孕妇血清中胆固醇硫酸的变化及生理意义

1、孕妇血清中胆固醇硫酸的变化及生理意义【摘要】目的测定妊娠妇女血清及胎盘绒毛中胆固醇硫酸(cholesterol sulfate,CS)含量的变化，分析CS对凝血酶活性的影响，探讨CS在妊娠过程中的生理意义。方法利用薄层层析法(thin layer chromatography,TLC)，测定30例妊娠妇女血清及21例胎盘绒毛组织中CS的含量，同时在体外测定CS对凝血酶活性的抑制作用。结果妊娠妇女血清中CS含量从妊娠早期开始出现上升趋势，且随孕周增加而升高，与孕周呈正相关关系(r=0.69，P0.01)。CS含量在妊娠晚期达到最高值，为非妊娠妇女血清中浓度的2.1倍(P0.01)。胎盘绒毛中CS

2、含量也呈相同变化趋势。CS具有抑制凝血酶活性作用。结论胎盘绒毛中CS脱落至血中可能是妊娠妇女血中CS增高的原因之一，妊娠妇女血中CS增加对调解妊娠血液凝固状态具有生理意义。【关键词】胆固醇硫酸妊娠胎盘绒毛薄层层析法凝血酶胆固醇硫酸(CS)存在于多种组织及体液中，如皮肤、毛发、子宫内膜、血液等，其生理作用被认为与受精、缩短血液凝固时间、调解蛋白激酶C活性等有关。本实验首次分析妊娠妇女血清及胎盘绒毛组织中CS含量的变化，以探讨CS在妊娠中的生理作用。1资料与方法1.1研究对象随机选择在我院正常妊娠者30例为研究组，其中妊娠早期(12周)、妊娠中期(1328周)、妊娠晚期(3642周)各10例，均无

3、妊娠合并症，无口服避孕药史及烟酒史。平均年龄(30.22.5)岁，平均产次(1.160.27)次。另选条件相似未孕健康妇女10例作为对照组。1.2方法1.2.1血清及胎盘绒毛中CS测定(1)标本采集两组病例于晨起空腹，自肘正中静脉采血5ml，立即分离血清，于-80保存，集中待检。妊娠早期及中期胎盘绒毛组织来自人工流产及中期引产患者；妊娠晚期胎盘绒毛组织来自正常分娩及剖宫产产妇。妊娠中期及晚期胎盘绒毛取自胎盘中央处。胎盘绒毛组织取材后，用PBS洗净，冷冻干燥，称重，-80保存，集中待检。(2)提取血清及胎盘绒毛中的酸性脂质利用改良的岩森正男方法1提取血清中酸性脂质。首先利用不同体积比例的氯仿和甲

4、醇(41、11和11，V/V)，连续在40下提取血清中总脂质，然后利用柱状层析法(DEAE-Sephadex A-25,Pharmacia公司)将其分离成中性和酸性两部分。再将酸性部分通过碱性处理、透析、蒸馏等方法处理后，将其溶于氯仿及甲醇混合液中(11，V/V)，于4保存，集中检测。胎盘绒毛组织酸性脂质部分利用岩森正男方法抽出1。(3)利用TLC法测定血清及胎盘绒毛中CS将一定量(0.3ml血清或0.5mg冻干胎盘绒毛组织相当量)上述酸性脂质层析于HP TLC板(Merck公司)。展开溶剂为氯仿、甲醇、丙酮、酢酸及水(82421，V/V)的混合液。利用酢酸酮法进行发色。发色后HPTLC板利用

5、TLC密度测定仪(CS-9000，Shimadzn公司)进行定量测定。标准品CS利用化学方法合成2。1.2.2分析酸性脂质对凝血酶活性的影响在37将凝血酶分别与各种酸性糖脂质包括CS、胆固醇、脑硫脂(sulfatide)、半乳糖苷神经酰胺(galactosyl ceramide,GalCer)、神经节苷脂(GM3 ganglioside)予先反应10分钟，然后再使其与凝血酶的底物反应3。1.2.3统计学处理采用t检验、直线相关分析法。2结果2.1各组血清中CS含量比较各组血清中CS含量测定结果见表1。表1各组血清CS含量比较(s)组别例数CS(mol/L)非孕组10早期妊娠10中期妊娠101)

6、晚期妊娠102)注：1)与非妊娠比较P0.05；2)与早期妊娠比较P0.01 由表1可见，CS随孕周增加而升高，妊娠晚期增加最为明显，达到非妊娠血清中CS浓度的2.1倍(P0.01)。血清中CS含量和孕周间呈正相关关系(r=0.69，P0.01)。2.2各组胎盘绒毛组织中CS含量比较结果见表2。表2各组胎盘绒毛CS含量测定值(s)组别例数每毫克干燥质量含CS的pmol数早期妊娠7中期妊娠71)晚期妊娠72)注：1)与早期妊娠比较P0.01；2)与早期妊娠比较P0.001由表2可见，胎盘绒毛组织中CS含量随孕周增加而增高，妊娠中期较妊娠早期高4.7倍(P0.01)，而妊娠晚期胎盘绒毛组织中CS含

7、量更高，是妊娠早期的6.2倍，差异非常显著(P0.001)。胎盘绒毛中CS含量与孕周呈正相关关系(r=7.9，P0.01)。2.3酸性脂质对凝血酶活性的影响为探讨妊娠妇女血清及胎盘绒毛中CS增高生理机制，本研究测定了各种酸性脂质在体外对凝血酶活性的抑制作用。结果见表3。 表3酸性脂质对凝血酶的抑制作用酸性脂质相对凝血酶活性(%)对照CS胆固醇SulfatideGalCerGM3由表3可见，在体外CS几乎可以完全抑制凝血酶的活性，而其他酸性脂质除GM3对凝血酶活性稍有抑制外，其余对凝血酶活性无抑制作用。3讨论如本文结果所示，妊娠妇女血清中CS含量随孕周增加而显著升高，其原因可能为妊娠期间类固醇类

8、激素水平增高有关。因为报道证明与硫酸类固醇类的同化和异化作用相关的酶受类固醇类激素的调解46。各组织(如胎盘绒毛)中CS合成增加是由于妊娠激素水平增加所致。胎盘绒毛中CS含量随孕周增加而显著性增高(P0.01)，妊娠晚期含量为早期的6.2倍，所以胎盘绒毛中CS可能为血中CS的来源之一。血液中CS增加还可能由于其他各种病理性原因所致，如鱼鳞癣、肝硬化、高胆固醇血症、甲亢等。CS在组织中蓄集的原因是由于类固醇硫酸脂酶(steroid sulfatase)的缺乏，或是由于CS合成的增加所致7，8。血液中的CS还与血液凝固有关9，10。CS作用于第凝血因子和前激肽释放酶而缩短凝血时间。CS还能促进血小

9、板合成血栓素B2(thromboxane B2，TXB2)。妊娠期间，特别是妊娠晚期，血液处于高凝状态。妊娠期间血液的高凝状态是一种生理过程，对维持妊娠具有一定的生理意义。CS可能是导致妊娠期间血液高凝状态的原因之一。血栓素A2(thromboxane A2，TXA2)使血小板内cAMP减少，因而有很强的聚集血小板、收缩血管的作用。TXB2为TXA2代谢产物，无活性。CS促进TXB2的形成增加，从而降低TXA2的作用，这对抑制血管收缩，降低血小板聚集，减少微血栓形成有着重要意义，特别是胎盘绒毛局部CS高度蓄积对维持胎盘局部微循环的通畅将发挥重要作用。本实验还证明，在体外CS可以几乎完全抑制凝血

10、酶活性，而血中其他的酸性脂质如GM3、sulfatide等则无此作用。这说明CS具有促进和抑制凝血的双重作用。血凝是一种动态平衡。CS在调解其平衡过程中如何发挥作用还尚不清楚，将有待于进一步研究解决。作者单位：林蓓(中国医科大学第二临床学院妇产科沈阳，110003)欧阳玲(中国医科大学第二临床学院妇产科沈阳，110003)张淑兰(中国医科大学第二临床学院妇产科沈阳，110003)参考文献1，Iwamori M,Sawada K,Hara Y,et al.Neutral glycophingolipids and ganlioside of bovine thyroid.J Biochem,19

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