抗坏血酸对细菌脂多糖引起发育毒性保护作用

1、抗坏血酸对细菌脂多糖引起发育毒性保护作用         07-08-10 11:37:00     作者：陈远华，徐德祥，赵磊    编辑：studa20【摘要】  目的 研究抗坏血酸(AA)对细菌脂多糖(LPS)引起宫内胎儿死亡(IUFD)、生长发育迟缓(IUGR)和骨骼发育迟缓的保护作用。方法 实验1：LPS组小鼠于妊娠第1517d经腹腔注射LPS,LPS+AA组在LPS处理前和/或处理后经腹腔注射给予AA，对照组给予等

2、容量的生理盐水或AA。所有孕鼠于妊娠第18d处死。实验2：LPS组小鼠于妊娠第16d注射LPS，LPS+AA组在LPS处理前和/或处理后经腹腔注射给予AA，对照组给予等容量的生理盐水或AA。LPS处理后6h处死孕鼠。结果 LPS+AA预处理组平均每窝死胎数明显低于单纯LPS处理组，LPS+AA后和预+后处理组平均每窝死胎数与单纯LPS组比较差异无统计学意义；AA预、后和预+后处理均显著抑制LPS引起IUGR和枕骨骨化不全。AA预和后处理均显著抑制LPS引起母肝、胎肝和胎盘组织脂质过氧化，但AA预处理的作用强于后处理。结论 AA预处理通过抑制LPS引起的氧化应激，预防LPS引起IUFD、IUGR

3、和骨骼发育迟缓；AA后处理和预+后处理对抗LPS引起IUGR和骨骼发育迟缓，但对LPS引起的IUFD无明显保护作用。 【关键词】  细菌脂多糖      细菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是革兰阴性细菌细胞壁结构中的类脂多糖，广泛存在于人和动物的消化道内1。LPS引起的胚胎吸收、宫内胎儿死亡(intrauterine fetal death,IUFD)和早产已经得到证实2。本课题组前期研究发现，母鼠妊娠晚期接触LPS引起胎儿宫内生长发育迟缓(intrauterine growth retardation，IUG

4、R)和骨骼发育迟缓，活性氧(ROS)可能参与了LPS引起的胚胎发育毒性3,4。抗坏血酸(AA)是重要的水溶性抗氧化剂，本文重点探讨AA对LPS引起小鼠IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓的保护作用。1   材料与方法11   试剂   细菌脂多糖(EschericlSia coli LPS,serotyoe 0127：B8)和抗坏血酸(ascorbic acid，AA)(美国Sigma公司)。12   动物及实验方法   清洁级ICR小鼠(78周，雄性3032g，雌性2628g)(北京维通利华实验动

5、物公司)。实验前适应性喂养1周(自由饮食，昼夜均衡，温度2025，湿度(50±5)%。交配时，按24(雄雌)于21：00合笼，次日7：00检查雌鼠阴栓，查到阴栓者定为妊娠第0d。分2个实验。实验1：孕鼠随机分为单纯LPS处理组，LPS+AA预、后和预+后处理组及对照组，所有孕鼠均于妊娠第1517d给药。单纯LPS处理组仅注射LPS(75g/kg，ip)；LPS+AA预处理组孕鼠注射LPS前05h给予AA(500mg/kg，ip)；LPS+AA后处理组孕鼠注射LPS后3h给予AA(500mg/kg,ip)；LPS+AA预+后处理组孕鼠注射LPS前05h和后3h各给予500mg/kg的A

6、A；对照组给予等容量生理盐水或AA。所有孕鼠于妊娠第18d处死，记录活胎、死胎、吸收胎数和流产数，秤量活胎体重，测量身长和尾长，并评价活胎鼠骨骼发育情况。实验2：分组同实验1，每组11只，所有孕鼠均于妊娠第16d给药。单纯LPS组仅注射LPS(75g/kg，ip)；LPS+AA预处理组孕鼠注射LPS前05h给予AA(500mg/kg，ip)；LPS+AA后处理组孕鼠注射LPS后3h给予AA(500mg/kg，ip)；LPS+AA预+后处理组孕鼠注射LPS前05h和后3h各给予500mg/kg的AA；对照组给予等容量生理盐水或AA。LPS处理后6h处死孕鼠，取母肝、胎肝和胎盘，检测丙二醛(MDA

7、)和谷胱甘肽(GSH)水平。13   氧化应激水平测定   用Griffith法5测定组织GSH含量。通过测定脂质过氧化的羰基产物MDA含量反映组织的氧化应激水平，MDA含量测定采用硫代巴比妥酸反应底物(TBARS)比色法8。蛋白含量用Lowry法7测定。14   统计分析   采用SPSS 120统计软件进行方差分析和两样本t检验。2   结果21   AA对LPS引起IUFD的影响   单纯LPS处理组平均每窝死胎数显著高于对照组(01±11

8、)与(82±20)，P<001，LPS+AA预处理组平均每窝死胎数显著低于单纯LPS处理组(31±45)与(82±20)，P<001。LPS+AA后处理组(54±63)和预+后处理组(62±52)平均每窝死胎数与单纯LPS处理组(82±20)比较差异无统计学意义(P>005)。22   AA对LPS引起骨骼发育迟缓的影响(表1)   母鼠妊娠晚期给予LPS引起胎鼠枕骨、胸骨、尾椎骨、前指骨和后掌(趾)骨骨化不全；AA预处理、后处理和预+后处理均显著抑制LPS引起枕骨、后掌(趾)

9、骨骨化不全。23   AA对LPS引起IUGR的影响(表2)   母鼠妊娠晚期给予LPS显著降低活胎体重、身长和尾长，AA预处理、后处理和预+后处理均显著抑制LPS引起IUGR。表1   AA对LPS引起骨骼发育迟缓的影响（略）注：e枕骨评分：1=正常，4=上枕骨未见骨化点；与对照组比较，a P<005，b P<001；与LPS组比较，c P<005，d P<001表2   LPS和AA对宫内胎儿生长发育迟缓的影响（略）注：与对照组比较，b P<001；与LPS组比较，d P<00124   AA对LPS引起组织MDA水平升高的作用(表3)   母鼠妊娠晚期给予单剂量LPS，母肝、胎肝和胎盘组织MDA水平显著升高(P<001)。LPS+AA预处理组母肝、胎肝和胎盘组织MDA水平显著低于单纯L