胞中，NOS活性与eNOS含量间也呈正相关。结论绒毛合体滋养细胞eNOS含量及活性的改变，可能在妊高征的发病中起重要作用。【关键词】一氧化氮合酶妊娠心血管高血压免疫组化酶组化The relationship of expression and activity of nitric oxide synthase in placenta of pregnancy induced hypert

3、ensionZhou Rong，Cao Zeyi，Li Weimin（Second Affiliated Hospital,West China University of Medical Sciences,Chengdu 610041）【Abstract】ObjectiveTo determine the relationship between expression and activity of nitric oxide synthase(NOS)in placenta of pregnancy induced hypertension(PIH).Methods32 placentae

4、of normal pregnant women and 32 of PIH were studied.The expression and activity of NOS in placentae were measured by immunohistochemistry(ABC method)and enzymehistochemistry(Tetrazoleun method).ResultsThere showed eNOS antigen,iNOS antigen and NOS activity in placentae from PIH and normal pregnant w

5、omen.They were all localized in the same site and those in the vascular endothelial cells have the same expression.In the placentae from PIH and normal pregnant women,a positive correlation was seen between the expression of eNOS and the activity of NOS,but there was no correlation between the expre

6、ssion of iNOS and the activity of NOS.In addition,we found there was a positive correlation between the expression of eNOS and the activity of NOS from the moderate or severe PIH.ConclusionThe changes of the expression and the activity of eNOS may play an important role in the pathogenesis of PIH.【K

7、ey words】Nitric oxide synthasePregnancyCardiovascularHypertensionImmunohistochemistryEnzymehistochemistry研究表明，由血管内皮细胞产生的一氧化氮(NO)及催化NO生成的一氧化氮合酶(NOS)在妊高征的发病中起重要作用1。本研究通过探讨妊高征患者胎盘绒毛NOS含量与其活性间的相互关系，进一步阐明NO在妊高征发病中的作用。1材料与方法1.1观察对象收集我院自1996年9月至1998年2月经剖宫产术分娩的胎盘共64例。其中正常足月妊娠妇女胎盘32例(正常组)，孕龄(271.48±6.09

8、)天；妊高征患者胎盘32例(妊高征组)，孕龄(270.24±5.27)天。妊高征诊断以妇产科学第4版2为准。妊高征组中，轻、中及重度分别为6、14和12例。所有观察对象剖宫产时均未临产，系因臀位、骨盆因素或妊高征危及母儿安全而行手术者。待术中胎盘自娩后，立即取其母面正中组织约1cm×1cm×1cm，液氮中骤冷后，置入-70冰箱待用。取材时注意避开出血及钙化部位。1.2方法1.2.1免疫组织化学ABC法测定胎盘中eNOS、iNOS含量方法见文献3。1.2.2酶组织化学法(四唑盐法)测定胎盘中NOS活性方法见文献4。1.2.3结果判断内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及诱

9、导型一氧化氮合酶(iNOS)含量按免疫组化目测半定量法，根据着色深浅分为阴性(-)、弱阳性(+)、阳性(+)、强阳性(+)和极强阳性(+)。NOS活性按酶组化目测半定量法，其标准同上。1.3统计方法两组计数资料作等级相关分析。2结果2.1免疫组化和酶组化检测结果观察正常组和妊高征组胎盘的血管内皮细胞及绒毛合体滋养细胞胞浆内均有eNOS、iNOS抗原及NOS活性的阳性表达；且血管内皮细胞中上述三者的表达强度在两组胎盘基本一致，均为弱阳性；而绒毛合体滋养细胞中上述三者的表达强度在正常组均高于妊高征组。2.2胎盘绒毛合体滋养细胞eNOS、iNOS抗原含量与NOS活性的相关性(见表1)表1绒毛合体滋养

10、细胞eNOS、iNOS含量与NOS活性间的相关性(例)例数eNOS含量iNOS含量NOS活性+正常组320920311316238156妊高征组328175261610091373由表1可见，两组胎盘绒毛合体滋养细胞eNOS含量不同表达强度的例数分布与NOS活性不同表达强度的例数分布相似，经等级相关分析两者间分别呈正相关(r=0.3749，P<0.005；r=0.4580，P<0.005)；而两组绒毛NOS活性与iNOS含量间例数分布的等级相关分析未发现有相关性(r=0.2389，P>0.05；r=0.1811，P>0.05)。2.3不同程度妊高征患者绒毛合体滋养细胞e

11、NOS含量与NOS活性的相关性轻度妊高征患者绒毛合体滋养细胞eNOS含量不同表达强度的例数分布与NOS活性不同表达强度的例数分布间无相关性(P>0.05)，而中、重度患者eNOS含量与NOS活性呈正相关(分别为r=0.9867，P<0.001；r=0.9710，P<0.001)。 3讨论研究发现，妊高征患者存在血管内皮细胞的功能紊乱，表现为血管内皮舒张因子减少，收缩因子增多，致使血管处于收缩状态1。在血管舒张因子中NO的作用备受关注。由于在内源性NO的产生过程中，NOS是唯一的限速酶，因此，NOS含量及活性的改变，必然直接影响到NO的产生，从而影响血管的舒缩状态。3.1胎盘绒

12、毛合体滋养细胞中存在NOS抗原及活性的意义我们采用免疫组化ABC法和酶组化法研究发现，在正常妊娠妇女和妊高征患者胎盘的绒毛合体滋养细胞和血管内皮细胞的胞浆内，同时存在eNOS、iNOS抗原及NOS活性的阳性表达，且绒毛合体滋养细胞的表达强度均强于血管内皮细胞。说明胎盘中不仅存在NOS抗原，而且这些抗原具有生物活性。这有利于胎盘局部NO的产生，进而有利于胎盘血流的供应。与国外文献报道结果相似5，6。众所周知，正常妊娠妇女固定的绒毛滋养叶细胞于孕10周左右开始沿着螺旋小动脉逆行浸润，逐渐取代血管内皮，这种浸润至孕12周时，已达蜕膜段，孕820周达子宫肌层内1/3深度，而妊高征时滋养叶细胞浸润仅达蜕

13、膜段，少数血管可以不发生此种变化1；同时足月妊娠时滋养叶细胞主要为具有功能的合体滋养细胞，因此，我们推测足月妊娠时合体滋养细胞具有血管内皮细胞的功能，即可以产生NO并发挥生理功能。Eis等7的研究也发现，当用eNOS抗体对滋养叶细胞进行染色时，细胞滋养细胞为阴性，而合体滋养细胞为阳性，也证明合体滋养细胞具有产生NO的功能。Conrad等8认为，绒毛合体滋养细胞中NOS的存在，有利于防止胎盘绒毛间隙中血小板的凝聚及血栓的形成，从而保证了胎盘绒毛间隙中血流的通畅性。3.2绒毛合体滋养细胞NOS的改变与妊高征的关系为了进一步了解绒毛合体滋养细胞eNOS、iNOS含量和NOS活性间的相互关系，我们还观

14、察了各组胎盘绒毛合体滋养细胞eNOS、iNOS含量与NOS活性间的相关性。结果发现，在两组胎盘中，绒毛合体滋养细胞NOS活性表达强度的例数分布与eNOS含量表达强度的例数分布均呈正相关，而与iNOS含量无相关性；同时还发现，中、重度妊高征患者绒毛合体滋养细胞NOS活性与eNOS含量间也呈正相关。上述结果说明，绒毛合体滋养细胞NOS活性的改变，主要反映了eNOS活性的改变，而与iNOS的关系不明显。提示在妊高征(尤其中、重度)的发病中，绒毛合体滋养细胞eNOS含量及活性的改变起了重要作用。作者单位：周容（华西医科大学附属第二医院妇产科 成都，610041）曹泽毅（华西医科大学附属第二医院妇产科

15、成都，610041）李维敏（华西医科大学附属第二医院妇产科 成都，610041）刘淑芸（华西医科大学附属第二医院妇产科 成都，610041）熊庆（华西医科大学附属第二医院妇产科 成都，610041）肖邦良（华西医科大学公共卫生学院）程薇波（华西医科大学公共卫生学院）参考文献1，林其德.妊高征病因学研究进展.中华妇产科杂志，1997；32(1)：32，乐杰主编.妇产科学.第4版.北京：人民卫生出版社，1996：1133，周容，李维敏，曹泽毅，等.妊高征患者胎盘中一氧化氮合酶含量的变化及意义.华西医科大学学报，1999；30(3)：3124，周容，李维敏，曹泽毅，等.妊高征患者胎盘中一氧化氮合酶活

16、性的变化及意义.中华围产医学杂志，1999；2(2)：795，Garvey EP,Tuttle JV,Covington K,et al.Purification and characterization of the constitutive nitric oxide synthase from human placenta.Arch Biochem Biophy,1994;311(2):2356，Boccardo P,Soregaroli M,Aiello S,et al.Systemic and fetal-maternal nitric oxide synthesis in normal pregnancy and preclampsia.Br J Obstet Gynecol,1996;103(9):8797，Eis ALW,Brockman DE,Pollock JS,et al.Immunohistochemical localization of endothelial nitric oxide synthase in human villous and extravillous trophoblast pop